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2021—2022年我国部分地区Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及Hexon基因序列分析
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作者 刘兆洁 许芬芬 +5 位作者 李雨泽 刘梦凡 苏镜文 李德钊 黄淑坚 梅堃 《中国家禽》 北大核心 2024年第5期38-45,共8页
为了解2021—2022年我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(GroupⅠfowladenovirus,FAdVⅠ)分子流行情况,试验通过病毒分离、PCR鉴定、鸡胚致病性试验、Hexon基因测序等方法对采集自2021—2022年我国15个地区共计250份疑似感染禽腺病毒的组织病... 为了解2021—2022年我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(GroupⅠfowladenovirus,FAdVⅠ)分子流行情况,试验通过病毒分离、PCR鉴定、鸡胚致病性试验、Hexon基因测序等方法对采集自2021—2022年我国15个地区共计250份疑似感染禽腺病毒的组织病料进行病原分析。结果显示:共分离出43株FAdVⅠ;Hexon基因扩增测序分析表明,其中36株与FAdV-C4型参考株核苷酸序列相似性在99.8%~100%,2株与FAdV-E8b型参考株核苷酸序列相似性达到93.8%~94.2%,1株与FAdV-A1型参考株核苷酸序列相似性达到99.5%,4株与FAdV-D11型参考株核苷酸序列相似性达到95.4%;FAdVⅠ感染在夏秋季节为高发期,阳性检出率较高的时间主要集中于4—10月。研究表明,我国15个主要养禽地区禽群中FAdVⅠ流行情况较为复杂,存在交叉感染和病毒基因重组风险,需要进一步调查其流行病学特征及研究其致病性。 展开更多
关键词 禽腺病毒 hexon基因 血清型 流行病学
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犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建 被引量:5
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作者 陶玉成 马素贞 +3 位作者 陈胜男 刘腾飞 申卫红 简子健 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2010年第3期214-218,共5页
通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已... 通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。 展开更多
关键词 犬传染性肝炎 hexon基因 克隆 原核表达质粒
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鸭腺病毒A型Hexon基因克隆与序列分析 被引量:5
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 程龙飞 傅光华 傅秋玲 施少华 陈红梅 黄瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期3042-3048,共7页
为明确鸭腺病毒A型Hexon基因特征及其在腺病毒科病毒分类中的作用,本研究从前期分离鉴定的一株番鸭源鸭腺病毒A型分离株(JX2016株)中分段扩增获得其Hexon基因编码区。结果发现,鸭腺病毒A型JX2016株Hexon基因编码区为2 733 bp,编码910个... 为明确鸭腺病毒A型Hexon基因特征及其在腺病毒科病毒分类中的作用,本研究从前期分离鉴定的一株番鸭源鸭腺病毒A型分离株(JX2016株)中分段扩增获得其Hexon基因编码区。结果发现,鸭腺病毒A型JX2016株Hexon基因编码区为2 733 bp,编码910个氨基酸,与鸭腺病毒A型(FJ12025株)核苷酸同源性最高,达99.8%;与其他分离株Hexon基因核苷酸同源性均在99.4%以上;与鸭腺病毒2型(GR株,未明确分类地位)同源性仅为54.5%;与禽腺病毒A型Phelps株(鸡源)及P29株(鹅源)的核苷酸同源性分别为53.6%和55.2%。遗传进化树分析发现,所有鸭腺病毒A型分离株在遗传进化上均处于相同的亚分支,且与绵羊腺病毒D型(OAV287株)均处于富AT腺病毒属遗传进化分支。但鸭腺病毒2型(GR株)与禽腺病毒A型Phelps株(鸡源)、P29株(鹅源)却处于同一遗传进化分支,均属于禽腺病毒属遗传进化分支。基于Hexon蛋白的遗传进化分析,建议将鸭腺病毒A型重新命名为鸭源富AT腺病毒A型,将鸭腺病毒2型重新命名为鸭源禽腺病毒。 展开更多
关键词 鸭腺病毒A型 hexon基因 序列分析 遗传进化 分类
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禽腺病毒4型河南株Hexon全基因的克隆及遗传进化分析 被引量:10
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作者 张宇 乔涵 +3 位作者 徐朋丽 杨兴武 韩昊莹 陈红英 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第6期30-36,共7页
