化脓隐秘杆菌间接免疫荧光方法的建立及应用

通过制备兔抗化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)高免血清,筛选固定方法、封闭液、洗涤液、抗体稀释度、抗体孵育时间等应用条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌的间接免疫荧光方法。结果表明:用冷丙酮作固定剂,10%山羊血清作封闭液,0.05%Tween–20的0.01 mol/L pH 7.4 PBS(磷酸缓冲盐溶液)作洗涤液,兔抗化脓隐秘杆菌高免血清(一抗)1∶50稀释,37℃作用2 h,羊抗兔FITC(二抗)1∶100稀释,37℃作用2 h,草酸铵结晶紫衬染菌体3 min,对纯培养物化脓隐秘杆菌检测,可见清晰的特异性荧光,能区分溶血隐秘杆菌、伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、猪链球菌;在人工感染化脓隐秘杆菌死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及发病山羊临床病料中均能检出化脓隐秘杆菌。

小鹅瘟羊源高免血清的制备及比较

为制备高效价的小鹅瘟高免血清,试验采用从贵州某养鹅场病鹅分离的小鹅瘟野生强毒株,接种于9 d鹅胚,收集24 h以后死亡的鹅胚尿囊液,制备小鹅瘟病毒抗原,与弗氏佐剂混合均匀,多次免疫山羊后,颈动脉一次性放血,离心收集血清即得到小鹅瘟羊源高免血清,以琼脂扩散进行血清效价测定,并与市售小鹅瘟鹅源高免血清进行保护率比较。结果显示,试验制备的小鹅瘟羊源高免血清抗体效价在1∶8以上,对人工感染雏鹅的保护率为95%,而市售小鹅瘟鹅源高免血清的保护率只有85%。结果表明,本试验制备的小鹅瘟羊源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点。

山羊抗小鹅瘟高免血清的制备及应用

小鹅瘟是雏鹅感染鹅细小病毒(Goose plaguevirus,GPV)所引起的一种急性败血型传染病,病程短且死亡率很高,主要侵害1月龄以内的雏鹅和雏番鸭。目前,市场销售的对此病进行免疫和治疗的抗小鹅瘟血清存在产量低、成本高,且容易导致某些鹅源疫病的传播的缺点。笔者采用从贵州铜仁市等地的养鹅场采集的病鹅分离出的小鹅瘟野生强毒株接种于9日龄的鹅胚尿囊液制备了小鹅瘟病毒抗原,并用小鹅瘟病毒抗原加弗氏佐剂后,分多次皮下注射结合静脉注射小鹅瘟病毒抗原免疫贵州黑、白山羊。颈动脉一次性放血制备抗小鹅瘟异源高免血清,用琼脂扩散进行效价的测定,结果显示其抗体效价平均都在1∶8以上。将制备的血清与市售的抗小鹅瘟进行了对比试验,结果市售的抗小鹅瘟血清的保护率为85%,山羊抗小鹅瘟高免血清的保护率为95%。山羊抗小鹅瘟异源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点。