HPLC及LC-MS测定榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留

本文采用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱法(LC-MS)对干果榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留量进行含量测定.HPLC和LC-MS均使用C18色谱柱,含量测定采取等度洗脱,流动相:甲醇-水(55∶45,体积比);体积流量:1.0 mL·min-1;测定波长:260 nm;柱温:30℃.LC-MS采取电喷雾离子源,梯度洗脱,体积流量:0.6 mL·min-1,柱温:30℃.结果表明,榛子中氯吡苯脲与多菌灵存在残留,氯吡苯脲质量浓度在1.00~10.00μg·mL-1范围内线性关系良好,加样回收率在95.58%~100.58%;多菌灵质量浓度在1.005~15.075μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,加样回收率在95.61%~104.39%.实验证明,HPLC与LC-MS相结合的方法具有操作简便、灵敏度高、检出限低等优点,能有效地检测到榛子样品中膨大剂氯吡苯脲及杀菌剂多菌灵的残留,并确定其残留量,线性关系和回收率结果均令人满意.根据被检测的8批样品中氯吡苯脲和多菌灵两项农药残留量推断,作为一般干果食用榛子是安全的.

HPLC法测定十三味逐瘀合剂中游离大黄酚含量

目的建立十三味逐瘀合剂中大黄酚高效液相含量测定的方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC法)对十三味逐瘀合剂中游离大黄酚含量进行测定,从提取溶剂、取样量、提取时间等影响因素中选出最优条件,建立完整的含量测定方法。结果用thermos C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以甲醇-0.1%磷酸(75∶25,V/V)为流动相,采用等度洗脱法,254 nm波长的色谱条件;以甲醇为浸膏提取溶剂,超声30 min的提取方法;大黄酚质量浓度在1.63~16.32μg/mL(R^(2)=0.9995)范围内具有良好的线性关系;平均回收率为104.17%;测得十三味逐瘀合剂中游离大黄酚平均含量为15.32μg/mL。结论本实验所建立的方法操作简单,专属性强,重现性好,可用于十三味逐瘀合剂中游离大黄酚的含量测定。

HPLC-ELSD同时测定腺梗豨莶草中6个二萜成分的含量

为了研究腺梗豨莶草中6个二萜成分(对映海松烯型二萜:奇任醇、Hythiemoside B和豨莶精醇;对映贝壳杉烷型二萜:对映-17,18-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸、对映-16β,17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸和对映-16α氢-贝壳杉烷-17,19-二羧酸)的含量,本试验建立了高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定二萜类化合物含量。样品粉碎过筛加甲醇和乙酸乙酯回流提取,蒸发减压除去溶剂,甲醇溶解,0.45μm滤膜滤过,取续滤液进行测定。色谱条件:色谱柱为Waters Symmetry Shield^(TM)RP18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.3%甲酸水溶液-乙腈(v/v),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min。蒸发光散射检测器漂移管温度为103℃,雾化气流速为3.0 L/min。应用该方法测定腺梗豨莶草样品不同部位中6个二萜类化合物的含量,同时比较叶、枝、茎中对映海松烯型二萜、对映贝壳杉型二萜和总二萜含量的差异。结果显示,6个二萜成分在其线性范围内线性关系良好(r≥0.9992);日内和日间精密度相对标准偏差(RSD)均小于3.5%;回收率介于96.5%~101.5%,RSD均小于2.3%;腺梗豨莶草不同部位(叶、枝、茎)的二萜类化合物含量差异较大。结果表明,本试验所建立的HPLC-ELSD方法简便、准确、重复性好,为腺梗豨莶草药材全面的质量评价和临床应用中最佳药用部位的选择提供了参考。

Determination of 5-Fluorouracil in Human Plasma by High-Performance Liquid Chromatography (HPLC)