【目的】分析禽心包积水-包涵体肝炎综合征的主要病原禽腺病毒4型(FAV-4)在河南省的流行和遗传变异情况。【方法】对2015年8-10月送检的40份疑似FAV-4感染的病料进行PCR阳性检测,同时根据采集地区与宿主的差异性,选取7份FAV-4阳性样品... 【目的】分析禽心包积水-包涵体肝炎综合征的主要病原禽腺病毒4型(FAV-4)在河南省的流行和遗传变异情况。【方法】对2015年8-10月送检的40份疑似FAV-4感染的病料进行PCR阳性检测,同时根据采集地区与宿主的差异性,选取7份FAV-4阳性样品进行了Hexon全基因的扩增、克隆、测序和遗传进化分析。【结果】通过扩增Hexon基因421bp的片段,成功建立了禽腺病毒4型的PCR检测方法;40份家禽肝脏样品中,PCR检测显示35份为FAV-4阳性,阳性率为87.5%;成功扩增了包含Hexon基因全序列的片段,长度为2 889bp;7株FAV-4河南株的Hexon基因与GenBank中的12株FAV-4参考毒株Hexon基因序列之间核苷酸序列同源性为98.5%~99.8%,与参考株相比存在碱基的插入、突变现象;FAV-4河南株Hexon全基因推导的氨基酸序列与参考株之间的同源性为98.2%~99.8%,且发生变化的位置集中在前段和中段。【结论】FAV-4河南株与印度分离株亲缘关系较近,但与韩国分离株亲缘关系相对较远。 展开更多
关键词 禽心包积水-包涵体肝炎综合征 禽腺病毒4型 hexon全基因
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禽腺病毒Hexon蛋白多克隆抗体制备及特异性鉴定 被引量:5
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作者 牛玉娟 孙芹芹 +6 位作者 赵君 孙伟 张会霞 张桂华 肖一红 商营利 刘思当 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第6期928-932,共5页
本研究旨在制备禽腺病毒(FAd V)Hexon蛋白多克隆抗体并对其特异性进行分析鉴定。通过构建重组的原核表达载体p ET-28a-Hexon,转入表达菌E. coli BL21 (DE3),IPTG诱导,并运用SDS-PAGE进行重组蛋白的鉴定,最后纯化蛋白。利用纯化的融合蛋... 本研究旨在制备禽腺病毒(FAd V)Hexon蛋白多克隆抗体并对其特异性进行分析鉴定。通过构建重组的原核表达载体p ET-28a-Hexon,转入表达菌E. coli BL21 (DE3),IPTG诱导,并运用SDS-PAGE进行重组蛋白的鉴定,最后纯化蛋白。利用纯化的融合蛋白进行常规新西兰大白兔免疫,以制备Hexon蛋白的多克隆抗体。采用间接免疫荧光、免疫组织化学和Western blot的方法鉴定多克隆抗体的特异性。结果表明,Hexon蛋白的原核表达量较高,并且是以包涵体的形式存在,分子质量大小约为43 k Da;免疫兔后获得能与FAd V发生特异性反应且高效价的多克隆抗体。因此,本试验制备的FAd V Hexon蛋白的多克隆抗体证明特异性良好,为后期禽腺病毒病的诊断、致病机制研究及亚单位疫苗的研制提供了良好的物质基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒 hexon基因 多克隆抗体 特异性
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一株血清8a型禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析
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作者 谢涛 黄宝钦 +2 位作者 谢逸天 罗忠宝 吴异健 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期364-370,共7页
【目的】研究福建南平地区禽腺病毒(FAdV)血清8a型分离株的遗传演化情况及致病性,旨在为防控血清8a型FAdV感染提供参考。【方法】2022年8月,采集福建南平地区部分肉鸡养殖场出现的以包涵体肝炎为特征的肝脏病料,采用PCR技术检测FAdV核酸... 【目的】研究福建南平地区禽腺病毒(FAdV)血清8a型分离株的遗传演化情况及致病性,旨在为防控血清8a型FAdV感染提供参考。【方法】2022年8月,采集福建南平地区部分肉鸡养殖场出现的以包涵体肝炎为特征的肝脏病料,采用PCR技术检测FAdV核酸,将获得的阳性样品接种在无特定病原体(SPF)鸡胚上进行病原的分离纯化,利用hexon基因测序及序列分析等方法进行病毒鉴定,并在测定分离株毒力的基础上进行动物致病性试验。【结果】接种10 d后,鸡胚死亡,肝脏肿大、出血、坏死、呈土黄色;PCR鉴定和hexon基因序列分析表明,分离株与GenBank上的FAdV E型8a血清型澳大利亚TR59毒株的序列同源性高达99.5%,将该分离株命名为FJNP。FJNP株对1日龄SPF鸡的致死率为44%(11/25);剖检显示,感染鸡肝脏肿大、出血、边缘钝圆、呈土黄色、出现白色坏死点,脾脏和肾脏也出现肿大、出血等症状;肝脏组织病理学检查结果显示,感染鸡肝细胞大量变性坏死,肝细胞核可见嗜碱性包涵体及大量淋巴细胞浸润。实时荧光定量PCR检测显示,感染鸡体内多个组织器官均检测到病毒,且主要分布在肝脏,攻毒3、5、7、14、21 d在泄殖腔中均能检测到病毒。【结论】本研究从临床表现为包涵体肝炎的病鸡肝脏病料中分离到一株具有较强致病性的血清8a型FAdV。 展开更多
关键词 血清8a型禽腺病毒 分离鉴定 致病性 hexon基因
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Ⅰ群禽腺病毒hexon基因分型与序列分析 被引量:5
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作者 朱小甫 吴旭锦 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期46-49,共4页
