HPGFC-ELSD法测定商陆多糖的重均相对分子质量

目的 :测定商陆多糖的重均相对分子质量。 方法 :将商陆多糖分离纯化 ,采用 HPGFC- EL SD法测定重均相对分子质量分布。测定条件为 TSK柱 (G2 0 0 0 SW,7.5 mm× 30 0 mm) ;水为流动相 ,流速 1 .0 ml/ min;漂移管温度 4 0℃ ;气体 (N2 )压力 2 .0× 1 0 5Pa。结果 :多糖重均相对分子质量的线性范围为 1 0 0 0 0～ 1 70 0 0 0 (r=0 .973) ,测得商陆多糖重均相对分子质量约为 76 896 .4。 结论

HPGFC双柱串联检测右旋糖酐蔗糖酶催化产物及右旋糖酐聚合过程

建立一种能够精密检测产物右旋糖酐分子质量变化及定量跟踪检测蔗糖、葡萄糖及果糖浓度的方法。通过对比高效凝胶过滤色谱单柱和双柱串联对右旋糖酐标准品及催化产物的检测效果,探寻得到右旋糖酐分子质量检测的有效方法。同时,通过构建右旋糖酐蔗糖酶耦合两级膜探索得到右旋糖酐的合成机理是葡萄糖基在右旋糖酐蔗糖酶活性位点上,不断聚合,直至达到一定的分子质量(m_w>10~6 Da)才脱落,而不是一个从小到大、慢慢聚合、不断脱落的过程。

大豆低聚肽的分离纯化及呈鲜序列鉴定

为了分析大豆低聚肽中鲜味肽成分,本文通过纳滤分离结合感官评价对大豆低聚肽进行了初步分离得到鲜味最佳组分Pb-3,通过凝胶过滤层析从Pb-3中分离出鲜味和增鲜效果最强的Fb-2,进一步采用反相高效液相色谱分离出鲜味效果最佳的Kb-2,采用超高效液相色谱-串联质谱法从Kb-2中鉴定出鲜味肽.结果显示:与对照组相比,相对分子质量为300~500的大豆低聚肽Kb-2具有较强的鲜味和增鲜效果;鉴定出3种鲜味肽,分别为2个四肽Val-Thr-Val-Glu(VTVE)、Leu-Glu-Lys-Asp(LEKD)和1个三肽Trp-Glu-Arg(WER).本研究为大豆低聚肽生产复合调味品提供了理论支持.

高效凝胶过滤色谱法测定皂角米中多糖组分

采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定皂角米中多糖组分的含量,以水凝胶色谱柱Ultrahydrogel^(TM) Linear300 mm×7.8 mmid×2为分离柱;以0.1 mol/L硝酸钠为流动相;流速:0.8 mL/min;柱温:40℃。试验表明,多糖组分1#(M_(w)=2 115 637),2#(M_(w)=12 516),3#(M_(w)=418)在质量浓度0.10~5.00 g/L之间,峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,相关系数γ为0.999 5,0.999 2,0.999 0(n=5),方法检出限为0.056,0.053,0.050 g/L,加标回收率为96.7%~102.0%,96.0%~101.6%,94.0%~103.6%,相对标准偏差为0.63%~1.81%,0.81%~1.94%,1.01%~2.03%(n=6)。该方法操作简便,具有良好的重复性和回收率,可用于皂角米中多糖组分的检测。

蛋白质分子量测试方法概述

分子量是蛋白质主要的特征参数之一,近年来其测试方法发展十分迅速。该文概述了目前蛋白质分子量测试中应用最广泛的凝胶电泳法、高效凝胶过滤色谱-激光光散射法以及生物质谱技术的原理和应用发展现状等。

微波辅助法提取赤灵芝孢子多糖及其相对分子质量分布分析

将微波辅助提取技术应用于灵芝孢子粉多糖的提取,结合HPGFC分析法检测其多糖相对分子质量的分布,研究了微波对灵芝孢子粉多糖提取率及提取的多糖相对分子质量分布的影响。结果表明:在试验条件限定的范围内,微波辅助提取法的优化提取条件为功率300W,温度125℃,提取时间15min,料液比1∶15(g∶mL),循环提取2次;此法提取的灵芝多糖产品中相对分子质量>10ku的多糖占多糖峰面积百分比50%以上。