5-Fluorouracil (5-FU) has a broad spectrum of anti-tumor activity, widely applied to the treatment of cancers. However, it is necessary to determine the plasma concentration of 5-FU in clinical practice due to its narrow therapeutic index. Therefore, a simple, economic and sensitive high-performance liquid chromatography (HPLC) method was developed and validated for the determination of 5-FU in human plasma. Ethyl acetate was chosen as extraction reagent. Chromatographic separation was performed on a Diamonsil C18 column (250 mm × 4.6 mm i.d., 5 μm) with the mobile phase consisting of methanol and 20 mmol/L ammonium formate using a linear gradient elution at a flow rate of 0.8 mL/min. 5-FU and 5-bromouracil (5-BU) were detected by UV detector at 265 nm. The calibration curve was linear over the concentration range of 5—500 ng/mL and the correlation coefficient was not less than 0.992 6 for all calibration curves. The intra- and inter-day precisions were less than 10.5% and 4.3%, respectively, and the accuracy was within ±3.7%. The recovery at all concentration levels was 80.1±8.6%. 5-FU was stable under possible conditions of storing and handling. This method is proved applicable to therapeutic drug monitoring and pharmacokinetic studies of 5-FU in human.

HPLC法测定五味子颗粒中7种木脂素成分的含量

建立了同时测定五味子颗粒中7种木脂素成分含量的高效液相色谱(HPLC)法。采用Poroshell 120 SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.7μm)进行分离,四氢呋喃水-乙腈梯度洗脱,流速为0.6 mL/min,柱温为30℃,检测波长为220 nm,进样量为10μL。结果表明:该方法对五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素的检测下限(LOD)分别为0.017、0.041、0.156、0.165、0.136、0.166和0.113μg/mL,线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9999,平均加样回收率为98.1%~100.9%,相对标准偏差(RSD)均小于3.0%。因此,该方法重复性好、灵敏度高,所得含量关系可对五味子颗粒进行质量控制,特别是可为预防南五味子掺伪提供参考,也为其他含五味子制剂的质量标准修订奠定了基础。

HPLC-DAD测定饲用酸化剂苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质

为了建立高效液相色谱法测定饲用酸化剂苯甲酸中邻苯二甲酸、2-羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、2-甲基苯甲酸、3-甲基苯甲酸和4-甲基苯甲酸共7种邻苯二甲酸类杂质的方法。本试验将酸化剂样品溶于甲醇和初始流动相的混合溶液中,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm)分离7种邻苯二甲酸类杂质,以水-乙腈-甲基磺酸(85-15-0.1)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为1.2 mL/min,采用二极管阵列检测器(DAD),采集波长范围为210~400 nm,记录扫描光谱图和235 nm波长处的色谱图。用外标法定量邻苯二甲酸类杂质的含量。结果显示,7种邻苯二甲酸类杂质的浓度在0.10~40.00μg/mL范围内的线性良好,平均加标回收率在98.5%~102.7%范围内,相对标准偏差(RSD,n=5)介于0.3%~1.5%,检测限和定量限均为4 mg/kg。本试验建立的酸化剂苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测方法快速且准确,可用于苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的定性和定量检测。

HPLC测定化妆品中二氢燕麦生物碱D的含量

采用高效液相色谱法(HPLC)测定化妆品中二氢燕麦生物碱D的含量。色谱柱:Agilent Zorbax SB-Aq(250 mm×4.6 mm×5µm);流动相为V磷酸(体积分数0.05%)∶V乙腈=67∶33;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:220 nm。结果表明,二氢燕麦生物碱D在0.0114~0.2850μg与其峰面积呈良好线性关系(R=0.9999);液态类样品平均回收率为99.01%,相对标准偏差(RSD)为1.96%(n=9);膏霜样品的平均回收率为102.68%,RSD为2.46%(n=9);乳液样品的平均回收率为99.96%,RSD为1.4%(n=9)。该法简便、准确可行,可用于化妆品中二氢燕麦生物碱D的含量测定及质量控制。