对鸡群中感染的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因进行分型与序列分析,以期明确Ⅰ群禽腺病毒基因型的分布和hexon基因变异情况。参考GenBank上FAdV基因序列,设计2对引物,采用套式PCR技术扩增临床病料中Ⅰ群禽腺病毒hexon基因,测序后获得了8株FAdV h... 对鸡群中感染的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因进行分型与序列分析,以期明确Ⅰ群禽腺病毒基因型的分布和hexon基因变异情况。参考GenBank上FAdV基因序列,设计2对引物,采用套式PCR技术扩增临床病料中Ⅰ群禽腺病毒hexon基因,测序后获得了8株FAdV hexon基因片段。结果表明,构建系统进化树发现,其中HM、SXFS、LQQD、HXGB、GSPL、DYQY和FP共7株属于FAdV-4型,而GS株属于FAdV-1型。7株FAdV-4型毒株核苷酸同源性在99.9%~100%之间,推导的氨基酸序列同源性均为100%,提示这7株FAdV-4型流行毒株高度同源。FAdV-1型的GS与CELO株核苷酸、推导的氨基酸序列同源性均为99.2%,提示GS与CELO株亲缘关系较近。在鸡群中发现存在FAdV-1型和FAdV-4型Ⅰ群禽腺病毒,各血清型毒株之间高度同源,毒株遗传稳定性高。 展开更多
关键词 I群禽腺病毒 hexon基因 序列分析 基因分型
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4株禽腺病毒hexon基因片段序列分析 被引量:1
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作者 刘畅 李磊 +3 位作者 徐慧娟 赵磊 路振香 胡倩倩 《畜牧与饲料科学》 2019年第9期17-22,共6页
[目的]验证购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心(China Veterinary Culture Collection Center,CVCC)的4株禽腺病毒(FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211、FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218)的血清型。[方法]采用PCR的方法对4株FAdV hexon基因片段... [目的]验证购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心(China Veterinary Culture Collection Center,CVCC)的4株禽腺病毒(FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211、FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218)的血清型。[方法]采用PCR的方法对4株FAdV hexon基因片段进行特异性扩增、克隆与测序,并与GenBank上公布的FAdV各血清型进行亲缘性分析。[结果]hexon基因片段核苷酸及其编码Hexon蛋白氨基酸亲源性分析结果表明,FAdV-1 AV208为禽腺病毒A血清1型;FAdV-4 AV211为禽腺病毒C中的血清4型;FAdV-8 AV215为禽腺病毒E中的血清8b型;FAdV-11 AV218为禽腺病毒C中的血清10型。[结论]FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211的血清型与CVCC标注一致;FAdV-8 AV215为FAdV-8b,相比CVCC该研究进一步细化了其血清型;而FAdV-11 AV218为FAdV-10,与CVCC标注的血清型不一致。该研究为今后正确使用CVCC标准毒株FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218提供了参考。 展开更多
关键词 禽腺病毒 标准毒株 hexon基因 hexon蛋白
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PCR Based Detection and Phylogenetic Analysis of Fowl Adenovirus Strains Isolated from 2019 Epidemic from Punjab and Sindh, Pakistan 被引量:1
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作者 Nadeem Sharif Muhammad Danish Mehmood +5 位作者 Syed Zeeshan Haider Naqvi Huma Anwar ul-Haq Syed Shoaib Ahmed Muhammad Usman Ghani Muhammad Shoaib Mubashir Hussain 《American Journal of Molecular Biology》 2020年第3期246-258,共13页
Hydro-Pericardium Hepatitis (HPH) is an emerging infectious disease of commercial poultry, caused by different serotypes of Fowl Adeno Virus. The vertical transmission of the virus into the progeny may results in deva... Hydro-Pericardium Hepatitis (HPH) is an emerging infectious disease of commercial poultry, caused by different serotypes of Fowl Adeno Virus. The vertical transmission of the virus into the progeny may results in devastating damage, causing huge economic losses to its farmers. In present study, molecular typing is performed on basis of partially conserved hexon gene sequences, using a unique set of primers having common reverse oligo for simultaneous detection of FAdV1, FAdV-4 and FAdV-11. A total of 14 