食源性高F值寡肽的制备及护肝功效研究进展

高F值寡肽广泛存在于自然界动植物中,是一种来源丰富、天然环保、无副作用的优质肽源,具有抗疲劳、抗氧化、醒酒、辅助治疗肝病及苯丙酮尿症等多种生物活性。高F值寡肽因其支链氨基酸含量较高,能够逆转肝病患者体内支链氨基酸与芳香族氨基酸比例失衡现象,在辅助治疗慢性肝病及其多种并发症方面起到了重要作用。主要对食源性高F值寡肽的蛋白原料、制备与分离纯化方法、护肝功效及相关作用机制进行了综述,重点介绍植物蛋白、动物蛋白中的水产品蛋白和乳源性蛋白几种原料蛋白,酶解法和微生物发酵法两种高F值寡肽的制备方法,膜分离法、活性炭吸附法和色谱分离法几种分离纯化方法,以及高F值寡肽的护肝功效和发挥护肝功效的三种途径,旨在为提高食源性高F值寡肽开发及其在食品医药领域中的应用提供参考。

马氏珠母贝高F值寡肽初步分离纯化及氨基酸组成分析

采用胰酶酶解马氏珠母贝肉蛋白,并利用活性炭吸附结合凝胶过滤层析得到高F值寡肽制品(PHFP)。进一步采用RP-HPLC对马氏珠母贝高F值寡肽制品进行初步分离分析,并且测定了各分离组分的氨基酸组成。研究结果显示,PHFP分子量分布主要集中在15～1 000 u。分离得到3个组成部分中PHFPb和PHFPc的支链氨基酸含量分别提高到30.2%和29.5%。PHFPa、PHFPb和PHFPc分别占PHFP的41.3%、38.8%和19.7%。

利用米曲霉羧肽酶由玉米蛋白粉制备高F值寡肽

本文简述了酶法水解玉米醇溶蛋白制备高F值寡肽的主要工艺步骤。重点考察了米曲霉固态发酵产生羧肽酶的影响因素,碱性蛋白酶和米曲霉羧肽酶两次酶解蛋白后的寡肽分子量分布,活性炭吸附去除寡肽中芳香族氨基酸的效果。

食物源蛋白高F值寡肽的制备及应用研究进展

寡肽一般由3~9个氨基酸残基组成,高F值寡肽是指寡肽混合物中支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)与芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)的物质的量比值(F值)大于20的肽,研究表明高F值寡肽具有多种生理活性。本文综述了食物源蛋白高F值寡肽制备原料选择、主要制备工艺及其生理活性研究进展,并对其未来研究趋势进行展望。

不同分子特性玉米蛋白高F值活性肽的制备及其模拟消化吸收

以玉米黄粉为原料,通过碱性蛋白酶和风味蛋白酶复合酶解制备玉米蛋白高F值活性肽(High Fischer ratio peptide,HFRP),同时根据分子量、电荷性和疏水性差异将HFRP进行分离纯化,并对其吸收特性和耐胃肠消化特性进行探究。结果表明:通过复合酶解法对玉米黄粉进行水解,得到HFRP(F值=26.29)。将HFRP分别按照分子量、电荷性和疏水性进行分离、收集,得到12种组分。通过构建Caco-2细胞体外吸收模型,研究不同分子特性组分的吸收状况,采用质谱扫描鉴定出质荷比(m/z)分别为203.1409、229.2980、226.9517、284.2966的高吸收短肽LA、IP、PL、HQ;通过研究不同分子特性组分的胃肠消化状况,采用质谱扫描鉴定出质荷比(m/z)分别为226.9517、284.2966的耐消化短肽PL和HQ。短肽PL和HQ分子量小,疏水性高,在溶液中带有正电荷,具有优先吸收和耐胃肠消化的特点。本研究为玉米蛋白高F值活性肽的开发提供了理论依据。

双酶分步水解金枪鱼(Eleotridae)碎肉制备高F值酶解液的工艺研究

以金枪鱼碎肉为原料,采用双酶分步水解法制备高F值酶解液,通过Box-Behnken试验设计,分别确定两步酶解的最佳条件,酶解液经活性炭静态吸附去除游离芳香族氨基酸,对脱芳后的酶解液进行氨基酸组成分析并测定F值。结果表明,胃蛋白酶为第一步水解用酶,酶解的最佳工艺条件为酶用量650U/g,料水比1∶7(g/mL),温度35.9℃;风味蛋白酶为第二步水解用酶,酶解的最佳工艺条件为酶用量50700U/g,pH 6.51,温度51℃,最终水解度达到36.87%±0.54%;酶解液在pH3.0,温度35℃条件下,经5%(质量体积分数)的活性炭吸附时间3h后,脱芳率达到63.18%,F值为30.33,符合高F值肽的要求。

