高效离心分配色谱(HPCPC)分离纯化苹果树枝中的根皮苷

根皮苷是苹果中主要的水溶性多酚化合物,对人体具有多种生理保健功能。为了获得高纯度的根皮苷,运用高效离心分配色谱技术对苹果树枝乙醇提取物中的根皮苷进行分离纯化。对两相溶剂体系、转子转速和流动相流速等参数进行系统的优化实验。结果表明,最佳两相溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶5∶1∶5,v/v),上相有机相为固定相,下相水相为流动相,转子转速为1500r·min-1,流速为3.0mL·min-1,紫外检测波长为287nm。在此条件下,在30min内,从纯度为17.91%苹果树枝乙醇提取物中一步分离纯化得到根皮苷,高效液相色谱法测定其纯度为91.20%,根皮苷的回收率为98.10%。

基于HPCPC白首乌C21甾体苷诱导PC-3细胞凋亡研究

目的从白首乌块根中提取纯化C21甾体苷类化合物,并研究其诱导PC-3肿瘤细胞凋亡作用。方法运用高效离心分配色谱,从白首乌总苷中分离纯化C21甾体苷,并利用FCM检测对PC-3细胞周期和凋亡的影响,利用AO荧光染色观察凋亡细胞形态学。结果提取物对PC-3细胞的诱导凋亡作用具有量-效关系,且可以浓度依赖性的提高细胞G2/M期比例;AO染色荧光显微镜观察,提取物可诱发明显的核断裂和核固缩,以及凋亡小体的形成。结论运用高效离心分配色谱分离纯化白首乌中的C21甾体苷,提取物能诱导PC-3肿瘤细胞凋亡,发生G2/M期阻滞,这可能是它抗肿瘤作用机制之一。

基于HPCPC白首乌C_(21)甾体苷的抗肿瘤活性研究

目的:从白首乌块根中提取纯化C21甾体苷类化合物,建立相关检测方法,并研究其抗肿瘤活性。方法:运用高效离心分配色谱,从白首乌总苷中分离纯化C21甾体苷,提取物通过HPLC分析,并利用MTT法进行细胞毒活性测试。结果:在PC-3,SGC-7901,BGC-823,BEL-7402和KB细胞株上进行的测试表明,提取物对PC-3和SGC-7901具有抗肿瘤作用,IC50分别为(29.58±1.65)μg/mL和(66.55±2.73)μg/mL。结论:运用高效离心分配色谱分离纯化白首乌中的C21甾体苷类化合物,操作简单,成分明确,提取物表现出一定抗肿瘤活性。

微柱离心-HPLC法测定枸橼酸他莫昔芬脂质体包封率的方法研究

建立了枸橼酸他莫昔芬脂质体(TAM-LIPs)包封率的测定方法。采用薄膜分散法制备TAM-LIPs,用葡聚糖凝胶G-50填充微柱,以水为洗脱液,离心分离TAM-LIPs与游离药物后,通过高效液相色谱法(HPLC)测定枸橼酸他莫昔芬浓度并计算包封率,利用Box-Behnken效应面法优化微柱离心法测定条件。优化条件下,HPLC法能准确测定药物含量,洗脱曲线表明洗脱4次可以使载药脂质体完全被洗脱,可实现脂质体与游离药物良好分离,验证制备的3批TAM-LIPs包封率的RSD值满足方法学要求。建立的葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法测定结果准确,操作简单快捷,可用于TAM-LIPs包封率的准确测定。