fowl adeno virus strains were isolated from 100 suspected adeno virus liver samples, collected from different districts in Pakistan, between 2018 and 2019. FASTA’s sequence alignment and phylogenetic analysis revealed that out of the 14, one isolate which belonged to group A showed 27% similarity with FAdV-1, while three isolates showed 99%, 95% & 45% similarity to FAdV-4 (Group C). Whereas, ten isolates showed more than 99% similarity to FAdV-11 (Group D). The serotypes FAdV1, FAdV-4 and FAdV-11 are prevailing in the breeder and broilers. These results hold great importance in rapid, reliable and simultaneous detection of the three FAdV serotypes. Therefore, fowl adeno virus vaccine production for commercial poultry shall be according to the prevalent field serotypes. 展开更多
关键词 Hydro-Pericardium Hepatitis (HPH) hexon gene Polymerase Chain Reaction Phylogenetic Analysis Sanger’s Sequence
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高致病性血清4型禽腺病毒hexon基因在昆虫细胞中的表达及鉴定
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作者 梅梅 陆吉虎 +2 位作者 张雪花 唐应华 侯继波 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期862-865,共4页
为获得杆状病毒表达的重组高致病性血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAd V-4)六邻体蛋白(Hexon),本研究通过PCR从高致病性血清4型禽腺病毒基因组中扩增到hexon基因,克隆到杆状病毒转移载体p Fast Bac-1,获得重组转移质粒p F... 为获得杆状病毒表达的重组高致病性血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAd V-4)六邻体蛋白(Hexon),本研究通过PCR从高致病性血清4型禽腺病毒基因组中扩增到hexon基因,克隆到杆状病毒转移载体p Fast Bac-1,获得重组转移质粒p Fast Bac-hexon,将其转化DH10Bac大肠杆菌并筛选,获得重组杆状病毒穿梭质粒r Bacmid-hexon,将重组杆状病毒穿梭质粒转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒r BV-hexon。间接免疫荧光试验和免疫印迹试验结果显示,Sf9细胞中的Hexon蛋白能够与血清4型禽腺病毒阳性血清发生特异性反应,蛋白质分子量约110 000,表明Hexon蛋白在Sf9细胞中获得良好的表达。 展开更多
关键词 高致病性血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 hexon基因
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9株Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及hexon基因的遗传变异分析 被引量:4
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作者 初欢欢 单虎 +2 位作者 郑秀云 王述柏 宋化强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期7-9,12,共4页
为了解山东省肉鸡场禽腺病毒的感染流行特点,为其科学防治提供依据,通过临床症状观察、病毒分离鉴定、鸡胚致病性试验、血凝试验、PCR检测及克隆测序等方法进行病原检测分析。结果表明,发病肉鸡主要表现为精神沉郁、采食减少等临床症状... 为了解山东省肉鸡场禽腺病毒的感染流行特点,为其科学防治提供依据,通过临床症状观察、病毒分离鉴定、鸡胚致病性试验、血凝试验、PCR检测及克隆测序等方法进行病原检测分析。结果表明,发病肉鸡主要表现为精神沉郁、采食减少等临床症状。鸡胚致病性试验可见死亡胚体呈全身出血、体型小、肝肿大现象。血凝试验显示,分离株不具凝集鸡、鸭、大鼠红细胞的特性。对hexon基因进行克隆测序分析显示,LY9株与Ⅰ群禽腺病毒血清8型亲缘性近,与参考株(58株)的核苷酸同源性为98.8%,氨基酸同源性为98.6%。其余8株分离株间的核苷酸同源性为91.3%~99.8%,氨基酸同源性为97.8%~100%;与Ⅰ群禽腺病毒血清4型参考株(HB1510株)属同一进化分支,核苷酸同源性为93.1%~100%,氨基酸同源性为98.9%~100%。结论:从山东省4家肉鸡场分离到的9株病毒均为Ⅰ群禽腺病毒。 展开更多
关键词 肉鸡 禽腺病毒 hexon基因 遗传变异
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禽腺病毒4型hexon基因克隆与原核表达分析 被引量:1