活性炭吸附分离芳香族氨基酸的研究

采用动态吸附法,对18种活性炭进行了筛选,并确定吸附条件为pH3,吸附温度25℃,炭-液比1∶12,吸附时间120min。根据活性炭吸附前后的蛋清寡肽混合物溶液的全波长紫外扫面结果,发现活性炭对芳香族氨基酸吸附作用较强。经氨基酸自动分析仪测得蛋清高F值寡肽溶液F值为22,游离氨基酸含量7.8%,凝胶过滤色谱测定其分子质量分布为连续的,绝大部分分布在300～800u。

马氏珠母贝高F值寡肽在Caco-2细胞中吸收的初步研究

采用Caco-2单层细胞模型体外模拟马氏珠母贝高F值寡肽(PHFP)小肠吸收,研究结果显示:无论是AP面→BL面还是BL面→AP面,PHFP的吸收量均呈增加趋势。添加P-糖蛋白的专属抑制剂维拉帕米后,AP→BL的渗透系数由原来的6.83×10-7cm/min提高到8.16×10-7cm/min,而BL→AP渗透系数由8.84×10-7cm/min降低到2.20 10-7cm/min,说明PHFP溶液在Caco-2细胞中的转运存在外排泵的作用。并且,PHFP在Caco-2细胞转运过程中被细胞中所存在的代谢酶所代谢,而添加维拉帕米后,PHFP的代谢量有所降低。

活性炭色谱法分离芳香族氨基酸制备高F值蛋清低聚肽混合物的研究

研究了18种活性炭的吸附能力,选出对芳香族氨基酸具有较强吸附能力的活性炭品种,研究了其吸附条件和洗脱条件。测定了高F值蛋清低聚肽的氨基酸组成,计算出其F值为20,凝胶过滤层析法测其分子量分布在300～600之间。

活性炭静态吸附马氏珠母贝胰酶水解产物中氨基酸特性研究

采用胰酶酶解马氏珠母贝肉蛋白,研究了活性炭静态吸附前后酶解产物中氨基酸及各组分的变化情况。结果表明:在马氏珠母贝胰酶水解体系中,结合态和游离态芳香族氨基酸分别被吸附67.4%和42.3%,处于结合态的芳香族氨基酸更易于被活性炭吸附,并且活性炭吸附后,分子量较大组分的蛋白或多肽含量明显下降。

酶解魔芋飞粉制备高F值寡肽最佳工艺条件的研究

目的:为了得到高F值寡肽,需要对蛋白质进行水解。方法:采用酶法水解魔芋飞粉制备高F值寡肽。通过对蛋白质水解度的测定,确定了碱性蛋白酶和链霉蛋白酶的最佳酶解条件:碱性蛋白酶加酶量0.1%,底物浓度3.75%,pH9.0,水解温度45℃,时间5h;链霉蛋白酶加酶量0.03%,pH8.0,水解温度50℃,时间7h。酶解液再经过凝胶层析分离纯化后可用于制备高F值寡肽。

魔芋飞粉高F值寡肽的研究

简述了高 F值寡肽的生理功能及研究动向。介绍了根据魔芋飞粉含高蛋白及氨基酸组成为高支低芳的特点,对其进行高F值寡肽的研究开发进展。

超声振荡改性玉米醇溶蛋白及高F值寡肽制备

玉米醇溶蛋白经225 W的超声振荡处理90 min,改善其结构特性,解决50℃加热会形成“粘弹性面筋团”的现象。通过扫描电镜、红外光谱、差示扫描量热技术,清晰看到其微观表面形貌由片型韧状转变为块型松散状,变性峰显著减小,酰胺Ι带(1700~1600 cm-1)的吸收强度明显减弱。松散蛋白经Alcalase 2.4L碱性蛋白酶水解及超滤、纳滤膜过滤,得到F值为4.07的粗肽,其中相对分子质量小于1000的占比97.62%。ɑ-胰凝乳蛋白酶和羧肽酶A依次定向水解粗肽,联合活性炭脱芳,制备F值高达41.87的玉米寡肽,其中苯丙氨酸和酪氨酸仅占总氨基酸的0.73%,相对分子质量180~1000的占比71.37%。

