HPGPC测定注射用灰树花倍他葡聚糖相对分子质量的影响因素研究

目的 考察高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定注射用灰树花倍他葡聚糖（GFGt）相对分子质量（Mr）的影响因素。方法 采用HPGPC分别以不同的流动相、色谱柱、上样浓度、上样体积、温度和辅料比例测定GFGI的Mr，并对测定结果进行比较。结果 分别以纯水，质量浓度0.2g·L^-1NaN3，0．1mol·L^-1NaNO3和0．1mol·L^-1Na2SO4溶液为流动相进行测定，GFG1的Mr依次为822410,177520，29112和25066；以0．2g·L-NaN3溶液为流动相时，采用TSKG4000PWxl和Shodex OHpak SB-804HQ色谱柱的Mr测定结果相差12．06％；在0．5～10g·L^-1的上样质量浓度内GFGI的Mr测定结果相差8．33％；在上样体积为5，30μL内相差8．65％；在温度为30～45℃范围内相差7．26％；但在不同的辅料比例下们，的测定结果相近.结论 流动相对GFGI的Mr测定结果有很大的影响，色谱柱、上样浓度、上样体积和测定温度对Mr测定结果有明显影响，辅料比例无明显影响。

HPGPC测定麦类中β-葡聚糖含量

采用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）测定β-葡聚糖含量,对其测定条件、准确度、重复性和回收率等进行研究,并采用该方法对麦类β-葡聚糖含量进行测定,研究其相对分子质量分布规律。结果表明：该方法具有准确性高、重复性好、简单易行等优点,可用于麦类中β-葡聚糖含量的测定。采用该方法对麦类中β-葡聚糖含量测定结果显示,不同品种小麦、燕麦、荞麦β-葡聚糖含量分别为0.42%~0.61%,2.16%~3.43%,1.17%~1.79%。该研究还表明,麦类中β-葡聚糖的含量及相对分子质量的分布随品种、产地的不同而有所差异。

应用高效液相色谱法测定茶叶多糖

使用SephadexG-100凝胶柱纯化制备得到茶叶多糖,用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定了茶叶多糖的纯度并测定其分子量;同时,使用不同浓度的NaCl溶液作为流动相并用已知分子量的右旋葡聚糖作为标准曲线研究了茶叶多糖在凝胶色谱柱(UltrahydrogelTM500)上的色谱行为,研究发现,由于茶叶多糖的分子量随着流动相的离子浓度的改变而改变,高效凝胶渗透色谱法是不适合用作测定茶叶多糖的分子量的方法的。然后,本研究以自制茶叶多糖纯品作为标准品,以UltrahydrogelTM500(7.8×300mm)为固定相,0.6ml/min蒸馏水为流动相,折光示差检测,对多种茶叶中茶叶多糖含量进行了测定,回收率在80.4%～93.2%(RSD=5.42%)之间,回归方程为:C=0.2503×10-6A-0.0087,r=0.9997,其浓度在0.604～6.04mg/ml范围内呈良好的线性关系。结果显示,该方法是简单、准确、可靠的,适合于作为茶叶多糖原材料和产品质量控制的方法。

茶叶多糖的纯化及其光谱特性研究

利用AKTAPurifier100生物大分子纯化系统纯化茶叶多糖,并采用高效凝胶渗透色谱鉴定其纯度并对其进行紫外和红外光谱分析。结果发现,纯化最佳条件为:上样量5ml,超纯水洗脱,流速2.6ml/min。该方法简便,效率高,能非常方便地放大生产。纯化所得茶叶多糖的多糖衍生物吸收峰和蛋白质特征吸收峰的最大值正好重叠在一起,高效凝胶渗透色谱检测也发现其色谱峰为单一对称色谱峰,紫外280nm和示差检测的出峰时间相差很小,纯度大于99%,表明该均一组分可能是糖蛋白缀合物。同时,紫外和红外光谱分析进一步揭示纯化所得茶叶多糖为一糖蛋白复合物,并提供了一些结构信息。..