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作者 王许航 王林 +6 位作者 经美 陈萍 王金凤 孙继国 刘聚祥 王建昌 袁万哲 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期29-32,共4页
应用PCR方法扩增禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAd V-4) Hexon基因,将其克隆至原核表达载体p QE1中,获得重组质粒p QE1-hexon。将重组质粒经诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果,Hexon蛋白在25℃经诱导4 h、IPTG浓度为0.... 应用PCR方法扩增禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAd V-4) Hexon基因,将其克隆至原核表达载体p QE1中,获得重组质粒p QE1-hexon。将重组质粒经诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果,Hexon蛋白在25℃经诱导4 h、IPTG浓度为0. 8 mmol/L时可获得最大诱导表达量,表达蛋白的相对分子质量约为107 k D,主要以不溶性包涵体形式存在。纯化复性后,可得到浓度为5. 165 mg/m L及纯度为97%的Hexon蛋白。本研究获得的重组菌p QE1-hexon以及高纯度的Hexon蛋白,为进一步研究FAd V-4检测方法和新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 hexon蛋白 原核表达
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禽腺病毒4型云南株分离鉴定及Hexon基因序列分析
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作者 薛晓岩 张振兴 +4 位作者 曾毅 季佳 代红炀 李素华 宋建领 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期3932-3942,共11页
【目的】分析云南省家禽及野鸟禽腺病毒4型(Fowl adenovirus-4,FAdV-4)流行情况、Hexon基因差异性及致病性,为研究FAdV-4流行及Hexon基因对病毒毒力的影响提供参考。【方法】2020年1月―2021年6月在云南省昆明市、曲靖市、楚雄州、大理... 【目的】分析云南省家禽及野鸟禽腺病毒4型(Fowl adenovirus-4,FAdV-4)流行情况、Hexon基因差异性及致病性,为研究FAdV-4流行及Hexon基因对病毒毒力的影响提供参考。【方法】2020年1月―2021年6月在云南省昆明市、曲靖市、楚雄州、大理州、红河州、玉溪市等家禽养殖密集区采集疑似感染FAdV-4家禽肝脏组织样品158份,候鸟迁徙地采集野鸟新鲜粪便310份,采用PCR技术检测FAdV-4核酸,对获得的代表性阳性样品进行病原分离鉴定,并对分离毒株进行致病性及Hexon基因序列分析。【结果】家禽肝脏组织样品中检出FAdV-4核酸阳性样品19份,阳性率为12.03%(19/158);黑颈鹤粪便样品中检出核酸阳性样品1份,阳性率为0.3%(1/310)。从FAdV-4核酸阳性样品中分离到7株FAdV-4,致病性研究结果显示,FAdV-4云南分离株均能致鸡胚发育不良,引起4周龄肉鸡发生心包积液-肝炎综合征,鸡胚半数致死量(ELD)为10~10/mL。7株分离株均聚类于FAdV-C亚群,Hexon蛋白与国内FAdV-4高致病性毒株具有相同的R、R、Q特征。分离株感染SPF鸡后,临床症状明显,具有高致病性且高致死率,肝细胞病变明显。【结论】研究初步掌握了云南FAdV-4的流行情况,首次在黑颈鹤粪便中检测到FAdV-4病原核酸,分离获得7株FAdV-4,部分毒株Hexon蛋白存在氨基酸突变。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型(FAdV-4) hexon基因 致病性 遗传进化
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鸭腺病毒3型荧光RPA恒温快速检测方法的建立与应用 被引量:2
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作者 刘孟啸 蔡姝 +4 位作者 刘建钗 赵中伟 孙宁 曲光刚 苗立中 《中国兽药杂志》 2023年第11期8-15,共8页
鸭腺病毒3型(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)是我国近年来新发的禽腺病毒,致病力较强,已经严重影响到鸭养殖业。为实现对DAdV-3的快速检测,以DAdV-3的Hexon基因为靶基因,设计特异性重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplificat... 鸭腺病毒3型(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)是我国近年来新发的禽腺病毒,致病力较强,已经严重影响到鸭养殖业。为实现对DAdV-3的快速检测,以DAdV-3的Hexon基因为靶基因,设计特异性重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)引物和探针,并构建重组标准质粒命名为DAdV-H-18T,优化RPA反应条件后,建立DAdV-3的荧光RPA恒温快速检测方法。结果显示,该检测方法最佳反应条件为38℃、18 min;特异性强,与其他常见鸭病病原如鸭肝炎病毒、鸭坦不苏病毒等均无交叉反应。对重组质粒DAdV-H-18T的最低检测限为1 copy/μL;采用建立的RPA检测方法和qPCR对55份鸭组织临床样本进行检测,阳性率分别为65.4%、50.9%,检测符合率为92.7%。研究建立的DAdV-3荧光RPA方法,检测速度快,敏感性高,特异性强,为该病临床快速检测提供了有力工具。 展开更多
关键词 DAdV-3 hexon基因 RPA 恒温快速检测
