应用原位聚合酶链反应检测淋病患者HSV-Ⅱ感染情况的报告

为了解淋病患者ＨＳＶⅡ的感染情况，应用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）和ＰＣＲ技术对５８例淋病患者进行ＨＳＶⅡ检测。结果两种方法ＨＳＶⅡＤＮＡ阳性检出率均为５３．４５％（３１／５８）。ＩＳＰＣＲ显示，１１例有皮损者中，９例阳性信号存在于上皮细胞核及胞浆，既往有疱疹皮损者６例，阳性信号均存在于细胞核，４１例无明显皮损者，１６例阳性，其中１２例阳性信号在细胞核，４例在胞核及胞浆。结果提示，淋病患者合并有高的ＨＳＶⅡ感染率。应用ＩＳＰＣＲ不仅可以敏感特异地检测ＨＳＶⅡ，而且可以定位。

大青叶提取物抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外实验研究

目的检测大青叶提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用。方法以Vero细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT比色法来测定药物的细胞毒性、药物对HSV-Ⅱ的直接灭活作用,以及药物抗HSV-Ⅱ对细胞的吸附和对HSV-Ⅱ在细胞内复制增殖的抑制,算出药物抗HSV-Ⅱ的治疗指数。结果大青叶提取物在体外对HSV-Ⅱ无直接灭活作用,也无抗HSV-Ⅱ吸附细胞的作用,但能抑制HSV-Ⅱ在细胞内的复制增殖,其治疗指数达3.56。结论大青叶提取物在体外有一定的抗HSV-Ⅱ感染效果,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制增殖而发挥作用。

下调细胞P21^(WAF1/CIP1)基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制

为了揭示细胞P21蛋白在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type2,HSV-2)复制中的作用,通过用HSV-2感染和感染前用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制P21基因表达,应用Western印迹方法检测宿主细胞和病毒蛋白水平,用终点滴定法测定病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)等3个方面,揭示细胞P21蛋白水平的变化对病毒复制的影响.结果表明,HSV-2在细胞内复制时可引起P21蛋白水平增高;而用特异性siRNA下调细胞P21基因表达时,可显著地抑制HSV-2gB蛋白水平,减少培养细胞上清液中病毒TCID50.提示P21蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.

知母宁的体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用

目的检测知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)作用。方法以Vero细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,采用中性红染色法测定不同药物加入方式下知母宁的体外抗HSVⅡ有效率,并检测其抑制病毒作用的时效关系及对病毒感染性的影响。结果知母宁表现出对HSVⅡ333的综合抑制作用和抑制病毒吸附后的后续复制增殖作用,其抗病毒有效率(ER%)最高达80%,这两种作用的半数有效浓度(EC50)均约为0.8mg/ml。知母宁浓度≥2.08mg/ml时能显著抑制HSVⅡ,ER%最高达95%。知母宁还有较弱的预防病毒吸附作用。知母宁抗病毒作用的时效关系研究表明,随药物作用时间延长,低浓度药物抗病毒有效率呈减小趋势,在高浓度时(≥2.08mg/ml)其病毒抑制强度基本维持稳定。随药物作用时间延长,知母宁可明显削弱病毒的感染性,知母宁组病毒的-lgTCID50值较病毒对照组的下降值呈增大趋势,其下降百分比维持稳定,约为40%。结论知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型效果好,且其抗病毒作用具有多个作用点。

家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒作用

报道家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液具有明显抗ＨＳＶ－２的作用。在Ｖｅｒｏ细胞上，其有一定的细胞毒性，但随浓度降低而毒性减少；明显地抑制ＨＳＶ－２所致细胞病变；对ＨＳＶ－２的抑制指数为３．０￣４．０；能有效地抑制ＨＳＶ－２在细胞内复制。在体实验表明该药对ＨＳＶ－２所致小鼠阴道炎有明显治疗作用。该药小鼠ｉｍ和ｉｖ的最大耐受剂量均大于５×１０＾７Ｉｕ／ｋｇ。