基于HPLC测定4种藏茵陈原植物中10个有效成分含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定藏茵陈中獐牙菜苦苷、芒果苷、龙胆苦苷、当药苷、异荭草苷、异牡荆苷、当药黄素、当药醇苷、甲基当药宁、齐墩果酸含量的方法。方法:采用Welch Ultimate XB-C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL·min–1,獐牙菜苦苷、芒果苷、龙胆苦苷、当药苷测定波长为240 nm,异荭草苷、异牡荆苷、当药黄素测定波长为270 nm,当药醇苷、甲基当药宁测定波长为250 nm,齐墩果酸检测波长为205 nm,进样量为10μL。结果:该条件下指标成分进样质量分别为獐牙菜苦苷126.7~16040.0 ng(r=0.9998)、芒果苷6.3~801.6 ng(r=0.9996)、龙胆苦苷6.4~814.4 ng(r=0.9997)、当药苷15.9~2016.0 ng(r=0.9999)、异荭草苷7.1~900.0 ng(r=0.9995)、异牡荆苷5.5~699.2 ng(r=0.9997)、当药黄素5.4~681.6 ng(r=0.9998)、当药醇苷5.4~685.6 ng(r=0.9996)、甲基当药宁19.3~2438.0 ng(r=0.9997)、齐墩果酸13.6~1716.0 ng(r=0.9998)时与峰面积具有较好的线性关系;方法学考察结果显示精密度(RSD≤0.95%)和重复性(RSD≤1.86%)良好,供试品溶液在室温条件下24 h内稳定,RSD≤1.85%;平均加样回收率和相应的RSD分别为99.56%(0.58%)、100.37%(1.23%)、98.63%(0.59%)、99.11%(1.02%)、98.64%(0.57%)、102.26%(0.88%)、100.37%(0.59%)、97.05%(1.36%)、96.01%(0.45%)、101.55%(0.49%)。18批藏茵陈原植物中獐牙菜苦苷、芒果苷、龙胆苦苷、当药苷、异荭草苷、异牡荆苷、当药黄素、当药醇苷、甲基当药宁、齐墩果酸的质量分数差异较大,分别为0.111%~6.592%、0.195%~1.959%、0.046%~4.139%、0.058%~0.662%、0.090%~1.421%、0.082%~0.283%、0.061%~0.384%、0.022%~1.589%、0.106%~1.858%、0.160%~0.657%。结论:建立的HPLC同时测定藏茵陈中10个有效成分含量,方法简便、快速、准确,可为藏茵陈质量控制及资源有效开发提供参考。

维生素C片含量测定的HPLC法及溶出度方法的研究

目的建立测定维生素C片含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法,并通过新建的维生素C片溶出度的测定方法提高其质量控制标准。方法HPLC测定法:色谱柱为菲罗门C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至2.5)-甲醇(92∶8),流速为0.8 mL·min^(−1),检测波长为243 nm,柱温为30℃,进样量为10μL;溶出度测定法:按照溶出度与释放度测定法(《中华人民共和国药典》2020年版四部附录0931第一法),以0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液1000 mL为溶剂,转速为50 r·min^(−1),20 min时取样。结果维生素C在20~140μg·m L^(-1)范围内与其峰面积线性关系良好,y=37487.239x−6860.622(r=0.99996),平均回收率为100.16%,RSD值为0.48%(n=9);其在水、0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液各1000 mL的溶出介质中的溶出曲线差异明显,选择0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液为溶出介质对5个企业的样品进行测定,均在10 min全部溶出并进入平台。结论所建立的方法使检测的准确性更高、专属性更强、重复性更好,具有可信、精准的优势,能更有效地对维生素C片进行质量控制。