棉粕蛋白及其枯草蛋白酶酶解产物的组分分析

通过常规测定、凝胶层析、高效液相色谱等3种方法，测定和分析了棉粕蛋白及其枯草蛋白酶酶解产物的组份，并进行比较研究。结果表明，棉粕经过枯草杆菌蛋白酶酶解之后，可溶性蛋白比例比原来增加了1倍，游离氨基酸的含量增加了2.9倍；棉粕原料和酶解后的蛋白质产物经过SephadexG-50凝胶层析分离后均得到2个主要蛋白峰，并且它们相对分子质量分别为16300u和7950u左右，而酶解物2个峰的蛋白质含量比棉粕原料中的少；通过高效液相色谱分析，棉粕蛋白含有较多大分子蛋白，酶解之后大分子蛋白含量下降了7.71％，小分子肽的种类与含量明显增加，含量由16.36％增加至63.27％，游离氨基酸的含量由4.9％增加至19.4％。

反相高效液相色谱-质谱联用法测定抑菌肽功能单元的氨基酸序列

测定乳酸菌发酵液中小分子抑菌肽抑菌功能单元的氨基酸组成序列对于深入理解其抑菌原理并实际应用有重要意义。作者利用AssayMAP Bravo蛋白纯化系统平台,采用色谱-质谱联用法将相对分子质量为3 500的抑菌肽样品经过凝胶过滤色谱分离纯化,两步反相高效液相色谱分离纯化和二维质谱鉴定,得到高纯度、高抑菌活性的三个抑菌功能单元,氨基酸组成序列分别为Phe-Tyr-Pro-Ser-Tyr-Ala,Asn-Glu-Arg-His和Lys-Glu-Ile-Thr-Pro-Ser-Glu-Arg,即该小肽的功能单元由三个短肽组成。结果表明,利用该方法,能够有效地提取并检测该小分子抑菌肽,其在氨基酸组成上与Nisin不同。

高效凝胶过滤色谱填料KH-s-GFC300的合成与评价

以碱溶法制备的高孔隙度硅胶为基质,与γ-环氧丙基丙氧基三甲氧基硅烷配基进行共价键合,经过酸性水解,使其转化为二醇基,制成了高效亲水凝胶色谱填料.键合反应中采用70 ℃回流冷凝管,使生成的甲醇可顺利地排到体系外,促使反应向有利于键合的方向进行,以获得较高的配基密度.研究表明,水解反应条件与配基密度以及柱效密切相关.当配基密度为2.6～3.5 μmol/m2时,才能显示出较高的柱效.蛋白质分离实验结果显示,此填料的相对分子质量排阻极限为300 000,牛血清白蛋白的回收率为99%.

桑叶多糖SDS-1和SDT-1的系统分离纯化

对桑叶水提取的粗多糖在离子交换纤维素上的吸附量进行了考察,然后利用离子交换纤维素柱色谱将粗多糖分为4个电荷性质不同的亚组分SD0、SD0.1、SD0.2、SD0.3。通过桑叶粗多糖在离子交换纤维素的吸附解吸行为可知,桑叶多糖主要以酸性多糖的形式存在。其中主要组分SD0.2进一步采用Sephacryl S-200凝胶介质进行纯化,采用苯酚-硫酸法和高效凝胶过滤色谱法同时进行检测,得到均一多糖SDS-1和SDT-1。SDS-1的Mw=8.9×104,Mn=7.5×104,分散度D=1.18;SDT-1的Mw=1.54×104,Mn=1.42×104,D=1.08。

高效液相色谱法在合成多肽分离与纯化中的应用

近年来 ,多肽药物化学形成并迅速发展成为药物化学的重要分支。而随着分离纯化技术的进展 ,又大大加快了新活性多肽的发现和合成速度。在多肽合成中 ,许多杂质显示与产物类似的性质 ,随着肽链的增长 ,分离的难度也增大 ,因此纯化的方法和工艺显得异常重要。本文综述了凝胶过滤色谱。

胸腺肽高分子量物质检测方法的优化

目的优化现行胸腺肽质量标准中控制高分子量(Mw)物质的检测方法,解决该方法存在的对照品Mw大小与洗脱时间矛盾的问题。方法采用高效液相凝胶过滤色谱法(HPGFC),改变流动相的组成,建立高Mw物质的分析方法,并进行方法学验证。结果确定三氟乙酸-乙腈-水(0.05∶45∶55)作为流动相的HPGFC分析方法,在该洗脱条件下,对照品的洗脱顺序符合Mw变化的规律,经过方法学验证,改进后的方法更适于检测高Mw物质的含量。结论优化后的高Mw物质检测方法可用于胸腺肽制剂的质量控制,并为其他生化制剂高Mw蛋白检测提供了方法学参考。