超滤离心法测定柚皮素非离子表面活性剂囊泡的包封率

目的为解决柚皮素溶解度低、不易定量测定的问题,建立一种测定柚皮素非离子表面活性剂囊泡(naringenin niosomes,Nar-Nio)包封率的方法。方法采用超滤离心法分离Nar-Nio和游离柚皮素(naringenin,Nar),并通过高效液相色谱仪测定包载Nar和游离Nar含量,计算包封率。通过单因素实验进行Nar-Nio处方优化,使用该法平行测定3批Nar-Nio的包封率和载药量。结果柚皮素在0.5~100μg/ml范围内峰面积与浓度呈良好线性关系(R^(2)=0.9999)。日内及日间精密度RSD均小于2%。超滤膜吸附率、加样处理回收率以及超滤加样回收率在98%~102%之间。Nar-Nio的最佳处方和工艺为柚皮素3 mg,Span-60质量24 mg,胆固醇16 mg,水化介质体积15 ml,水化温度60℃,搅拌速度800 r/min,搅拌时间60 min。使用该法平行测定3批Nar-Nio,平均包封率和载药量分别为81.23%和1.88%。结论超滤离心法重复性好、准确度高、操作方便,能够较好分离游离药物,可用于Nar-Nio包封率的测定。

多剂量口服给药后辅酶Q_(10)缓释片和普通片在健康人体内的血药浓度

目的 比较辅酶Q10 缓释片与辅酶Q10 普通片多剂量给药后的经时变化过程。方法 将 2 0名男性健康志愿受试者等分为两组 ,一组受试者每人每天 po 5 0mg的辅酶Q10 缓释片 ,连服 15d ,另一组受试者每人每天 po 5 0mg的辅酶Q10 普通片 ,服药期间及服药前后 ,在规定的时间内采取静脉血 ,测定血浆中辅酶Q10 总含量。血浆经甲醇沉淀蛋白后 ,以正己烷提取 ,分离水相和有机相 ,收集有机相 ,氮气吹干 ,将所得残渣溶于 10 0 μL无水乙醇中 ,进行HPLC检测。检测波长为 2 75nm ,流动相为乙醇 甲醇 (9∶1) ,内标物为辅酶Q9。结果 建立的体内HPLC UV分析方法简便、稳定、适宜于进行生物样品分析。受试者经过 15d po辅酶Q10 缓释片和普通片 ,每天 po一次 ,每次剂量为 5 0mg ,测得血浆中总辅酶Q10 浓度表明 ,受试者服缓释片后血浆中辅酶Q10 浓度高于对照组服普通片后的血药浓度。结论 多次服用缓释片的稳态血药浓度高于普通片的稳态血药浓度 ,原因在于缓释片可持续释放、持续吸收 ,从而保持血浆中较高的浓度。

高效液相色谱法测定人血浆中氟尿嘧啶浓度

目的 测定人血浆中氟尿嘧啶的浓度。方法 高效液相色谱法 ,测量氟尿嘧啶的波长λmax=2 5 4nm ,流动相为水 甲醇 冰醋酸 ( 96.95∶3 .0∶0 .0 5 ) ,pH =3 .5。 结果 回归方程为Y =11.82X + 0 .0 78(r =0 .9992 ) ,其线性范围为 0 .66～ 42 .0 0 μg·mL-1,最低检测浓度为 0 .15 49μg·mL-1(S/N =3 )。结论 该法简单、快速、结果准确 。

龙胆及其复方中龙胆苦苷在大鼠体内的药动学研究

目的建立RPHPLC快速测定大鼠血清中龙胆苦苷浓度的方法,研究龙胆及复方脂肝宁胶囊中龙胆苦苷的药动学特点,评价中药材中其他成分和复方中其他配伍对龙胆苦苷药动学的影响。方法大鼠灌胃给予龙胆苦苷对照品、龙胆药材提取物、脂肝宁胶囊,眼眶采血,离心,取血清适量用3倍量甲醇沉淀蛋白,取上清液过滤,用HPLC测定龙胆苦苷血药浓度,以C18为固定相,流动相为乙腈水(20∶80),在270nm处检测,3P97程序处理数据。结果龙胆苦苷血清浓度在0158～812μg·mL-1内线性良好,最低检出浓度为48ng·mL-1,高、中、低浓度样品的回收率分别为995%,1005%,963%。给大鼠灌胃龙胆苦苷对照品、龙胆药材提取物及脂肝宁胶囊后药时曲线均符合二房室模型,药动学参数t1/2α,t1/2β,tmax,AUC(0～∞),CL(s)龙胆苦苷对照品组与其他两组可见显著性统计学意义,而其他两组间却无显著性统计学意义;3组的药动学参数cmax无显著性统计学差异。结论本方法准确、简便,能较好地满足龙胆苦苷在大鼠体内的药动学研究;研究表明龙胆中的其他成分对龙胆苦苷的药动学产生很大影响,而未观察到脂肝宁胶囊中其他药材对龙胆苦苷的药动学的影响。

