TLR9激动剂CpG-ODN对HepG2肝癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨Toll样受体9(TLR9)激动剂未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤核苷酸序列(Cp G-ODN)对Hep G2肝癌细胞增殖及侵袭的影响。方法应用不同浓度的Cp G-ODN作用于肝癌细胞株Hep G2不同时间,采用实时荧光定量PCR法检测Hep G2中TLR9mRNA表达情况,MTT法检测Hep G2细胞的增殖变化,Transwell法检测其侵袭能力变化。结果 Cp G-ODN组(4、16μg·m L-1)与阴性对照组比较可增加Hep G2细胞中TLR9mRNA的表达;Cp G-ODN(1、4、16μg·m L-1)激动TLR9后可促进Hep G2细胞增殖,且以48h最为显著,并存在剂量依赖关系;Cp G-ODN(4、16μg·m L-1)激动TLR9可增强Hep G2细胞的侵袭能力(P均<0.05)。结论 TLR9表达上调可促进肝癌细胞增殖和侵袭。

STAT3诱骗寡核苷酸对肝癌细胞Hep G2的影响

目的观察应用诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)靶向阻断信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of tran-scription 3,STAT3)对肝癌细胞Hep G2的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外合成的STAT3 decoy ODNs在脂质体的介导下转染Hep G2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率;通过细胞生长曲线观察对细胞增殖的影响;annexin-V/PI染色检测细胞凋亡;实时定量PCR检测STAT3下游基因bcl-xL、cyclin D1和c-myc的表达。结果荧光显微镜和流式细胞仪检测表明decoy ODNs能有效转染Hep G2细胞,转染效率达90.2%;生长曲线显示decoy ODNs有效抑制Hep G2细胞增殖;decoy ODNs处理细胞48 h后,流式细胞仪annexin-V/PI染色检测到早期细胞凋亡率为(22.86±2.63)%,晚期细胞凋亡率为(23.00±2.76)%;实时定量PCR证实decoy ODNs下调bcl-xL、cyclin D1和c-myc mRNA表达。结论STAT3 decoy ODNs能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调STAT3下游bcl-xL、cyclin D1和c-myc基因的表达相关。

贵州优良地域种斑蝥体内结合斑蝥素对人肝癌HepG2细胞周期的影响

目的研究贵州罗甸县城区及茂井镇地区南方大斑蝥(Mylabris phalerata Pallas)和黄黑小斑蝥(Mylabris cichorii Linnaeus)体内结合斑蝥素对人肝癌Hep G_2细胞周期的影响。方法斑蝥三氯甲烷提取物的水浸液获取结合斑蝥素;应用倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化;采用PI标记结合流式细胞术检测细胞周期的变化。结果罗甸县城区及茂井镇斑蝥的结合斑蝥素均能使细胞数量明显减少,出现固缩、体积变小等现象;茂井镇南方大斑蝥和黄黑小斑蝥可使S期细胞比率下降,G_2/M期细胞比率明显增加,出现G_2/M期阻滞;罗甸城区南方大斑蝥和黄黑小斑蝥可使G_0/G_1期细胞比率明显增加,S期细胞比率下降。结论贵州罗甸县城区南方大斑蝥、黄黑小斑蝥及茂井镇地区南方大斑蝥、黄黑小斑蝥4种来源斑蝥体内结合斑蝥素可能是通过阻滞人肝癌Hep G_2细胞周期而抑制其生长。

声诺维超声辐照改善超顺磁性氧化铁纳米粒子对肝癌细胞Hep-G2体外标记效果

目的探讨声诺维超声辐照改善体外超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)对肝癌细胞Hep-G2标记效果的可行性。方法 7组不同浓度的SPIO在体外与Hep-G2细胞混合,在加入声诺维后采用超声处理1 min,然后监测细胞标记效率、细胞活性和增殖能力。挑选标记效果好,且增殖能力影像小的375μg[Fe]/mL SPIO浓度组,分别以细胞密度为1×102,1×103,1×104,1×105,1×106,及1×107(个细胞/mL),用临床1.5T磁共振进行扫描。结果实验组中所有7个亚组的标记率都超过90%,两组对照组标记率约为2%。Hep-G2细胞活率随SPIO浓度增加而减低,其在500μg[Fe]/mL、625μg[Fe]/mL、750μg[Fe]/mL和875μg[Fe]/mL的活率分别为59.7%±7%、47.76%±9%、46.27%±10%和43.28%±7%,提示当SPIO浓度达到或大于500μg[Fe]/mL时对HepG2细胞具有明显毒性,但其增殖活性并无明显差异。体外磁共振扫描结果显示T2W1序列信号减低,能敏感显示SPIO浓度的变化;其信号强度与细胞浓度呈负相关(P<0.05)。结论声诺维超声辐照确实能改善体外SPIO对肝癌细胞Hep-G2的标记效率,MRI可切实、敏感地对其进行检测。