高效凝胶过滤色谱法测定啤酒中混浊活性蛋白质的研究及应用

建立了啤酒中混浊活性蛋白质的提取制备方法和基于高效凝胶过滤色谱的蛋白质分析方法,对混浊活性蛋白进行了系统的分子量分布特点及定量分析,并将其应用在了啤酒非生物稳定性及啤酒样品分析领域高效凝胶过滤色谱法解决了混浊活性蛋白分子量及含量难以测定的问题,对啤酒生产蛋白质分子量的控制也具有重要的指导意义结果表明混浊活性蛋白的分布区间为23.4-150.0 kDa、5.7-23.4 kDa、1.0-5.7 kDa和05-1.0kDa啤酒样品中蛋白质含量最高的分子量包括4.8 kDa,2.4 kDa,3.9 kDa和128.8 kDa方法相对标准偏差为0 3％-2.0％,不需混浊活性蛋白提取制备过程中的透析除盐处理,大大简化了操作流程方法简便快速,准确度高,重复性好最后应用该方法对啤酒稳定剂硅胶、酿造单宁和脯氨酸蛋白酶的作用效果进行了分析研究.结果显示硅胶主要去除0.5-1.0 kDa,酿造单宁去除32.0-55.0kDa,而脯氨酸蛋白酶主要去除51.6-150 0kDa部分蛋白质.

高效凝胶过滤色谱法测定菊糖聚合度

菊糖属于天然大分子多糖,其生理活性与性质受聚合度的影响。以OHpak SB-802.5 HQ为色谱柱,进样量为20μL,柱温为30℃,流动相为0.3 mol/L NaNO3溶液,流速为0.3 mL/min,通过GPC软件拟合三次方程标准曲线,利用高效凝胶色谱方法检测了9个样品的分子量并计算了其聚合度。结果表明,9个样品的菊糖聚合度在10~29,同种原材料的不同批次和不同品种间聚合度均存在差异。该方法为分析样品中菊糖的结构性质及控制产品质量提供了参考依据。

高效凝胶色谱法测定头孢替唑钠及其注射剂中的聚合物类杂质

目的建立高效凝胶色谱法测定头孢替唑钠及其注射剂中的聚合物杂质,并采用二维液质联用法对聚合物杂质的结构进行推断。方法采用TSK-Gel 2000SWXL凝胶色谱柱(7.8mm×300mm,5μm),0.005mol/L磷酸盐缓冲液[0.005mol/L磷酸氢二钠-0.005mol/L磷酸二氢钠(61:39)]-乙腈(95:5)为流动相,流速为0.7mL/min,检测波长254nm,进样量20μL;二维色谱采用Waters HSS T3(100mm×2.1mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱;质谱采用ESI离子源,正离子模式检测。结果主成分前后共分离得到6个杂质峰;头孢替唑检测浓度的线性范围为0.5~20μg/mL(r=1.0000),检测限与定量限分别为0.015和0.05μg/mL,重复性试验各杂质含量的RSD均在合理范围内(n=6);采用LC-MS推定了3个聚合物类杂质的结构。结论本方法灵敏度和准确度好,适用于头孢替唑钠及其制剂中聚合物杂质的控制。

β-内酰胺类抗生素聚合物杂质控制策略的形成与发展

对聚合物杂质的分析是当前β-内酰胺类抗生素杂质谱控制的最薄弱环节。控制聚合物杂质源于人们对β-内酰胺类抗生素过敏反应的关注。伴随着β-内酰胺类抗生素过敏反应机制、聚合物结构和聚合机制等研究的深入,人们对β-内酰胺类抗生素聚合物的控制理念也逐渐成熟。采用专属的RP-HPLC方法,利用聚合物谱(polymer profile)评价生产工艺;同时,利用指针性聚合物控制聚合物的总量和工艺的稳定性,是控制β-内酰胺类抗生素聚合物的理想方案。利用强制聚合样品,通过二维色谱-MS联用技术,可以快速建立RP-HPLC聚合物谱分析方法,从技术上解决了聚合物谱控制的难题。但如何确定β-内酰胺类抗生素聚合物的质控限度问题仍需要进一步的思考。

溶剂环境对乙肝表面抗原(HBsAg)结构的影响

HBsAg作为乙肝疫苗的主要成分,是一种病毒样颗粒,由蛋白质和脂类通过非共价键作用形成。HBsAg保持完整结构对其功能非常重要,而目前未见对其在溶液中结构变化的研究。考察了不同溶剂环境(温度、pH值、离子类型和盐浓度)对HBsAg结构的影响。实验发现,HBsAg在常温下比较稳定,但在温度超过60℃时稳定性明显下降;pH值小于4.0时引起不可逆聚集,但在pH5.0时的聚集部分可逆;不同离子对HBsAg的影响基本符合Hofmeister序列,不同之处是SO42-比F-更易引起HBsAg颗粒的聚集,在所考察的盐中,(NH4)2SO4对HBsAg有着较大的影响,0.4mol/L时就会引起HBsAg聚集,随着浓度增加,聚集现象更加严重,所以在HBsAg的疏水层析中要谨慎使用(NH4)2SO4。