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PCR-RFLP技术对Ⅰ群禽腺病毒12个血清型毒株的分型鉴定 被引量:17
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作者 唐熠 谢芝勋 +5 位作者 熊文婕 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期886-889,共4页
应用扩增Ⅰ群禽腺病毒(AAV)Hexon基因A片段和B片段的2对引物,对Ⅰ群AAV的12个血清型毒株进行了PCR扩增。结果扩增出的A片段大小为1 219 bp,B片段大小为1 350 bp。对A片段用限制性内切酶HaeⅡ进行酶切,结果得到6种不同的RFLP图谱;对B片... 应用扩增Ⅰ群禽腺病毒(AAV)Hexon基因A片段和B片段的2对引物,对Ⅰ群AAV的12个血清型毒株进行了PCR扩增。结果扩增出的A片段大小为1 219 bp,B片段大小为1 350 bp。对A片段用限制性内切酶HaeⅡ进行酶切,结果得到6种不同的RFLP图谱;对B片段进行HaeⅡ酶切,结果得到9种不同的RFLP图谱。综合分析A片段和B片段的PCR-RFLP结果,能鉴别Ⅰ群AAV的12个血清型。结果表明,建立的PCR-RFLP具有快速、简单、特异、灵敏等优点,可作为Ⅰ群AAV流行毒株血清型的快速分型工具。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 hexon基因 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性
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禽腺病毒血清4型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:4
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作者 卢清侠 金前跃 +4 位作者 冯丽丽 柴永笑 郭振华 邢广旭 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2022年第12期131-138,共8页
为建立禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV4)临床检测方法,根据GenBank中该病毒Hexon基因序列设计扩增引物,将扩增的Hexon基因连接至pEASY-Blunt载体,构建重组质粒pEASY-Blunt-Hexon,同时对Hexon基因进行分析,选取高度保... 为建立禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV4)临床检测方法,根据GenBank中该病毒Hexon基因序列设计扩增引物,将扩增的Hexon基因连接至pEASY-Blunt载体,构建重组质粒pEASY-Blunt-Hexon,同时对Hexon基因进行分析,选取高度保守区域,设计荧光定量检测引物,建立FAdV4 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。该方法扩增产物长度为95 bp,最低检测下限为7.1×102拷贝/μL,且与其他禽源病毒无交叉反应,批内和批间重复性试验变异系数均不超过2%,具有良好的特异性和重复性。将建立的检测方法应用于检测FAdV4在鸡肝癌细胞(Leghorn male hepatocellular cells,LMH)上的增殖特性,并与TCID50法测定的病毒滴度进行比较,结果显示,2种检测方法具有良好的相关性。综上,本研究建立的检测方法可用于FAdV4的临床早期快速检测。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 hexon基因 荧光定量PCR 检测
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减蛋综合症病毒六邻体蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 李银聚 吴庭才 +2 位作者 程相朝 吴志明 张春杰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第8期31-34,共4页
设计了1对特异性引物,应用降落PCR法对减蛋综合症病毒(EDSV)六邻体蛋白基因进行了扩增。将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,经酶切和PCR鉴定后,初步证明了目的片段的正确性。进一步经核苷酸序列测定表明,所扩增的基因片段长度为2.74kb,共编... 设计了1对特异性引物,应用降落PCR法对减蛋综合症病毒(EDSV)六邻体蛋白基因进行了扩增。将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,经酶切和PCR鉴定后,初步证明了目的片段的正确性。进一步经核苷酸序列测定表明,所扩增的基因片段长度为2.74kb,共编码910个氨基酸,与由EDSV弱毒株(AA-2)全基因组的Hind酶切片段测序所得到的六邻体结构基因推测的氨基酸序列相比,有11处氨基酸发生了变异。 展开更多
关键词 减蛋综合症病毒 六邻体蛋白基因 克隆 序列分析
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EDSV六邻体蛋白基因克隆与原核表达载体构建 被引量:3
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作者 张春杰 张敏 +1 位作者 吴庭才 李银聚 《河南科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第4期80-83,共4页