放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2蛋白表达水平的影响。方法:6MV-X射线照射细胞,采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2的表达。结果:Bax和Bcl-2的表达在照射时间和照射剂量之间存在交互作用(F=1．733,P=0．042;F=1．700,P=0．048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,Hep-G2细胞中Bax的表达达高峰、Bcl-2的表达至低谷。结论:放射线可能通过促进Bax表达和抑制Bcl-2表达诱导肝癌细胞凋亡。

H_2O_2对人肝癌细胞Hep-G2凋亡的影响

探讨不同浓度H2O2对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的影响.使用不同浓度(0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mmol/L)的H2O2作用于Hep-G2细胞12h,通过丫啶橙-碘化丙啶(AO/PI)双重荧光染色法对Hep-G2细胞的形态变化进行观察;再进行DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳观察DNA断裂情况.结果表明:不同浓度的H2O2处理后在荧光显微镜下可以区分正常对照细胞(0mmol/L)、染色质凝聚的早期凋亡细胞(0.01、0.05mmol/L)、细胞质皱缩和细胞核解体的晚期凋亡细胞(0.10、0.20mmol/L)和降解细胞(0.50mmol/L),在一定时间内随H2O2浓度的增加而增大,呈现浓度依赖性.DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA形成弥散条带,从而表现出体外细胞凋亡的特征.因此,H2O2可以诱导Hep-G2细胞凋亡.

绿茶多酚诱导肝癌细胞凋亡时Caspase-3蛋白活性与mRNA的变化

[目的]研究绿茶多酚(EGCG)诱导肝癌细胞Hep-G2凋亡过程中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白活性与mRNA的变化。[方法]100 mg/L的EGCG处理Hep-G2细胞48 h,DAPI染色观察细胞形态学,用MTT检测EGCG对Hep-G2细胞生长的影响,流式细胞技术Annexin V-FITC PI法检测不同浓度EGCG诱导细胞的凋亡率,分光光度法检测Caspase-3的活性,用半定量RT-PCR法检测Caspase-3的mRNA变化。[结果]100 mg/L的EGCG作用Hep-G2细胞48 h后,荧光显微镜观察到细胞出现核碎裂和凋亡小体;MTT法检测到EGCG对肝癌细胞Hep-G2的生长均有显著抑制作用,呈浓度依赖性;Annexin V-FITC PI法检测到不同浓度的EGCG作用与肝癌细胞Hep-G2后,凋亡率较对照组明显升高,并随诱导浓度的增加而增加;不同浓度的EGCG处理组和不同时间EGCG处理组的Caspase-3活性和mRNA表达量均比对照组明显升高。[结论]Caspase-3蛋白活性与mRNA上调是EGCG诱导肝癌细胞凋亡的的重要原因和机制。

杨黄总黄酮对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究杨黄总黄酮对人肝癌Hep G2细胞凋亡的影响。方法:制备杨黄总黄酮并进行定性、定量分析。以5-氟尿嘧啶(50μg/ml)与不同质量浓度杨黄总黄酮(10、20、40、80、100μg/ml)作用于Hep G2细胞24 h后,采用MTT法测定细胞活力以计算抑制率与半数抑制浓度(IC50)。以不同质量浓度杨黄总黄酮(40、80、100μg/ml)作用于Hep G2细胞72 h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果:杨黄总黄酮含量为464.5 mg/g。10、20、40、80、100μg/ml杨黄总黄酮对细胞的抑制率分别为(6.46±1.74)%、(8.19±1.08)%、(23.19±2.77)%、(42.09±1.46)%和(58.18±1.89)%,抑制率与其质量浓度呈正相关,IC50为93.9μg/ml。40、80、100μg/ml杨黄总黄酮作用于细胞72 h后细胞凋亡率增加,并与质量浓度呈正相关。随着杨黄总黄酮质量浓度增加,S+G2期细胞比例增加。结论:杨黄总黄酮可诱导Hep G2细胞凋亡,其机制可能与将细胞阻滞于S+G2期有关。