当归多糖磁性超滤膜分级分离

基膜为80000的聚砜超滤膜经原位生成法制备得磁性超滤膜。在压力为0.2MPa条件下改变磁场强度,其截留相对分子质量可调控范围为31000～73000。利用此膜对纯度为97.5%的当归多糖进行连续分级分离,在不同磁场强度下得到3个样品(A、B和C)。高效凝胶色谱法测定样品A、B以及C的重均相对分子质量分别为86317、19989、62461,样品A中相对分子质量为70000～100000的当归多糖占70%左右;样品B中相对分子质量为10000～30000的当归多糖占95%左右;样品C中相对分子质量为50000～70000的当归多糖占80%左右。

古糖酯脂质体的制备及其包封率测定方法的研究

目的研究古糖酯脂质体的制备方法，并建立其包封率的测定方法、方法采用反相蒸发法制备古糖酯脂质体，运用正交实验确定最适的制备条件；采用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定古糖酯脂质体的包封率、结果采用反相蒸发法制备古糖酯脂质体的最适条件是：磷脂与胆固醇的摩尔比为4：1，古糖酯药物的加入量为1％，脂水相体积比为3：1，在此条件下制备的脂质体包封率可达39．13％。经负染色法观察古糖酯脂质体的形态为圆形或椭圆形，平均粒径为200nm。采用HPG-PC法可有效地分离古糖酯脂质体与游离药物，方法测定的线性范围为0．2～10．0g·L^-1，平均回收率为95．12％，RSD为1．83％（n=5）。结论反相蒸发法制备的古糖酯脂质体包封率高，粒径小，形态稳定。HPGPC方法简便、快捷，重现性好，适合于古糖酯脂质体包封率的测定。

铁皮石斛多糖分子量测定及其影响因素分析

目的:研究了铁皮石斛多糖的分子量及其主要的影响因素。方法:对铁皮石斛多糖进行了三次重复的提取分离,经过纤维素凝胶树脂DEAE-52和葡聚糖凝胶Sephacryl S-300柱进行纯化,得到一个多糖片段WDOPA并采用高效凝胶渗透色谱法进行多次的分子量测定。采用单因素比较的方法,分别用加热和超声的手段处理铁皮石斛多糖,考察不同的加热温度、时间及不同的超声功率、时间对铁皮石斛多糖分子量的影响。结果:该WDOPA的分子量为776054 u,RSD在10%以内,加热的温度及时间对多糖分子量的影响不明显,而超声功率、超声时间的不同对铁皮石斛多糖分子量影响较大,随着超声功率的加大及时间的延长,分子量逐渐变小。结论:该实验方法可用于测定多糖,且超声可用于改变铁皮石斛多糖的分子量,应用于筛选不同分子量的多糖片段。

灰树花β-葡聚糖的高效凝胶渗透色谱行为

以4种不同蛋白质含量的灰树花β-1，3／1，6-葡聚糖（GF1，GF2，GF3，GF4）和1种α-1，4／1，6-葡聚糖（P100）为研究对象，探讨了它们在不同盐浓度和不同pH下的高效凝胶渗透色谱（HPGPC）行为。结果表明：灰树花口．葡聚糖相对分子质量在低于0．025mol／L的氯化钠溶液中急剧降低，在0．1—0．2mol／L的氯化钠溶液中趋于平稳。在pH3—6时，其相对分子质量随pH增加而急剧增加；在pH6—9范围内变化较小；pH高于9后又稍微增加。在相同条件下，α-1，4／1，6-葡聚糖的相对分子质量不受盐浓度和pH值变化的影响。灰树花β-葡聚糖在水溶液中可形成超螺旋结构，该结构受溶液盐浓度和pH值变化的影响，导致分子聚集状态不同，从而呈现不同的凝胶渗透色谱行为，表现为相对分子质量升高或降低。