应用降落PCR技术扩增出减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因并将其克隆至pMDT18载体上,经酶切、PCR鉴定及测序结果表明插入的片段为目的基因,全长2.733kb,共编码910个氨基酸。切下该目的基因定向克隆至pET28a质粒构建了六邻体蛋白基因原核表... 应用降落PCR技术扩增出减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因并将其克隆至pMDT18载体上,经酶切、PCR鉴定及测序结果表明插入的片段为目的基因,全长2.733kb,共编码910个氨基酸。切下该目的基因定向克隆至pET28a质粒构建了六邻体蛋白基因原核表达载体pET28ahexon,经各种酶切、PCR鉴定及进一步测序后证明六邻体蛋白基因片段所插入的位置、大小、核苷酸序列和阅读框架正确无误,从而为下一步的表达及进一步阐明EDSV六邻体蛋白基因结构与功能的关系和减蛋综合征基因工程苗的研究奠定了良好基础。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 六邻体蛋白基因 原核表达载体
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Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法的建立与应用 被引量:4
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作者 朱小甫 吴旭锦 +1 位作者 高睿 尚红梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期74-77,共4页
本研究根据GenBank发表的Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)基因序列,设计了2对通用检测引物,通过反应体系和条件优化,建立了Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法。通过灵敏性检测、特异性试验以及对临床病料中FAdV检测验证实用性与可靠性。... 本研究根据GenBank发表的Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)基因序列,设计了2对通用检测引物,通过反应体系和条件优化,建立了Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法。通过灵敏性检测、特异性试验以及对临床病料中FAdV检测验证实用性与可靠性。建立的套式PCR检测方法灵敏度为3.12×10-6 ng/μL;特异性试验证实该方法仅能从FAdV参考阳性株扩增出750 bp的预期目的条带,其他5种常见禽病毒均为阴性。结果表明,本研究成功建立了一种灵敏度高、特异性好的检测Ⅰ群禽腺病毒通用套式PCR方法,为临床FAdV感染的快速准确诊断提供了技术手段。 展开更多
关键词 群禽腺病毒 hexon基因 套式PCR 检测
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减蛋综合征病毒六邻体重组蛋白的表达和初步应用 被引量:4
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作者 汪铭书 程安春 +1 位作者 郭万柱 陈孝跃 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期58-61,共4页
The plasmid PE which harbored the whole hexon-encoding gene of egg drop syndrome virus(EDSV) was identified and the hexon protein gene was obtained from it by restriction endonucleases.The gene was then directionally ... The plasmid PE which harbored the whole hexon-encoding gene of egg drop syndrome virus(EDSV) was identified and the hexon protein gene was obtained from it by restriction endonucleases.The gene was then directionally inserted into the PphI/KpnI sites of pQE32 and fused with the 6×His gene.This recombinant plasmid was transformed into E.coli M15 for expression and induced with IPTG.It was demonstrated by SDS-PAGE and Western blot that one expressed protein,110kD in size,could be specifically recognized by polyclonal anti-EDSV serum.The objective product was principally soluble and accounted for 21% of the total cellular proteins.The protein was used to detect the existence of antiEDSV IgG in 41 clinical chicken sera by agar diffusion test,and the result was in accordance with that when EDSV was used as antigen.These results showed that the expressed hexon recombinant protein can be used as diagnostic antigen of EDSV. 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 六邻体蛋白基因 表达 诊断抗原 应用
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