HPLC法测定云芝菌发酵茶中9种活性成分及抗氧化活性研究

目的:建立同时测定云芝菌发酵茶中9种活性成分含量的高效液相色谱法,并对发酵前后茶叶中9种活性成分含量和抗氧化活性的变化进行研究。方法:采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.05%磷酸溶液和乙腈,梯度洗脱,检测波长为280 nm、流速1.0 mL/min、柱温30℃。结果:与未发酵的对照组绿茶相比,云芝菌发酵茶中咖啡碱的含量无明显变化,没食子酸、可可碱和没食子儿茶素没食子酸酯的含量分别增加了0.4613%、0.3118%和0.5770%,没食子儿茶素、茶碱、表没食子儿茶素、表儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯含量分别减少了0.0156%、0.0178%、1.2938%、1.1062%和4.0241%。体外抗氧化活性试验结果表明,发酵后茶叶对DPPH·和·OH的清除率均有显著性(P<0.05)降低。当浓度为2.0 mg/mL时,云芝菌发酵茶提取液对DPPH·和·OH的清除率分别为7.79%和9.65%。结论:云芝菌的固体发酵可改变茶叶中活性成分的含量和抗氧化活性,研究为云芝菌发酵茶的开发提供了实验依据。

高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)测定化妆品中达克罗宁的含量

建立了一种高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)测定化妆品中达克罗宁含量的方法。样品经乙腈提取15 min后,用体积分数20%乙腈溶液稀释,经Capcell PAK C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm×2μm)分离后,多反应监测模式进行检测。结果表明:达克罗宁在1.0~25.0 ng/mL线性关系良好,相关系数(r)大于0.995;加标回收率在89.4%~104.5%。该方法高效、准确,可用于化妆品中达克罗宁的定性和定量检测。

HPLC测定万寿菊发育过程中不同部位黄酮含量变化

建立一种高效液相色谱(HPLC)方法,对不同发育时期的万寿菊花、叶、茎、根中的8种黄酮成分进行测定。结果表明:(1)建立的高效液相色谱方法精密度、重复性及稳定性良好,可用于万寿菊中黄酮成分含量的测定。(2)万寿菊各部位的黄酮含量差异显著,总量对比为花>叶>茎>根。(3)槲皮万寿菊苷和槲皮万寿菊素是花的主要黄酮成分,而根、茎、叶的主要黄酮成分分别为槲皮万寿菊素、槲皮万寿菊苷和山奈苷。(4)随着生长发育,万寿菊花中总黄酮含量呈先上升后下降的趋势,在半开花蕾期最高;根、茎、叶中黄酮总量整体呈下降趋势,均在幼苗期最高。该研究建立了一种同时测定万寿菊中8种黄酮成分的HPLC检测方法,确定了万寿菊的主要黄酮成分为槲皮万寿菊素,且半开花蕾期的花中含量最高,适用于大量提取万寿菊黄酮。该结果为万寿菊的进一步合理开发与综合利用提供了参考依据。

HPLC-FP法同时测定新品富硒竹笋中10种核苷类成分的含量

目的:建立同时测定不同品种富硒竹笋中胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟苷、胸苷、腺苷10种核苷类化合物含量的方法。方法:运用HPLC法同时测定21种不同品种竹笋的核苷类化合物含量,色谱柱为InertsilODS-3C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),检测波长为260nm,流速为0.8 mL·min~(-1),柱温为30℃,进样量为20μL。绘制21种富硒竹笋的指纹图谱进行相似度评价,确定共有峰,并用主成分分析、相关性分析和聚类分析对21种不同富硒竹笋的核苷类化合物含量测定结果进行分析。结果:10种核苷类成分在30 min内达到分离,线性关系良好(R2≥0.9990),精密度、稳定性、重复性、准确度试验RSD均小于2%。不同品种富硒竹笋中10种核苷类成分含量与结构比差异明显,并且核苷类化合物成分指标互相间存在着不同程度的相关性。通过主成分分析,提取了4个主成分,并确定了胸苷、胸腺嘧啶、腺苷、鸟苷为4项核心指标,可用于评价不同品种富硒竹笋的品质;通过相关性分析,得出尿嘧啶与胞苷、鸟苷与胸苷、胸苷与腺苷等指标间相关性较高,指标之间的含量会互相影响;通过聚类分析,得出新品富硒竹笋主要集中为一类,市场上常见的富硒竹笋主要分为两类。结论:该实验方法操作快速、简便,重现性好,可用于21种富硒竹笋中10种核苷类化合物的含量测定。同时,测定结果为竹笋的后期高效开发和利用提供理论依据。

