HPLC法测定常山口服溶液的主成分含量

为建立一种同时测定常山口服液中2种主成分的高效液相色谱方法(HPLC),对中药常山及其药物制剂的国家兽药典质量标准提出制修订建议。本研究采用HPLC法,通过方法学验证和不同色谱检测系统的考察,测定常山口服液中常山乙素和常山甲素的含量,明确药物色谱条件的系统适用性要求。包括安捷伦1290型HPLC仪(SB-C_(18)色谱柱)、沃特斯2695型HPLC仪(XTerra@MS C_(18)色谱柱)和岛津SPD-10A型HPLC仪(Amethyst C_(18)-H色谱柱);流动相:乙腈-水-冰醋酸(30∶69.79∶0.21),pH值5.2~6.2,流速:1.0 mL/min,检测波长:265 nm,柱温:25℃,进样量:10μL。三种不同类型的液相系统和色谱柱,所测3批次样品中的主成分含量基本一致,常山甲素和常山乙素的峰型较好,与周围杂质可有效分离。该研究方法可为常山碱口服液质量控制提供参考。

HPLC法测定食品接触用竹木制品中4种抑菌剂的方法验证研究

实验室为扩展产品检测项目能力,根据《食品安全国家标准食品接触用竹木材料及制品》(GB 4806.12-2022)附录B方法对食品接触用竹木制品中4种抑菌剂进行测定。结果显示:4种抑菌剂在0.2~10.0 mg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.99999,方法检出限为0.03~0.105 mg/kg,方法定量限为0.099~0.347 mg/kg;相对标准偏差为0.06%~2.00%;相对误差为0.12%~0.52%;加标回收率为95.20%~101.00%。结果均满足标准方法的要求,因此,实验室具备了该项目方法的检测能力。

HPLC法同时测定广山楂中3种活性成分含量

探究炮制对广山楂中儿茶素、柚皮苷、根皮苷3种成分含量的影响。方法采用SHIMADZU VP-ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B),梯度洗脱;流速0.8 m L/min;紫外检测波长为285 nm;柱温30℃。结果表明:各炮制品中儿茶素含量如下:炒焦品(14.23 mg/g)>盐炙品(12.53 mg/g)>炒黄品(7.35 mg/g)>炒炭品(7.23 mg/g)>酒炙品(5.12 mg/g)>生品(3.71 mg/g);柚皮苷含量为:酒炙品(6.18 mg/g)>炒焦品(5.35 mg/g)>盐炙品(4.66 mg/g)>炒黄品(3.26 mg/g)>生品(2.54 mg/g)>炒炭品(1.87 mg/g)。根皮苷含量依次是:盐炙品(0.98 mg/g)>炒焦品(0.82 mg/g)>酒炙品(0.76 mg/g)>炒黄品(0.43 mg/g)>生品(0.37 mg/g)>炒炭品(0.27 mg/g)。不同炮制方法对广山楂中成分产生一定影响,盐炙等炮制方法可提高广山楂中儿茶素、柚皮苷、根皮苷含量,炒炭后则使柚皮苷、根皮苷含量降低。

中药太子参中环肽A和B含量测定的HPLC方法研究

目的：以太子参环肽A（HA）和B（HB）为对照品，研究建立中药太子参中环肽类成分的含量测定方法。方法：应厢高效液相色谱（HPLC）通过标准曲线测定、稳定性实验、精密度实验、重现性实验、回收率实验对10批不同市售太子参药材的HA和HB的含量及其HPLC图进行了研究。结果：太子参中HA和HB的含量分别为6．21×10^-5～3．19×10^-4mg／100g和1．89×10-^5～2．09×10^-3mg／100g。其HPLC图可分为3类：第1类以HB为主成分，HB的含量约为HA的10～30倍，江苏和安徽销售的太子参药材大多属于此类；第2类以HA为主成分，HA的含量约为HB的10～20倍，福建和北京销售的太子参药材大多属于此类；第3类以HA和HB含量在同一数量级，南京、杭州和昆明销售的太子参药材大多属于此类。结论：本实验方法重现性较好，不同销售地的太子参药材中HA和HB的含量存在差异，在其HPLC图中HA和HB为共有峰。

