益生菌发酵复方中草药对妊娠后期奶牛血清生化、抗氧化和生殖激素指标的影响

本研究旨在探究复方中草药经益生菌发酵后的效果以及益生菌发酵复方中草药对妊娠后期奶牛血清生化、抗氧化和生殖激素指标的影响。采用枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌制备发酵复方中草药。选取处于妊娠后期体况良好的荷斯坦奶牛24头,随机分为3个组,每组8个重复,每个重复1头牛。各组分别在基础饲粮中添加0(对照组)、1%和2%的发酵复方中草药。预试期15 d,正试期45 d。结果表明:1)与未发酵复方中草药相比,发酵复方中草药的粗蛋白质和粗纤维含量极显著升高(P<0.01)。2)与未发酵复方中草药相比,发酵复方中草药的总多糖、总黄酮和总皂苷含量极显著升高(P<0.01),总多酚含量极显著降低(P<0.01)。3)与对照组相比,饲粮中添加1%发酵复方中草药显著提高奶牛血清高密度脂蛋白胆固醇含量(P<0.05),显著降低血清谷草转氨酶活性(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加1%发酵复方中草药显著提高奶牛血清谷胱甘肽过氧化物酶活性(P<0.05);饲粮中添加1%和2%发酵复方中草药显著或极显著提高奶牛血清总抗氧化能力(P<0.05或P<0.01),显著降低血清丙二醛含量(P<0.05)。5)与对照组相比,饲粮中添加1%和2%发酵复方中草药奶牛显著提高奶牛血清孕酮含量(P<0.05),显著或极显著降低血清雌二醇含量(P<0.05或P<0.01);饲粮中添加2%发酵复方中草药显著提高奶牛血清促黄体生成素含量(P<0.05)。综上所述,复方中草药经益生菌发酵后具有更高的生物活性。饲粮中添加益生菌发酵复方中草药能调控妊娠后期奶牛的生殖激素含量,增强奶牛的抗氧化能力。

基于血清药物化学和网络药理学的知母-黄柏药对盐炙前后治疗2型糖尿病药效物质基础及作用机制分析

目的基于液质联用技术对生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对水提液灌胃给药后大鼠入血成分分析,结合网络药理学预测盐炙在知母-黄柏药对治疗2型糖尿病的影响,并通过体外实验进行初步验证。方法大鼠连续灌胃给药生知母-生黄柏药对、盐知母-盐黄柏药对水提液2次,中间间隔1 h,末次给药60 min后腹主动脉取血,用甲醇沉淀蛋白法处理后复溶,采用色谱柱Shim-pack GIST C 18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相A相为0.1%甲酸水,B相为0.1%甲酸-乙腈;梯度洗脱,正、负离子全扫描模式,质量扫描范围m/z 100~1500。结合数据库二级谱图及文献,分析鉴定生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对的入血成分。检索2型糖尿病疾病靶点,对入血成分和疾病的交集靶点进行蛋白质互作网络分析、GO、KEGG通路富集分析,构建“入血成分-靶点”网络图,运用AutoDock软件对筛选出的核心成分和核心靶点进行分子对接验证。验证实验以HepG2细胞为实验对象,胰岛素联合高糖诱导胰岛素抵抗模型,CCK8法检验盐炙前后知母-黄柏药对对细胞增殖影响,Western blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果生知母-生黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出15种原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐知母-盐黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出17个原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐炙后入血成分中芒果苷、小檗碱、3-异丁基戊二酸等成分含量较生品高。KEGG和GO结果显示,知母-黄柏药对治疗2型糖尿病可能与RNA聚合酶的转录调控、炎症反应、AGE-RAGE、PI3K-AKT、胰岛素抵抗等通路有关。细胞实验表明盐炙前后知母-黄柏药对可以上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT4蛋白表达,且盐炙组效果优于生品组。结论初步阐释了知母-黄柏药对盐炙前后入血成分,阿魏酸、小檗碱、小檗红碱、芒果苷与mTOR、SIRT1、EGFR、PPARA等可能是知母-黄柏药对盐炙后增强2型糖尿病治疗效果的主要成分和靶点,其机制可能是增强了PI3K-AKT等相关通路的作用,为知母-黄柏药对盐炙前后药效物质基础研究及临床应用提供重要参考。