调节糖脂代谢紊乱中药多靶点筛选的研究

[目的]观察几种中药成分对人肝癌细胞株Hep-G2糖脂代谢相关基因,包括细胞血管生成素相关生长因子(AGF)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、低密度脂蛋白受体(LDLR)和胰岛素受体底物2(IRS-2)mRNA的影响。[方法]培养人肝癌细胞株Hep-G2,以实时定量逆转录聚合酶链反应(Real Time RT-PCR)法检测中药成分对AGF、G-6-Pase、LDLR和IRS-2 mRNA的影响。[结果]小檗碱可以显著提高Hep-G2细胞AGF和LDLR mRNA的表达,姜黄素可以降低G-6-Pase mRNA的表达。[结论]小檗碱和姜黄素可能通过对糖脂代谢相关基因的调节而对糖尿病有一定的治疗作用。

有机污染物对人肝肿瘤细胞的遗传毒性

目的 用人肝肿瘤细胞HepG2／体外微核试验检测3种持久性有机污染物（POPs）Aroclor1254、毒杀芬和滴滴涕的遗传毒性。方法 人肝肿瘤细胞HepG2经Aroclor1254、毒杀芬和滴滴涕染毒24h，继续在补充细胞松弛素B（3μg/ml）的培养液中培养24h后，计数1000个双核细胞中的微核。结果 20，40μmol／L毒杀芬处理HepG2细胞的微核率与溶剂对照相比显著增加（P〈0.01，P〈0．01）；经Aroclor1254（23～184μmol／L）和滴滴涕（17．8～60μmol／L）处理的HepG2细胞的微核率与溶剂对照相比，差异无统计学意义。结论 Arodor1254和滴滴涕未显示对HepG2细胞明显的遗传毒性；毒杀芬可诱导HepG2细胞遗传损伤，有必要进一步评价其对人类健康的潜在危害。

皮氏蛾螺黏液粗蛋白对肝癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

为明确皮氏蛾螺Volutharpa ampullacea Perryi黏液粗蛋白的抗肿瘤作用,以人肝癌细胞Hep-G2和H荷瘤小鼠为研究对象,采用显微观察、流式细胞术和qRT-PCR等方法,通过体外和体内试验,分析了皮氏蛾螺黏液粗蛋白对人肝癌细胞Hep-G2增殖及H荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。结果表明:与未经处理的对照组相比,0.66 g/L皮氏蛾螺黏液粗蛋白处理组Hep-G2细胞在形态上呈现变形严重、核浓缩且核膜模糊、胞质出现空泡、线粒体肿胀及细胞表面微绒毛显著减少等现象;0.66 g/L皮氏蛾螺黏液粗蛋白处理组Hep-G2细胞中G2/M期细胞比例显著高于对照组(P<0.05);0.66 g/L皮氏蛾螺黏液粗蛋白处理12 h时,小鼠Hep-G2细胞中的细胞周期蛋白基因(CCNB1)和细胞周期蛋白依赖性激酶基因(CDK1)相对表达水平显著低于对照组(P<0.05);0.66 g/L皮氏蛾螺黏液粗蛋白注射组(预防组和治疗组,注射剂量为30 mg/kg)荷瘤小鼠体内肿瘤的平均质量极显著低于模型对照组(P<0.01)。研究表明,皮氏蛾螺黏液粗蛋白在体内外均有抗肝癌作用,具有成为海洋源抗肝癌药物的开发潜力。

Fe_2O_3纳米颗粒对人肝癌细胞游离钙的影响

[目的]探讨三氧化二铁(Fe2O3)纳米颗粒对人肝癌细胞(HepG2细胞)形态学和游离钙([Ca2+]i)的影响,为研究Fe2O3纳米颗粒诱导细胞凋亡的机制提供依据。[方法]以不同浓度(0.173、0.347、0.694g/L)的Fe2O3纳米颗粒对HepG2细胞染毒1、12、24h,用激光扫描共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca2+]i荧光强度的变化。[结果]与对照组相比,染毒不同时间各染毒组细胞内[Ca2+]i含量差异均有统计学意义(P<0.05);染毒不同浓度时,Fe2O3纳米颗粒均能不同程度地引起HepG2细胞的形态学改变及其细胞内[Ca2+]i的升高。0.347、0.694g/L组染毒不同时间点的平均荧光强度分别为127.33±20.13、108.88±19.15、144.00±13.86和119.67±1.15、122.35±11.47、186.40±17.34,均明显高于对照组54.33±6.43,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]HepG2细胞凋亡可能与Fe2O3纳米颗粒引起的细胞[Ca2+]i升高有关。