白茶黄酮醇类物质的HPLC测定及水解工艺优化

以研究白茶浸提液中杨梅素、槲皮素和山奈酚3种黄酮醇类物质的高效液相色谱(HPLC)检测方法及优化水解工艺为目的,通过精密度和加标回收率的测定,在确定HPLC检测方法可靠性的基础上,进一步采用正交试验法优化样品制备中的水解条件.结果表明,制定的HPLC分离条件能有效分离芦丁、杨梅素、槲皮素和山奈酚,所得的标准曲线方程在线性范围内具有较高的精密度和加标回收率.白茶中3种黄酮醇类物质的最优水解工艺条件为:在5 m L白茶浸提液中添加5m L 3 mol·L-1盐酸,于80℃水浴锅中水解30 min.最优水解工艺的精密度均较高,在水解过程中山奈酚最稳定,杨梅素容易被分解,芦丁的水解转化率为94.32%.可见,将试验所得的HPLC检测方法及最优水解工艺用于测定白茶中黄酮醇类物质的含量是可行的,且可使白茶提取液中黄酮醇苷总量的水解趋于最大化.

平衡透析法测定加米霉素与猪、牛和羊的血浆蛋白结合率

为测定加米霉素与常见家畜的血浆蛋白结合率(PPBR),本试验建立猪、牛和羊血浆中加米霉素的高效液相色谱-串联质谱检测方法,并对该方法的专属性、检测限、定量限、标准曲线、提取回收率和精密度进行考察。采用平衡透析法测定不同浓度(0.1、0.5和2.5μg/mL)加米霉素与猪、牛和羊的PPBR。结果显示,在考察浓度范围内,加米霉素在猪、牛和羊血浆中的专属性较好,检测限和定量限分别为0.5和1.0 ng/mL,标准曲线呈现良好的线性关系(r>0.997)。加米霉素在猪、牛和羊血浆中的提取回收率介于91.2%~107.8%,日内和日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于6.59%和9.16%。加米霉素与猪、牛和羊的平均PPBR分别为(21.86±4.19)%、(27.51±6.95)%和(19.64±3.58)%,且在考察的浓度范围内无浓度依赖特征。本试验所建方法准确可靠,可用于测定加米霉素与猪、牛和羊的PPBR。本试验结果可为加米霉素的药物代谢动力学研究及其在兽医临床中的科学用药提供参考依据。

基于分析质量源于设计理念的鱼腥草芩蓝合剂水提浓缩液中7种化学成分的定量研究

该研究基于分析质量源于设计理念,建立了测定鱼腥草芩蓝合剂水提浓缩液中绿原酸、隐绿原酸、槲皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、黄芩素含量的高效液相色谱法。使用鱼骨图识别可能影响方法属性的方法参数,通过确定性筛选设计明确关键方法属性为槲皮苷与前后峰的分离度和最后一个色谱峰的保留时间。首先采用加权决定系数法筛选出关键方法参数为第一梯度结束时间、第三梯度结束时间、第四梯度结束时间、柱温、流速,随后通过逐步回归法建立关键方法参数与关键方法属性之间的定量模型,模型的决定系数(R2)值超过0.90。采用不达标概率值定量表征不同参数组合下的风险大小,根据风险大小确定方法可操作设计区域,并成功验证了其可靠性。确定的色谱条件为:Sunshell-C_(18)(150 mm×4.6 mm,2.6μm)色谱柱,流动相为0.60%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,检测波长为260 nm和326 nm,流速0.80 mL/min,柱温39.0℃,进样量10μL。对优化后的分析方法进行方法学验证,方法线性良好,精密度、稳定性和重复性试验结果良好,相对标准偏差均在5.0%以内,7种成分的平均回收率为92.6%~106%,相对标准偏差在2.0%内。

HPLC-PAD外标法及UPLC-MS/MS内标法测定乳及乳制品中三聚氰胺的含量

分别建立高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-PAD)、超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中三聚氰胺含量的方法。利用HPLC-PAD外标法进行样品中三聚氰胺的初筛,利用UPLC-MS/MS法进行确证,以13C315N3-三聚氰胺为同位素内标定量。乳制品经乙腈、乙酸锌、盐酸溶液提取,质谱检测时,样品再经MCX固相萃取柱富集净化。HPLC-PAD法的定量限为4mg/kg,UPLC-MS/MS的定量限为0.05mg/kg;HPLC-PAD的添加回收率为95.7%～102.3%,UPLC-MS/MS的添加回收率为91.3%～95.7%(基质匹配曲线校正),两种方法的相对标准偏差(RSD)分别为1.98%～4.51%,1.60%～3.27%。