女性原发性生殖器疱疹中HSV-Ⅱ的检测及意义

目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)与女性原发性生殖器疱疹(GH)的相关性及意义。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测患者血清中HSV-Ⅱ抗体以及分泌物中的HSV-Ⅱ抗原。结果HSV-Ⅱ中IgG均阴性的138例女性生殖器疱疹患者中HSV-Ⅱ抗原阳性78例(56.52%);HSV-Ⅱ中IgM抗体阳性130例(94.20%),抗体阳性率明显高于抗原阳性率(P<0.01)。典型病例组抗原阳性65例(87.84%),IgM抗体阳性66例(89.19%);不典型病例组抗原阳性13例(20.31%),IgM抗体阳性64例(100.00%)。结论对于皮损时间短,症状典型者可检测HSV-Ⅱ抗原;皮损时间长,或反复者可检测HSV-Ⅱ抗体,可以有效提高HSV感染的临床诊断率。

应用ELISA方法检测单纯疱疹病毒-Ⅱ型抗体的研究

目的了解广东省汕头市人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的感染状况。方法采用ELISA方法检测HSV-ⅡIgM和IgG抗体。结果性传播疾病(性病)患者的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为16.2%(88/544),HSV-ⅡIgG为62.9%(324/544);正常对照组的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为3.3%(2/60)、HSV-ⅡIgG为41.7%(25/60)。两组的阳性检出率,患者组明显高于对照组(P<0.01)。结论不同人群HSV的感染状况不同;正常人群中存在HSV-Ⅱ感染,HSV-Ⅱ是性病的重要病原体之一。

单纯疱疹病毒Ⅱ型细胞毒性T淋巴细胞表位重组DNA疫苗的构建表达及鉴定

目的:针对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gD和gB的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法:用PCR方法从已构建好的pc-gD真核表达质粒中扩增gD片段,将其与CTL表位共同连接到pVAX1载体,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。采用免疫组化和Western-blotting法鉴定重组质粒的表达情况,免疫BALB/c小鼠,进行CTL活性鉴定。结果:构建的重组质粒能在非洲绿猴肾细胞(COS-7细胞)内表达。该重组DNA疫苗免疫接种BALB/c小鼠后,其CTL活性增高。结论:成功构建HSV-2pVAX-gD-CTL重组真核表达质粒,并能在真核细胞内表达,该DNA疫苗对细胞免疫有明显的促进作用。

单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗的构建

提取HSV-2333株的DNA作为模板,用PCR方法扩增编码HSV-2糖蛋白D抗原优势表位的基因(gDt)和乙肝核心蛋白(HbcAg)的基因序列(HBc),再用重叠PCR方法将gDt插入到HBc编码Hb-cAg刺突部的第81和82位的氨基酸的基因之间,获得融合基因gDt-HBc,将gDt-HBc插入真核表达质粒pcDNA3.1中,构建出真核表达质粒gDt-HBc-pcDNA3.1,转化DH5a感受态细胞后,通过菌落PCR和双酶切鉴定后进行测序鉴定,测序结果与预期结果完全一致,成功构建单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗,为下一步的评价工作奠定了基础。

先天性无症状Ⅱ型单纯疱疹病毒感染患儿近期预后观察

为观察先天性无症状Ⅰ型单纯疱疹病毒感染患儿近期生长发育情况,对12例感染婴儿及12例对照婴儿进行了为期1年的跟踪随访,检查内容包括体格测量、Bayley婴幼儿发育量表、头颅B超和脑干听觉诱发电位(BAEP)等。结果显示感染组婴儿体格发育与对照组相比,差异无显著性意义;但智能发育的差异有显著性意义(P<0.05);感染组3个月时的头颅B超异常率高于对照组,差异有显著性意义(P=0.034);12个月时的头颅B超异常率虽高于对照组,但差异无显著性意义。感染组BAEP的异常率高于对照组,差异有显著性意义(P=0.023)。提示先天性Ⅱ型单纯疱疹病毒感染对新生儿及婴儿的神经系统发育可能造成一定的不良影响,应普及孕妇HSV-Ⅱ感染的筛查,对感染者及早予抗病毒治疗。