活血化瘀方药联合地诺孕素治疗子宫内膜异位症有效性与安全性Meta分析

目的 系统评价活血化瘀方药联合地诺孕素治疗子宫内膜异位症的有效性与安全性。方法 计算机检索中国知网(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、万方数据知识服务平台、中文科技期刊数据库(VIP)、中国临床试验注册中心、PubMed、Web of science、Embase、Cochrane Library等关于活血化瘀方药联合地诺孕素治疗子宫内膜异位症的随机对照试验,检索时限为建库起至2022年11月。采用Cochrane协作网偏倚风险评估工具进行方法学质量评价,运用RevMan 5.4和Stata 16.0软件进行Meta分析。结果 共纳入9项研究,1078例患者,其中试验组539例,对照组539例。Meta分析结果显示,活血化瘀方药联合地诺孕素治疗在提高总有效率[RR=1.24,95%CI(1.17,1.30),P<0.000 01]、减小子宫内膜异位囊肿直径[MD=-1.01,95%CI(-1.63,-0.39),P=0.001]、降低疼痛视觉模拟评分(VAS)[MD=-1.68,95%CI(-2.67,-0.70),P<0.000 01]、降低糖类抗原125[MD=-17.05,95%CI(-23.44,-10.66),P<0.000 01]、降低雌二醇水平[MD=-22.91,95%CI(-25.34,-20.48),P<0.000 01]、降低孕酮水平[MD=-0.22,95%CI(-0.25,-0.19),P<0.000 01]、降低血清内皮生长因子[MD=-23.97,95%CI(-30.96,-16.99),P<0.000 01]、降低基质金属蛋白酶-2[MD=-42.29,95%CI(-45.68,-38.89),P<0.000 01]、降低基质金属蛋白酶-9[MD=-118.99,95%CI(-172.97,-65.02),P<0.000 01]、降低半乳糖凝集素-3[MD=-1.35,95%CI(-1.83,-0.87),P<0.000 01]、降低复发率[RR=0.28,95%CI(0.13,0.59),P=0.000 8]方面均优于单用地诺孕素治疗。总有效率漏斗图及Egger’s检验结果提示,不存在明显的发表偏倚。结论 活血化瘀方药联合地诺孕素治疗子宫内膜异位症疗效和安全性良好,但仍需要更多设计严谨的高质量随机对照试验提供证据。

质疑血清药理学,加强多层次半体内实验研究

质疑血清药理学的主要理由包括①从胃肠吸收的中药成分在体内是进入血浆,而不是血清;②凝血过程有一系列酶生成,同时刺激白细胞释放溶酶,这些酶可能降解某些中药成分;③凝血酶刺激血小板与白细胞释放大量生物活性物质;④凝血过程伴有纤溶、补体、激肽等系统活化;⑤制备与灭活血清过程会导致中药成分与中药介导体内释放物质损失。新近利用HPLCMS指纹图谱分析与抗白血病细胞增殖实验证明利用血清药理方法可能带来错误结论。建议加强中药多层次半体内实验研究,其中血浆药理方法可能避免血清药理方法的弊病。

中草药对鲤血清和免疫器官溶菌酶活性的影响

用添加刺五加、蒲公英、枸杞子、金银花和大蒜等单方中草药的配合饲料饲喂鲤(Cyprinus carpio L.),在开始饲喂后的第15d和第30d测定其血清和免疫器官(头肾、中肾、脾)的溶菌酶活性。结果显示,15d时,仅脾溶菌酶活性刺五加组和对照组有显著差异。30d时,血清溶菌酶活性蒲公英组、金银花组和大蒜组与对照组差异显著,头肾溶菌酶活性金银花组和对照组差异显著,中肾溶菌酶活性金银花组和大蒜组与对照组差异显著,脾溶菌酶活性所有试验组和对照组相比均有显著差异。