佐米曲普坦在不同pH条件下的平衡溶解度和表观油水分配系数

目的:测定佐米曲普坦在水和不同pH磷酸缓冲盐中的平衡溶解度以及在正辛醇-水和正辛醇-缓冲液体系中的表观油水分配系数。方法:采用HPLC法测定佐米曲普坦的浓度,用摇瓶法测定佐米曲普坦的表观油水分配系数。结果:佐米曲普坦在37℃水中的平衡溶解度为12.6g/L,在pH值3.6、4.5、6.0、6.8、7.4、8.0、9.0磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度依次为1382.0、553.0、85.2、71.5、47.1、11.5、4.85g/L。佐米曲普坦在水中的表观油水分配系数Papp为0.013,在不同的pH值缓冲液中的表观油水分配系数依次为0.04、0.06、0.14、0.20、0.23、0.25、1.44。结论:在pH3.6～9.0范围内,随着pH值增加,佐米曲普坦平衡溶解度减小,而表观油水分配系数则增大。

微柱离心结合胆固醇浓度变化测定水溶性药物脂质体包封率

目的建立微柱离心法结合胆固醇含量变化来考察水溶性药物脂质体包封率的测定条件。方法采用HPLC法测定脂质体混悬液中胆固醇的浓度,以微柱离心法分离游离药物和脂质体,并用过柱前后脂质体混悬液中胆固醇浓度之比考察脂质体的过柱回收率,进一步测定脂质体的包封率。结果所建立的HPLC法可以准确测定脂质体破乳后溶液中的胆固醇浓度。采用筛选的微柱离心条件洗脱,1、2管空白脂质体的柱回收率为（98.49±0.29）%（n=3）,而药物不被洗脱下来,第3~15管游离药物的平均柱回收率为（99.59±0.28）%（n=3）。测定水溶性药物苯妥英钠脂质体的包封率为（25.46±0.27）%（n=3）。结论微柱离心法适用于水溶性药物苯妥英钠脂质体包封率的测定,游离药物和脂质体被有效分离,通过结合过柱前后胆固醇浓度变化考察脂质体的过柱回收率,可获得更加准确的包封率测定结果。

反相高效液相色谱法测定水杨酸的平衡溶解度及表观油水分配系数

目的采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定水杨酸25℃平衡溶解度及表观油水分配系数(Papp),为其制剂的设计与制备提供理论依据。方法采用摇瓶法及HPLC法,Waters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液=(47∶53);柱温:室温;流速:1.0 m L·min-1,检测波长:270 nm;进样量20μL。考察25℃水杨酸在水中,p H值1.0盐酸溶液,p H值2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,7.8磷酸盐缓冲溶液体系中平衡溶解度及Papp。结果25℃下水杨酸在水中平衡溶解度为(2.205±0.020)mg·m L^(-1),Papp为(6.18±0.08);在p H值1.0盐酸溶液,p H值2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,7.8磷酸盐缓冲液中平衡溶解度分别为(1.169×10-3±7.40×10-6),(2.250±0.010),(2.410±0.010),(2.694±0.003),(5.208±0.010),(5.826±0.006),(6.255±0.030),(3.353±0.070)mg·m L^(-1),相应的Papp分别为(16.39±0.19),(4.23±0.07),(6.03±0.11),(5.56±0.10),(1.25±0.01),(0.27±0.001),(0.08±0.001),(0.07±0.002)。结论水杨酸的平衡溶解度随溶液p H值增大而增大;Papp随着p H值的增大而减小。其溶解度小,脂溶性小,属于生物药剂学分类系统(BCS)的Ⅳ类药物。