阴茎癌病因中人乳头瘤病毒和疱疹病毒Ⅱ型相关性研究

目的 :探讨阴茎癌病毒病因中人乳头瘤病毒 (HPV)和疱疹病毒Ⅱ型 (HSV 2 )的可能作用。方法 :应用聚合酶链反应技术对正常包皮组织和阴茎癌中HPV和HSV 2DNA进行检测 ,分析两者的相关性。结果 :正常包皮和阴茎癌组织中HPV和HSV 2DNA阳性率分别为 4 1.6 7%、33.33%和 4 .16 %、31.2 5 % ,阴茎癌与正常包皮组织中HPVDNA检出率无显著差别 (P >0 .0 5 ) ,但HSV 2在阴茎癌中的检出率与正常包皮组织比较有显著差别 (P <0 .0 5 )。此外有 10例阴茎癌组织中同时存在HPV和HSV 2DNA序列 ,正常包皮组织却只有 1例。结论 :阴茎癌的病毒病因可能是多因素的 ,HPV和HSV 2均与阴茎癌有关 。

Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。

芪倍液体外抗Ⅱ型单纯疱疹病毒的实验研究

目的研究芪倍液体外抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)的作用机理。方法利用体外细胞培养技术,采用微量细胞病变抑制法来研究中药各浓度组的抑制病毒增殖作用、直接杀伤病毒作用,以病毒滴度和抑制病毒指数为指标。结果①抑制病毒增殖实验:芪倍液1.63、0.81、0.41mg/mL浓度组的病毒滴度与病毒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),抑病毒指数>2;②直接杀伤病毒实验:芪倍液1.63mg/mL-8h组、1.63mg/mL-24h组、0.81mg/mL-24h组的病毒滴度与病毒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其余各组的病毒滴度与病毒对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪倍液具有抗Ⅱ型单纯疱疹病毒的作用。

荧光定量PCR检测生殖器单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA

目的 为了调查单纯疱疹病毒Ⅱ型在男性和女性患者中的感染情况。方法 用荧光定量PCR技术对 5 9例男性和 4 0例女性生殖器溃疡和疱疹患者进行HSVⅡDNA检测。结果 男性平均年龄 35 .0 7± 10 .77,女性 2 9.35± 5 .91,t=2 .5 5 ,p =0 .0 14 ;男性HSVⅡDNA阳性率为 2 7.12 % ,定量拷贝对数为 7.72 5± 1.4 74 ,女性HSVⅡDNA阳性率为 17.5 % ,定量拷贝对数为 6 .92 7± 1.84 2 ( χ2 =1.2 37,P =0 .2 6 6 ;t=1.10 1,P =0 .2 80 )。结论 男性年龄高于女性年龄 ,男性和女性间感染阳性率无差异 ,急性感染的发生率也基本一致。

降落PCR扩增单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的研究

目的:建立一种快速、准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的方法。方法:根据已发表的gD蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gD蛋白DNA进行扩增。结果:从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且采用降落PCR能有效地降低或避免非特异性扩增。结论:TD-PCR能够用于快速,准确地检测gD蛋白,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。

ELISA法与荧光定量PCR法检测HSVⅡ感染的应用研究

目的 :分析ELISA法和荧光定量PCR法联合检测生殖器疱疹感染HSVⅡ的敏感性。方法 :对 191例生殖器疱疹患者同时运用改良的ELISA法和荧光定量PCR法进行检测。结果 :ELISA法检测抗体阳性率为 6 1 8% ,荧光定量PCR法检测HSVⅡ阳性率 85 9% ,总阳性率 92 1%。结论 :荧光定量PCR法灵敏度优于ELISA法 。