五种中药对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用

目的:观察单味中药黄芪、丹参、淫羊藿及复方右归饮药物血清和煎剂以及雪莲花药物血清及其醇提液对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用。方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌。按10倍于任用剂量进行SD大鼠灌胃,心脏采血,制备血清。取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入含药血清、煎剂及雪莲花醇提液。药物血清分为15%1、0%5、%和1%浓度,其煎剂及雪莲花醇提液浓度分为10-2、10-3、10-4、10-5,作用3天后用MTT法测定细胞活力。结果:雪莲花含药血清及其醇提液在4个浓度组均显示促进细胞增殖。结论:雪莲花具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。

中药对软骨细胞代谢的影响

采用关节软骨细胞培养和同位素标记的方法观察含药血清对软骨细胞代谢的影响 ,结果中药补肾方和柔肝方具有促进兔关节软骨细胞 DNA、胶原和蛋白多糖的合成。

中药复方物质基础研究的现状与进展

中药复方在中医药物治疗中广泛应用 ,其各种复杂成分间的相互作用及确切药理机制目前大多尚不完全清楚。中药复方制剂的成分和药效不是单味药物的简单组合 ,对其物质基础的研究对探讨中药复方配伍药理机制十分重要。现对有关中药复方的组合效应及量比关系、复方含药血清、复方化学成分研究。

老年大鼠含淫羊藿血清对成骨细胞的增殖与分化的影响

目的 观察老年雄性大鼠含淫羊藿血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响。方法 雄性 ,19月龄SD大鼠 2 4只 ,随机分为 3组 ,分别为生理盐水组、淫羊藿低剂量组 (1g ml)、淫羊藿高剂量组 (2g ml) ,按 0 5ml 10 0g的量 ,每日两次 ,连续灌胃 1个月 ,处死前 1h ,再灌胃一次 ,取血清 (灭活 ,过滤 ) ,最终稀释成 1∶2 0、1∶4 0、1∶80加入新生大鼠颅骨成骨细胞体系 ,用MTT法检测细胞增殖 ,另外 ,分别在第 2天、第 3天、第 4天动态观察细胞生长过程 ,做生长曲线和检测分化指标ALP。结果 老年大鼠含药血清在 1∶80稀释比 ,MTT测得的OD值给药组高于对照组 (P <0 0 5 )且以高剂量组高于低剂量组 (P <0 0 5 ) ,生长曲线表现为 ,在第 2天各组无明显差别 ,从第 3天开始 ,含药血清增殖速度加快 ,仍以高剂量组最快。ALP检测结果 ,含药血清OD值高于对照组 (P <0 0 5 ) ,但不同剂量之间没有差异 (P >0 0 5 )。结论 老年雄性SD大鼠连续服用淫羊藿水提液 1个月 。

中药本草九代对小鼠血清生物学活性及T、B细胞增殖、分化的影响

小鼠腹腔注射本草九代后，血清补体溶血活性增强，溶血效价由１／８升高到１／３２；血清对免疫复合物形成的抑制作用增强，抑制率由１９３％上升到４２３％；血清对免疫复合物的溶解能力增强，溶解率由９１％上升到２５１％。此外，本草九代还能增强小鼠免疫功能，实验组小鼠Ｔ淋巴细胞转化率和抗体形成细胞数。

益气清热方及其拆方的兔含药血清对Ⅰ型幽门螺杆菌致GES-1细胞凋亡的影响

目的:观察益气清热方及其拆方对Ⅰ型Hpylori致GES-1细胞凋亡的影响,探讨益气清热法治疗Hpylori感染的机制.方法:按生理盐水、阿莫西林、益气清热方、黄芪、黄芩分组,制备兔含药血清.建立Ⅰ型Hpylori致GES-1细胞病变的模型,分别加入100mL/L各组兔含药血清的完全培养液,继续培养48h,收集与固定细胞,用流式细胞仪和Hoechst33258荧光染料检测细胞凋亡情况.结果:经Ⅰ型Hpylori感染后,GES-1细胞凋亡率显著增加,阿莫西林、黄芪、黄芩及益气清热方均能降低其凋亡率(1.3633±0.4229,2.1925±0.6779,1.7967±0.6987,1.4740±0.4156vs16.6229±8.5087,P<0.01或0.05),Hoechst33258荧光染料的检测结果与流式细胞仪检测结果有较好的一致性.结论:益气清热方可能通过抑制细胞的凋亡,减轻Hpylori对胃上皮细胞的损伤,维持细胞的正常生长,达到治疗目的.