聚乙二醇400分子量测定方法比较研究

目的:建立高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定聚乙二醇400(PEG400)分子量及其分布,并与《中国药典》所用的端基分析滴定法比较。方法:采用Shodex OHpak SB-802.5HQ与Shodex OHpak SB-803HQ色谱柱串联分离,以0.1 mol·L^(-1)硝酸钠(0.02%叠氮钠)为流动相,流速0.5 mL·min^(-1),柱温30℃,样品浓度2 mg·mL^(-1),采用示差折光检测器进行测定。结果:HPGPC测定的聚乙二醇400的分子量结果与《中国药典》2015年版所用的端基分析法测得的平均分子量结果接近,采用不同厂家色谱柱、对照品可影响PEG400的分子量测定结果,选用Shodex OHpak SB色谱柱串联测定聚乙二醇400重均分子量的范围为407~440,分子量分布宽度1.0~1.1,该方法的精密性RSD为0.2%,重复性为2.89%,24 h内样品稳定性RSD为0.66%。结论:经方法学验证,HPGPC法准确、重复性好,可用于聚乙二醇400分子量及其分布测定。

高效凝胶渗透色谱法检测马初乳中的免疫球蛋白G

建立了高效凝胶渗透色谱(HPGPC)测定马初乳中免疫球蛋白G(IgG)含量的方法。采用TOSOH TSK-G4000PWXL色谱柱(300 mm×7.8 mm,5μm)分离,以0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.9)为流动相,流速0.8mL/min,检测波长280 nm,温度25℃。结果表明:免疫球蛋白G的线性范围为0.2～3.0 g/L(r2=0.999 5),平均回收率为97.47%,相对标准偏差(RSD)为1.22%,检出限(信噪比为10)为0.08 mg/L,方法的稳定性、精密度和重现性(以峰面积的RSD计)分别为2.86%、1.62%、1.82%。在优先满足小马哺育的前提下,采集新疆昭苏马场中两个不同品种马匹的马乳,于低温保存,在4℃和12 000 r/min下30 min内离心两次,制得乳清,测得第一次泌乳时,IgG含量在2 h时高达35.0～50.0 g/L,而在72 h后,马乳中IgG含量迅速下降为2.0～4.0 g/L。该方法前处理过程简单、快速,方法简便、准确、重现性好、精密度高,适合作为马初乳中IgG的检测方法。

高效凝胶渗透色谱及高效液相色谱和电喷雾-离子阱质谱法联用测定构成芦荟多糖的单糖

利用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)测定芦荟浓缩液和芦荟粉中多糖的纯度和相对分子质量,使用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)作为柱前衍生试剂分别对样品和其水解产物进行衍生,结合高效液相色谱(HPLC)分离和电喷雾-离子阱质谱(ESI-MS)检测分析其单糖组成。结果表明:组成芦荟中多糖的单糖主要是甘露糖和葡萄糖。

高效凝胶渗透色谱法测定茶叶糖蛋白含量研究

用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定了茶叶糖蛋白(TGC)的纯度，并以TGC纯品作为标准品，以UltrahydrogelTM500(7．8×300mm)为固定相，0．6mL／min蒸馏水为流动相，折光示差检测，对多种茶叶中TGC含量进行了测定，得回归方程为：Y=0．2503×10^-6X-0．0087，r=0．9997，其浓度在0．604～6．04mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系。

流动相对灰树花多糖分子量测定影响的研究

目的:考察流动相对高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定灰树花多糖(GFP)相对分子质量(Mr)的影响因素。方法:采用HPGPC法分别以不同的流动相、盐浓度、pH值测定GFP的Mr,并对测定结果进行分析。结果:分别以纯水、0.02%NaN3、0.1mol·L-1NaNO3和0.1mol·L-1Na2SO4溶液为流动相进行测定,GFP的Mr依次为822410、177520、29112和25066道尔顿;在0-0.025mol/L氯化钠溶液中Mr先急剧降低,然后随着盐浓度的增加,在0.1-0.2mol/L氯化钠溶液中趋于平稳;在pH3-6时,Mr随pH增加而急剧增加,在pH6-9范围内变化较小,当pH为10时又稍微增加。结论:不同流动相、盐浓度、pH值对GFP的Mr测定结果有明显影响。