猴耳环双标多测法及抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分快速筛选法的建立

目的:建立猴耳环中5个成分的双标多测法及其抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的快速筛选法。方法:采用HPLC法,以双标线性校正法准确定位猴耳环中5个成分色谱峰,以没食子酸为参照物,计算没食子酸与其余4个成分的相对校正因子,对各成分进行定量,将所得结果与外标法进行比较。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法快速筛选猴耳环中具有抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。结果:双标线性校正法相比于相对保留时间更能准确地预测待测组分在未知色谱柱上的保留时间;相对校正因子法和外标法结果的RSD<2.00%。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法可以快速筛选出猴耳环中7-没食子酰基特利色黄烷、杨梅苷等不同程度抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物。结论:该研究建立的双标多测同时测定猴耳环中5个成分的方法准确可行,采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法能快速、灵敏、高通量筛选猴耳环中的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。

HPLC法同时测定牛羊肉中4种雌激素的残留量

为了建立高效液相色谱法（HPLC法）同时测定牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇残留量的方法，试验将样品用甲醇2次超声、离心，提取液浓缩后经0．45μm有机滤膜过滤，利用HPLC法进行测定。结果表明：4种组分分离良好，并得到浓度与峰面积成正比的工作曲线，相关系数达到0．999以上，精密度（CV）良好（CV≤0．80），回收率范围为85．96％-101．56％。

HPLC测定不同逆流萃取流速下的栀子苷含量及稳定性

目的:采用逆流萃取的方法,在两种不同的萃取流速下,考察两种不同产地栀子的栀子苷含量及稳定性,以期对栀子药材的粗提工艺提供一定的参考。方法:采用HPLC法测定不同栀子逆流萃取液中栀子苷含量。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂C18色谱柱(5μm,4.6×250 mm);流动相乙腈一水(15∶85);流速1.0 mL·min-1;检测波长为238 nm;柱温30℃。结果:两种不同产地不同逆流萃取条件下,栀子苷均在5 h达到最大值,种植栀子比野栀子中栀子苷含量高,且同一产地栀子在B流速时大于A流速时栀子苷含量,1个月后重复测定1次,栀子苷含量稳定。结论:HPLC简便快速、灵敏度高、重复性好、稳定性好,可为栀子提取工艺研究提供参考。

HPLC法测定知母中菝葜皂苷元含量的方法探讨

对近年来应用HPLC法测定知母中菝葜皂苷含量的样品前处理方法和色谱条件的研究情况进行了介绍和综合分析,结合作者的研究总结了样品纯化的基本纯化流程,探索了科学的色谱条件,为探究菝葜皂苷元的可靠检测手段提供依据。

三子养亲汤中11种成分含量同时测定及其胰脂肪酶抑制作用研究

目的同时测定三子养亲汤中3,6′-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、阿魏酸、芥子酸、咖啡酸、木犀草素、原告依春、芹菜素、异鼠李素、原儿茶醛的含量,并考察其对胰脂肪酶的抑制作用。方法高效液相色谱-串联三重四级杆质谱(HPLC-QQQ-MS/MS)分析采用Halo-C 18色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm);流动相水(含0.05%甲酸)-乙腈(含0.05%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温25℃;电喷雾离子源;负离子扫描;多反应监测模式。采用分子对接进行模拟,对硝基苯酚法评价抑制作用。结果11种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)>0.9920),平均加样回收率85.79%~117.52%,RSD 0.78%~3.73%。3,6′-二芥子酰基蔗糖、咖啡酸、芥子酸和原儿茶醛与胰脂肪酶具有良好的亲和力,三子养亲汤、咖啡酸、芥子酸、原儿茶醛IC_(50)值分别为41.16 mg/mL、4.006 mmol/L、6.798 mmol/L、10.48 mmol/L。结论该方法稳定可靠,可为具有胰脂肪酶活性抑制作用的三子养亲汤质量控制提供理论基础。

RP-HPLC法测定山羊海马中单胺类神经递质含量的研究

为了研究单胺类神经递质的检测方法,试验采用RP-HPLC测定山羊海马中4种单胺类神经递质,色谱条件为Symmetry C18(4.6×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇与去离子水(含40 mmol/L醋酸钠、30 mmol/L柠檬酸、0.2 mmol/L EDTA-2Na、0.4 mmol/L辛烷磺酸钠)为流动相,采用等度洗脱,然后进行荧光检测。结果表明:在15 min内,4种单胺类神经递质分离完全,在2~500 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数分别在0.99以上;变异系数在2.7%~3.8%之间;平均回收率在90%以上。说明该方法的稳定性、重现性良好。