消岩汤药物血清对A549/DDP多药耐药逆转作用的研究

[目的]探讨消岩汤药物血清对接种S180昆明小鼠肿瘤的抑制作用,及对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/耐顺铂(DDP)的耐药逆转作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,观察消岩汤对小鼠S180移植肿瘤生长的影响;以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨消岩汤对肺癌耐药细胞的多药耐药逆转作用。[结果]消岩汤高、低剂量组的抑瘤率分别是48.36%和27.87%;消岩汤荷瘤动物含药血清高、低剂量组分别与DDP合用时,对耐药细胞A549/DDP的杀伤作用分别是DDP组的1.78倍和1.57倍。[结论]消岩汤可改善小鼠生活质量,拮抗恶病质,并能够抑制肿瘤生长;消岩汤含药血清对A549及A549/DDP均有生长抑制作用,且能增强DDP对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用,具有耐药逆转作用。

中草药添加剂对生长肥育猪血液生理生化指标的影响

选用 2 0kg左右的“杜长大”三元杂交猪 12 0头 ,分成对照组、中药组、中药 +西药组 ,每组 4个重复。测定添加中草药添加剂 ,对生长育肥猪血清中TP ,ALB ,GLO ,CHO ,TG3 ,HDL ,LDL和VLDL的含量以及GPT ,GOT和ALP活性的影响。结果表明 :中药组与对照组相比 ,在 2 0～ 30kg和 30～ 70kg阶段 ,血清TP含量分别增加了 13 74 % (P <0 0 5 )和 11 13% (P <0 0 5 ) ;GLO含量分别提高了 35 79% (P <0 0 5 )和 19 88% (P <0 0 5 ) ;CHO含量分别提高了19 6 4 % (P <0 0 5 )和 12 39% (P <0 0 5 ) ;TG3 含量分别提高了 2 2 35 % (P <0 0 5 )和 2 1 4 3% (P <0 0 5 ) ;在 70～ 110kg阶段 ,血清TP ,GLO ,CHO和TG3 含量各组之间差异不显著 ;ALB含量在不同生长阶段 ,各组之间差异都不显著 (P>0 0 5 ) .在 2 0～ 30kg ,30～ 70kg和 70～ 110kg阶段 ,GPT活性分别提高了 10 75 % (P <0 0 5 ) ,13 39% (P <0 0 5 )和12 2 6 % (P <0 0 5 ) ;GOT活性分别提高了 10 88% (P <0 0 5 ) ,14 16 % (P <0 0 5 )和 11 13% (P <0 0 5 ) ;ALP活性分别提高了 33 5 0 % (P <0 0 5 ) ,12 14 % (P <0 0 5 ) 12 2 1% (P <0 0 5 ) .LDL ,VLDL的含量仅在 70～ 110kg阶段 ,分别比对照组高了 18 5 1% (P <0 0 5 ) 。

含中药龙血竭的血清处理方法研究

目的研究含中药龙血竭的血清处理方法。方法采用适宜蛋白沉淀剂并以有机溶剂提取处理含中药龙血竭的血清样品,测定含药血清的HPLC图谱,以龙血竭溶液中5个特征成分的峰面积为对照计算提取率,确定制备含药血清的最佳方法。结果通过乙腈沉淀蛋白,采用乙酸乙酯进行提取,可使含药血清中龙血竭特征成分的提取率达到80%以上。结论本法可作为龙血竭含药血清的制备方法。

益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5%CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显(P<0.05),第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异(P<0.05),到第7天呈下降趋势。BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大(71.39±4.98%);第4、6天时,益气活血方组达最大(66.40±1.47%),与其它三组比较P<0.01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。