早孕妇女外周血、宫颈分泌物及绒毛组织巨细胞病毒、单纯疱疹病毒Ⅱ型、弓形虫检测情况的分析

目的 探讨早孕妇女中人巨细胞病毒 (CMV)、单纯疱疹病毒Ⅱ型 (HSV Ⅱ )、弓形虫 (TOXO)、沙眼衣原体 (CT)感染的发生情况。方法 采用PCR技术对 4 86例早孕妇女的外周血、宫颈分泌物、绒毛组织检测CMV、HSV Ⅱ、TOXO和CT。结果 4 86例早孕妇女的外周血、宫颈分泌物、绒毛组织中CMV、HSV Ⅱ、TOX O、CT的总检出率分别为 7.6 2 %、2 .6 7%、1.86 %和 17.0 8%。外周血中CMV、HSV Ⅱ、TOXO检出率分别为1.6 4 %、0 .82 %及 1.6 5 % ;绒毛组织中CMV、HSV Ⅱ、TOXO检出率均为 0 .2 1% ;分泌物中CMV、HSV Ⅱ、CT的检出率分别为 5 .76 %、1.6 4 %、17.0 8%。除CT的检出率随年龄增长而下降外 ,其余各项检测在不同年龄组中的检出率差异均无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ,未产妇与经产妇的检出率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 孕早期血清CMV、HSV Ⅱ、TOXO及CT的检测不必定为筛查的项目 ,对早孕妇女 ,可首先考虑作分泌物检测。

单纯疱疹Ⅱ型病毒感染对血管平滑肌细胞形态及合成胶原的影响

为观察人单纯疱疹Ⅱ型病毒感染对培养的牛主动脉平滑机细胞形态及合成胶原的影响，用50％组织培养感染量的病毒悬液于37℃感染培养的牛主动脉平滑肌细胞，于倒置显微镜和电镜下观察平滑肌细胞形态改变，以3H－脯氨酸掺入平滑肌细胞合成的3H－羟脯氨酸的量作为测定胶原的指标。结果发现，感染24h后，平滑肌细胞逐渐出现细胞变圆、肿胀和局部坏死脱落等形态改变；感染24、36和48h后平滑肌细胞胶原的含量与对照组相比明显降低。提示人单纯疱疹Ⅱ型病毒可能作为一种局部损害因子，抑制血管平滑肌细胞胶原合成，损害中滑肌细胞，可参与动脉粥样硬化的发病过程。

单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因及血管生成抑制素融合基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的 对单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因及血管生成抑制素进行基因扩增 ,克隆构建真核表达质粒pcDNA3 /HSV ⅡTK/As。方法 从单纯疱疹病毒Ⅱ型 (HSV Ⅱ )Sav株感染的Hep 2细胞上清液中提取HSV 2基因组DNA ,以此为模板 ,用PCR方法扩增胸苷激酶 (TK )基因 ,将扩增的片段克隆入载体 pcDNA3 中 ,挑取阳性克隆测序。限制性核酸内切酶酶切 pcDNA3 /HSV ⅡTK ,得到目的基因TK ,将其克隆于已构建的真核表达载体 pcDNA3 /As上。结果 HSV Ⅱ TK基因全部编码区为 112 8bp ,基因序列与 genebank中报道相符。新质粒 pcDNA3 /HSV ⅡTK/As经限制性核酸内切酶 (BamHⅠ ,HindⅢ )酶切后得到 70 0bp(As)及 10 0 0bp(HSV ⅡTK)相应基因片段。 结论 本研究成功构建 pcDNA3 /HSV ⅡTK /As真核表达质粒。

女性淋病患者宫颈HCMV和HSV-Ⅱ感染PCR诊断分析

采用聚合酶健反应（PCR）技术对387例女性淋病患者进行宫颈HCMVDNA和HSV－ⅡDNA检测，并对比观察156例孕女宫颈HCMV和HSV－Ⅱ感染情况。结果表明女性淋病患者宫颈HCMVDNA阳性率为25．06％，HSV－ⅡDNA阳性率为15．24％；孕妇宫颈HCMVDNA阳性率为7．05％，HSV－ⅡDNA阳性率为0．64％。提示女性淋病患者多有非婚性接触史而发生HcMV和HSV－－Ⅱ感染。