2-噻吩乙酸的GC和HPLC分析

采用气相色谱法和高效液相色谱法分别对2-噻吩乙酸进行了定量分析,同时比较了两种方法的优缺点。气相色谱条件为ZebronZB-50(30m×0.32id×0.5 mdf)毛细管柱,进样口及检测器温度均为300℃,程序升温。高效液相色谱条件为VARIANC18(250×4.6mm)反相色谱柱,甲醇-水(V:V=70:30)为流动相,流速1.0ml/min,柱温为室温,检测波长235nm。结果表明:两种方法分离效果好,操作简单、快速和准确可靠等特点,能够达到分析要求。

HPLC法同时测定雷贝拉唑钠原料药中8个有机杂质的含量

利用高效液相色谱（HPLC）技术建立了一种同时测定雷贝拉唑钠原料药中8个有机杂质的新方法。该方法采用二元高压梯度洗脱方式，以pH=6．0的磷酸盐缓冲溶液（A）-乙腈（B）为流动相，进行梯度洗脱（0-10min，85％A→65％A；10-35min，60％A；35-35．01min，60％A→85％A；35．01-40min，85％A），流速为1mL／min，以YMC Triart C18柱为分离柱，柱温为30℃；采用紫外检测器，检测波长为285nm。研究结果表明，各已知杂质、主成分之间均能彼此分离，空白溶剂对各杂质的测定无干扰，各已知杂质的峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数均大于0．990，各已知杂质的平均回收率均在83．2％-115．9％范围内，RSD为1.1％-4．3％。该方法简便有效，适用于雷贝拉唑钠原料药的质量控制，具有很高的灵敏度和准确度。

HPLC法测定番石榴中总维生素C的含量

建立了高效液相色谱测定番石榴中总维生素C含量的方法。样品经过0.1%草酸溶液提取后,用L-半胱氨酸溶液将脱氢抗坏血酸还原成还原型抗坏血酸后测定L-抗坏血酸总量。采用C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%草酸溶液,流速1.0 mL/min,检测波长245 nm。L-抗坏血酸在10.0~500μg/mL范围内线性良好,检出限为5.0 mg/kg,回收率为90%~103%,RSD为0.55%。该方法操作简便,灵敏度高,准确性好,适用于番石榴及其他水果中总维生素C的测定。

HPLC法测定盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素的含量

目的探讨HPLC法测定盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素含量。方法盐酸多西环素含量测定应用HPLC法,采用Alltima C 18柱,草酸铵溶液0.05 mol/L：二甲基甲酰胺：磷酸氢二铵溶液0.2mol/L（65：30：5）为流动相,监测波长为280 mm。结果 48-489 mg/L,线性良好,A=43 765 C＋562 000,r=0.999 6,回收率平均为98.35%,RSD为1.30%。结论 HPLC法操作简单,检测结果准确,可作为质量标准检测方法。

全抗原MQCA-BSA耦联比HPLC测定方法的建立

为了建立一种准确、可靠的测定人工抗原耦联比的方法,试验应用高效液相色谱(HPLC)法采用Waters 2695分离系统、2489紫外检测系统,流动相为甲醇、水之比为60∶40,柱温为30℃,流速为1.00 mL/min,检测波长为320 nm,测定全抗原合成中游离3-甲基喹啉-2-羧酸(MQCA)的含量。结果表明:游离MQCA的线性范围为0.2～128.0μg/mL,线性方程为A=17 100 C+16 667(R2=0.999 5)。说明本方法准确、可靠,适用于人工抗原偶联比的测定。

高效液相色谱法测定一锅法制备的1-甲基-3,4,5-三硝基吡唑及其3种中间产物的含量

通过优化柱温、流动相、流量等色谱条件,采用高效液相色谱法测定一锅法制备的1-甲基-3,4,5-三硝基吡唑(MTNP)及中间产物1-甲基-4-硝基吡唑(4-MNP)、1-甲基-4,5-二硝基吡唑(4,5-MDNP)、1-甲基-3,5-二硝基吡唑(3,5-MDNP)的含量。反应液经乙腈稀释后,添加适量内标2-硝基甲苯,采用优化的色谱条件测定。以AT.C18色谱柱为固定相,在柱温30℃,流动相体积比45∶55的乙腈和0.1%(体积分数)乙酸溶液的混合溶液,流量1.0 mL·min^(−1)下等度洗脱分离4种目标物,在检测波长265 nm下采用内标法进行定量。结果显示:4种目标物的分离度大于2.5,其质量浓度分别在10.00~250.00 mg·L^(−1)(MTNP和4-MNP)和10.00~350.00 mg·L^(−1)(4,5-MDNP和3,5-MDNP)内和峰面积比值呈线性关系,检出限(3S/N)为0.40~0.80 mg·L^(−1),加标回收率为97.3%~105%,测定值的相对标准偏差(n=6)小于1.0%。