银杏内酯B及其前药脂水分配系数的测定

目的建立银杏内酯B及其前药脂水分配系数的测定方法,为后续脑靶向研究提供参考。方法采用摇瓶法和高效液相色谱法测定两者在正辛醇-水体系中的脂水分配系数,并考察影响因素。结果 25℃下,银杏内酯B及其前药的脂水分配系数分别为0.59和1.05。正辛醇与二次蒸馏水配比,脂相稀释溶剂及稀释比例对脂水分配系数的测定有一定影响。结论与银杏内酯B相比,前药脂水分配系数有所提高,证明前药具有更高的脂溶性,推测其应有良好的血脑屏障通透性。

响应面试验优化苦杏仁粕中苦杏仁苷提取工艺及其高效离心分配色谱纯化

为实现苦杏仁资源的高效利用,以带皮生杏仁为原料,首先研究热烫去皮对苦杏仁苷含量的影响,然后采用响应面试验优化了超声辅助提取压榨脱脂苦杏仁粕中苦杏仁苷的工艺条件,应用高效离心分配色谱分离制备高纯度苦杏仁苷。结果表明:按料液比1∶5(g/mL)加入沸水,煮沸10 min,能够较好地达到灭酶保苷的目的,苦杏仁苷含量为(4.72±0.14)%;压榨脱脂苦杏仁粕中苦杏仁苷最佳提取工艺条件为73%乙醇溶液、液料比8∶1、超声温度70℃、提取时间20 min、提取2次,苦杏仁苷的提取率达8.03%;高效离心分配色谱纯化苦杏仁苷的最佳条件为以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水(2.5∶0.625∶0.5∶4,V/V)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,转速900 r/min,流速2.0 mL/min,分离纯化得纯度为96.14%的苦杏仁苷。

高效液相色谱法测定双哌嗪双季铵盐药物的分配系数及对构效关系的考察

采用高效液相色谱法测定了１０种新合成的双哌嗪双季铵盐药物的油－水分配系数，并对其毒性及生物活性进行了测试。讨论了分配系数、毒性、活性及分子结构间的关系，找出了２个理想的先导药物。

基于反相高效液相色谱法构建QSRR模型测定萘类及蒽醌类化合物的正辛醇-水分配系数

正辛醇-水分配系数（Kow）是评价药物毒性、活性及跨膜转运等的重要参数,但直接测定法实验过程复杂。本研究采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法,以甲醇-水为流动相,以29种已知Kow的酸性和中性苯系物及萘类、醌类衍生物为模型化合物,以保留时间两点校正法（DP-RTC）校正保留时间,并由SnyderSoczewinski方程得100%水相保留因子（kw）,建立了表观正辛醇-水分配系数Kow″与kw的定量关系（Quantitative structure-retention relationship,QSRR）模型,并对模型进行了内、外部验证。结果表明,不同p H下的QSRR模型线性相关性R2=0.974~0.976,内部验证（R2cv=0.970~0.973）和外部验证结果 （6种验证化合物,1.4%≤相对误差（RE）≤7.9%）令人满意,与考虑了分子结构参数后建立的线性溶剂化能模型（LSER）相比无差异。将建立的QSRR模型应用于11种萘类和蒽醌类化合物的Kow测定,并与软件计算值、摇瓶法实验值比较,结果表明,本方法准确性更高,且简单快捷,可用于快速准确预测复杂混合物体系中组分的Kow。