魔芋飞粉高F值寡肽的开发利用

高F值寡肽是由3-9个氨基酸残基组成的,其中支链氨基酸含量高于芳香族氨基酸含量的低聚肽。该文阐述了高F值寡肽的生理功能及其研究动向,并根据魔芋飞粉氨基酸组成中支链氨基酸含量高于芳香族氨基酸含量的特性,对其进行了高F值寡肽的研究开发。

高F值活性肽的生物活性、制备技术及吸收评价技术的研究进展

高F值活性肽(HFRP)是指一类由2~9个氨基酸残基所组成的小肽，一般F值大于20。HFRP是一种重要活性肽，具有抗疲劳，补充人体必需氨基酸，促进酒精代谢，保肝护肝，促进氮储留和蛋白质合成，抑制蛋白质分解，改善手术后和卧床病人的蛋白营养状况等多种生理功能，因此具有良好开发应用前景。本文综述了高F值活性肽的生理功能及用途、原料及制备技术、耐消化性及肠吸收评价技术的研究进展，为新型活性肽保健食品的研究开发提供理论依据和技术支持。

活性炭法制备高F值栉孔扇贝酶解液的工艺条件

采用OD(220)/OD(280)、支链氨基酸保留率和芳香族氨基酸去除率3个指标,从5种活性炭中筛选脱除栉孔扇贝酶解液中芳香族氨基酸效果最优的材料。通过单因素和正交实验研究温度、pH、吸附时间、固液比对筛选得到的活性炭吸附效果的影响,并优化活性炭吸附工艺条件,制备出符合高F值要求的栉孔扇贝酶解液。结果表明,200目粉末活性炭A吸附效果最好,最佳吸附条件为温度35℃、pH 6、吸附时间2 h、固液比1∶15(g∶mL);经活性炭吸附后,酶解液中的支链氨基酸保留率达到73.869%,芳香族氨基酸脱除率达到93.120%,酶解液F值达到34.73。该活性炭吸附脱芳技术可以用于制备栉孔扇贝高F值寡肽溶液。

林蛙卵提取高F值低聚肽混合物的酶解方法

以林蛙卵渣作为原料,通过酶解的方法来制备高F值低聚肽,探讨短肽复合酶对林蛙卵渣中的蛋白质水解进程曲线。结果表明其最适条件为,底物浓度为3%(g/100 mL)、温度为50℃、pH8.0、酶添加浓度为2%(质量分数)、时间240 min。然后水解液经冷冻干燥得到F值20.18的低聚肽。

玉米高F值寡肽的制备研究

以玉米蛋白粉为原料采用酶法水解制备玉米高F值寡肽。研究表明,木瓜蛋白酶的最佳水解条件:温度为55℃,时间3.5h,酶添加量为4.0g/100g,pH7.0,此条件下消耗的NaOH溶液的体积为2.72mL。通过高效液相色谱和氨基酸成份分析,所得寡肽的分子质量主要分布区域为200Da^1000Da,所制取的玉米肽F值>20。

肝性脑病防治肽──高F值低聚肽的研究

支链氨基酸与芳香族氨基酸摩尔数之比称为Ｆ值（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｒａｔｉｏ）．本文叙述了已报道的高Ｆ值制品经注射或口服均可改善肝性脑病病人血液氨基酸的功效，并对其药理及临床实效进行了简介． 本研究以玉米黄粉为原料，经过二次选择性酶解．制成低聚肽混合物，并以活性炭选择性地分除芳香族氨基酸或肽，从而制得Ｆ值＞２０的高Ｆ值功能低聚肽混合物，其得率（产品含氟量：黄粉含氮量）为１５％左右，无苦味． 本研究以大鼠进行的动物试验证实了所得产品具有防治肝性脑病的功效，其效果等于（或微优于）市售相应的晶体氨基酸的配制品．预计本研究所得产品的成本将远低于市售者。

茶蛋白制备高F值低聚肽的定向酶切工艺研究

研究了以茶蛋白为原料制备高F值低聚肽过程中的酶解工艺,采用两步定向酶切的方式,探讨合适的蛋白酶种类,并通过单因素试验考察相关工艺条件对酶切效果的影响。结果表明:碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶联用对茶蛋白的水解效果较好;一级定向酶切的最适工艺条件为:底物浓度5%、加酶量(E/S)4%、反应液pH 9.0、反应温度50℃、反应时间3h,此条件下茶蛋白的水解度达到36.02%;二级定向酶切的最适工艺条件为:加酶量(w/v)0.2%、反应液pH值6.5、反应温度55℃、反应时间2h,此条件下水解液的OD220/OD260值达到2.53。该试验为后续水解液分离纯化制备高F值低聚肽产品奠定了基础。