清脑益智方药血清在缺氧培养条件下对人胚大脑神经细胞的影响

目的 :探讨清脑益智方药血清在缺氧条件下 ,对体外培养人胚脑神经细胞活性、自由基清除及细胞超微结构保护方面等作用。方法 :在缺氧条件下 (95 %N2 + 5 %CO2 ,12 0min) ,造成胚脑神经细胞损伤模型 ,应用清脑益智方药处理人血清 ,以牛磺酸为对照组进行比较性研究。结果 :清脑益智方药血清对缺氧损伤的神经细胞培养液中异常增高的LDH释出量有显著的降低作用 ,提高了SOD活力和NSE活性 ,降低LPO含量 ,有保护神经细胞的超微结构等作用。结论 :表明清脑益智方药人血清在缺氧培养条件下 ,对人胚大脑神经细胞有一定的保护作用。

中药穴位敷贴对小鼠实验性病毒性心肌炎的疗效观察

为研究中药穴位敷贴治疗病毒性心肌炎的疗效 ,将小鼠以CVB3 病毒感染制成病毒性心肌炎模型后 ,随机分为对照组与治疗组。治疗组用中药 (黄芪、沙参、党参、丹参、冰片 )穴位敷贴 ,对照组不加以治疗 ,30d后分别观察小鼠心肌组织病理学改变和超微结构改变并检测血清中CK MB含量。结果 :治疗组小鼠心肌组织病理改变及超微结构改变均较对照组减轻 ,血清CK MB含量明显低于对照组 (P <0 .0 5 )。

中药益发复方含药血清对毛囊干细胞增殖及K19、β1整合素mRNA表达的调控作用

目的本研究主要观察中药益发复方含药血清对大鼠毛囊干细胞增殖及K19、β1整合素mRNA表达水平的调控作用。方法自制益发复方含药血清；取7～8日龄Wistar大鼠，分离隆突区毛囊，用二步消化酶法获取毛囊外根鞘细胞，再用Ⅳ型胶原黏附法分离毛囊干细胞。将分离得到的毛囊干细胞分为实验组a1-β3（培养液中分别加入10％高、中、低剂量的益发含药血清）、对照组b（培养液中加入10％空白对照血清）及对照组c只加无血清角质细胞培养液（KSFM）。用MTY法制作生长曲线，观察各组培养细胞生长规律和特性；运用K19、β1整合素单克隆抗体免疫组化鉴定培养细胞；RT—PCR检测各组培养细胞K19、β1整合素mRNA表达水平。结果免疫组化鉴定结果显示Ⅳ型胶原黏附细胞符合毛囊干细胞特征。实验组毛囊干细胞克隆形成较早、较多，MTY法检测显示益发血清组毛囊干细胞增生速度明显优于对照组；实验组毛囊干细胞K19、β1整合素基因表达水平较对照组显著提高（P〈0．05），中剂量的益发含药血清（1．65g／mL）作用最为明显。结论中药益发复方能促进毛囊干细胞增生及特异性标记物K19、β1整合素基因表达，这可能是其治疗脱发病及促进毛发生长的药理机制之一。

中药药物血清的制作方法探讨

In vitro experimental research the real process of metabolism in the body can be accessible more easy by using Chinese herb serum.But there are many questions which can’t be explained or needs normalized about the preparation of Chinese herbal serum.In the relationship between animal species and drug serum,the author proposed to cultivate the homologous cells with homologous serum to enhance the rate of wall-attachment.It is suggested that the time of giving herbs to animal for proparation is96h.The herbs should be given once a day for3days at first and at30,24,18,12,6,3,1.5,0.5hour before collectiving blood specimen again.It is also necessary for making herbal serum inactived.

甘草次酸对中药活性成分与血清蛋白结合的影响

目的研究甘草次酸(GA)对中药活性成分与牛血清白蛋白(BSA)结合的影响。方法利用多种光谱技术和毛细管电泳前沿分析方法测定,用Stern-Volmer方程和Scatchard plot等对数据进行处理。结果得到甘草次酸与BSA的结合常数、位点数等结合特征,中药活性成分与BSA结合的常数和甘草次酸对这些成分结合常数的影响。结论甘草次酸与牛血清蛋白有高、低两类结合位点,总的结合位点数为8,蛋白与GA浓度之比为0.38时,结合率已高达95%。GA使中药活性成分与牛血清蛋白的结合常数下降最大达67%,可能对它们的药理作用产生影响。