HPGPC柱串联法测定肠膜明串珠菌发酵产物研究

蔗糖经肠膜明串珠菌发酵可生成不同分子量右旋糖酐,发酵液中除含有蔗糖底物及右旋糖酐产物外,还有一定的果糖、葡萄糖等副产物。对发酵液中蔗糖、果糖的含量以及产物右旋糖酐的分子量同时进行跟踪检测,对于计算底物消耗量、产物生成量以及探讨右旋糖酐的合成过程规律有重要意义。分别采用KS 801单柱、TSK G4000 PW与KS 801双柱串联的高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）,测定不同分子量右旋糖酐标准品,以及肠膜明串珠菌粗酶液发酵蔗糖而得的发酵液。研究表明,TSK G4000 PW与KS 801双柱串联对样品的分离效果更好。蔗糖浓度在0.1×10^-3-0.1×10^-2mol/L范围内与峰面积呈现良好的线性关系,且该方法的RSD值小于3.00%。表明,双柱串联的高效凝胶渗透色谱法准确、可靠,适用于分析样品中同时含有小分子糖类及大分子物质的研究。

超高压处理对毛栓菌多酚氧化酶的影响

以茶多酚为底物,测定毛栓菌多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PPO)活性的最适pH值为5.0、最适底物浓度为4mg/mL,经100、300和500MPa超高压处理10min的PPO酶活分别是未处理的93%、87%和86%。圆二色谱和高效液相凝胶渗透色谱分析结果显示,100和300MPa压力处理PPO的圆二色谱位于190～210nm的正Cotton效应峰分别产生"褶皱"和"分蘖";高效液相凝胶渗透色谱中的第一时间出峰组分(即最大分子量组分)的保留时间由6.678min分别提前至1.514和2.296min。500MPa压力处理PPO的圆二色谱和高效液相凝胶渗透色谱与对照相比差异更加显著,其圆二色谱中只有一个正Cotton效应峰;其高效液相凝胶渗透色谱中主要组分的色谱峰面积减小(即280nm的响应值降低)。不同压力处理的PPO的圆二色谱与高效液相凝胶渗透色谱图的差异程度具有对应关系。

超声降解葡聚糖的研究

基于高效凝胶渗透色谱(HPGPC)分子量检测技术,研究超声对葡聚糖降解的作用规律,考察一定超声时间内超声功率、降解温度、葡聚糖浓度、溶液体积等对葡聚糖分子量的影响。结果表明,超声降解葡聚糖的最适条件为功率600W、超声温度8℃、容器50mL内溶液40mL、葡聚糖浓度1%、超声工作/间歇时间为2s/2s。通过白金汉π定理对超声过程的分子量变化进行仿真建模,在一定条件范围内模型具有较高的拟合度和应用精度。

海带中褐藻糖胶LPS-B的分离纯化与分析

海带中的褐藻糖胶经离子交换纤维素层析得到了4种亚组分:LPS-A、LPS-B、LPS-C、LPS-D,并用凝胶介质对其中的一种主要组分(LPS-B)进行进一步的分离纯化,最终得到两种均一多糖(PB-1和PB-21),高效凝胶过滤色谱法(HPGPC)测定分子量。结果表明,PB-1的Mw=5.64×105,Mn=2.97×105,分散度D=1.89;PB-21的Mw=3.54×104,Mn=2.46×104,分散度D=1.44。红外光谱分析表明,所得的两种均一多糖具有多糖的红外吸收峰,且都不含有糖醛酸。

基于高效凝胶渗透色谱法的银耳多糖质量控制研究

目的建立银耳多糖质量控制方法。方法采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法测定银耳多糖相对分子质量及其分布和多糖的量。色谱条件:Shodex Sugar KS-804(300 mm×8 mm,7μm)和KS-805(300 mm×8 mm,17μm)凝胶排斥色谱柱串联做为分离柱,流动相为水,体积流量0.8 mL/min,柱温40℃,进样量40μL,检测条件为示差检测器。结果银耳多糖峰出现在14.40～15.30 min,对应相对分子质量为1.26×106～1.39×106。在0.01～2.0 mg/mL呈良好的线性关系(r=0.999)。银耳多糖质量浓度范围分别为:1.1～1.5 mg/mL(以透析银耳多糖为对照)和0.8～1.1 mg/mL(以蓝色葡聚糖为对照)。多糖检测限和定量限分别为0.8μg和2μg。结论所建立的方法简单、快速、准确、重现性好、灵敏度较高,可作为银耳多糖质量控制的方法。