微柱离心-HPLC法测定载左旋多巴聚乙二醇化固体脂质纳米粒的包封率

目的建立测定左旋多巴聚乙二醇(PEG)化固体脂质纳米粒包封率的方法,进行质量评价。方法采用葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)微柱离心法分离固体脂质纳米粒和游离药物;高效液相色谱(HPLC)法测定固体脂质纳米粒中左旋多巴含量,计算包封率。结果在所建立的色谱条件下,辅料不干扰测定,左旋多巴在10.54~527.00μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,高、中、低浓度加样回收率分别为99.13%,99.51%,99.04%,RSD分别为1.25%,1.91%,1.71%;所建立的微柱离心条件能有效分离左旋多巴固体脂质纳米粒与游离药物。空白固体脂质纳米粒的洗脱率为98.84%,RSD为0.80%(n=3),3种浓度游离药物的平均吸附率分别为100.00%,98.75%,98.56%,RSD分别为0.00%,0.19%,0.18%(n=3);3种不同浓度药物和空白PEG化固体脂质纳米粒物理混合液的吸附率分别为99.68%,98.46%,99.21%,RSD分别为1.52%,0.23%,0.21%。结论该方法方便快速,准确度高,重复性好,可用于测定载左旋多巴PEG化固体脂质纳米粒的包封率。

分散液-液微萃取快速、直接测定有机化合物lgP值

用3-氯丙基三甲氧基硅烷对Fe3O4纳米球的表面进行改性,制得表面疏水的Fe3O4/SiCH2CH3Cl纳米球.将Fe3O4/SiCH2CH3Cl纳米球均匀预分散在正辛醇中,利用分散液-液微萃取建立了快速、直接测定有机化合物lgP值的新方法.待测有机化合物可在3 min内在两相达到分配平衡,通过磁铁吸引含有Fe3O4/SiCH2CH3Cl纳米球的正辛醇小液滴,可实现两相快速完全分离.在萃取过程中,由于Fe3O4/SiCH2CH3Cl纳米球被正辛醇包围,失去对待测化合物的吸附能力,因此Fe3O4/SiCH2CH3Cl纳米球对测定有机化合物分配平衡的影响很小.通过该方法测定了14种不同有机化合物的lgP值,结果均与文献报道一致.与其它直接测定方法相比,该方法快速、准确、简单且样品消耗少.

蟾酥中3种蟾毒配基组合物的表观溶解度和表观油水分配系数的测定

目的:测定蟾酥中3种蟾毒配基组合物的表观溶解度和表观油水分配系数。方法:采用高效液相色谱法测定了蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG,CBG,BL的表观溶解度,采用摇瓶法测定了RBG,CBG,BL的表观油水分配系数。结果:37℃,pH 7.0时,蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG,CBG,BL的表观溶解度均为最大值,分别是76.29,51.85,32.76μg.mL-1,总溶解度为160.9μg.mL-1。在偏酸和偏碱性条件下,三者均有不同程度的降解。RBG,CBG,BL在不同pH条件下各自logP值差别不大,pH对RBG,CBG,BL的油水分配系数影响不显著,三者的油水分配系数均较大,为典型的疏水性产物,三者的疏水性大小顺序为RBG>BL>CBG。结论:蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG,CBG,BL的水溶性差,疏水性极强,应考虑加入表面活性剂增溶,以利于注射制剂的成型。

疏水分配常数用于反相液相色谱保留值的预测

在反相液相色谱保留值基本方程log k_′=a+_cC_B的基础上,描述了采用疏水分配常数及氢键作用能来预测a、c参数的方法,并系统讨论了疏水分配常数对参数a、c的影响,借此对反相液相色谱宽浓度范围内的保留值进行了预测。

低温离心净化-高效液相色谱法快速测定腐竹中的碱性橙II和碱性嫩黄O

目的建立腐竹中碱性橙II和碱性嫩黄O的低温离心净化-高效液相色谱测定方法。方法样品经70%的乙腈-氨水(0.5%)提取,4℃低温、12000 r/min离心净化,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分离,最后采用二极管阵列检测器(PDA)检测,以保留时间(Rt)定性,外标法定量。结果在0.00125~0.05 mg/m L的浓度范围内,标准曲线有良好的线性关系,相关系数大于0.9999;样品在0.05、2.0、10.0 mg/kg三个加标水平内的回收率范围为95.0%~103.0%(n=10),相对标准偏差小于5.0%。方法的检出限(LOD)为0.02 mg/kg,定量限(LOQ)为0.05 mg/kg。结论对实际样品测试结果与参考文献方法比较,该方法具有简便、快速、灵敏、费用低,便于推广应用。