清肺止咳散HPLC指纹图谱和多成分含量的测定

为了建立清肺止咳散高效液相色谱(HPLC)指纹图谱和多成分含量测定的方法,为其质量评价提供参考。本试验采用HPLC法,建立12批清肺止咳散样品的HPLC指纹图谱,以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)评价指纹图谱的相似度,并结合主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)筛选质量标志物,同时测定清肺止咳散中被指认的质量标志物的含量。结果显示,12批样品共确定33个共有峰,指认了绿原酸、苦杏仁苷、柚皮苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和白花前胡甲素7个特征性成分;12批样品按不同厂家聚为3个组,筛选出绿原酸、苦杏仁苷、柚皮苷和黄芩苷4个质量标志物,各成分呈良好的线性关系(r>0.999),平均加样回收率为95.2%~101.2%;12批样品中绿原酸、苦杏仁苷、柚皮苷和黄芩苷含量范围分别为0.65~7.09、3.45~8.98、0.95~10.60和4.03~25.83 mg/g。本试验所建立的HPLC指纹图谱和多成分含量测定方法简便、稳定,可为清肺止咳散的质量控制和品质评价提供依据。

基于酰胺基柱的HPLC-RID同时测定异麦芽酮糖中5种糖的含量及其影响因素

研究高效液相色谱-示差折光检测法(HPLC-RID)同时测定异麦芽酮糖产品中果糖、葡萄糖、蔗糖、异麦芽酮糖和海藻酮糖的含量及影响因素。方法采用酰胺基柱,通过精密度试验、t检验确证方法准确性,通过单因素试验和谱图比较确定色谱条件和前处理条件对分离的影响。结果表明,流动相中乙腈的增加能加强糖在酰胺基柱上的保留,三乙胺能显著消除果糖、葡萄糖和海藻酮糖在分离时产生的分裂峰或分叉峰并影响谱图中负峰的位置;样液介质中乙腈、三乙胺分别主要影响溶剂峰和负峰(峰的极性和大小)。在流动相中乙腈、三乙胺体积分数分别为75%、0.05%、柱温45℃、流速1.0 mL/min、进样体积10μL条件下,5种糖在10 min内基本基线分离,且色谱柱pH耐受安全,实际样品测定结果与COA无显著差异(p=0.05),精密度均小于1.3%,均满足相关检测标准的要求。

双重液液萃取QuEChERS-HPLC/MS/MS法测定果蔬及粮食中噁唑酰草胺残留

样品经正己烷第一次萃取后,氮吹至干,再由乙腈-水第二次萃取,乙腈层经改进的QuEChERS方法净化,以0.1%(V/V)甲酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,C18色谱柱分离,HPLC-MS/MS多反应监测(MRM)模式测定,基质匹配外标法定量。结果表明,在9种基质(葡萄、梨、甘蔗、黄瓜、芹菜、土豆、大豆、玉米、大米)中,噁唑酰草胺在1.0~50.0ng/mL范围内的线性关系均较好(r>0.999),定量限在0.5μg/kg~1.0μg/kg;在1.0、5.0、10.0μg/kg3个添加水平下,平均回收率为63.9%~113.7%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.0%~22.2%(n=6)。该方法快速、灵敏、简便、准确,可用于多种植源性食品中噁唑酰草胺农药残留的定性和定量检测。

HPLC法同时检测陕西平利绞股蓝中13种酚酸含量

为建立同时检测陕西平利绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)中13种酚酸含量的测定方法,采用高效液相色谱法(HPLC),利用甲醇水溶液(80%)常温涡旋,超声波提取,色谱柱为Dimensions C18(4.6 mm×150 mm,5μm,P/N:227-30011-07,C/N:18C03033),流动相为甲醇(100%)和磷酸水溶液(0.5%),洗脱方法为梯度洗脱,检测波长为280 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min,进样体积为5μL。结果表明,13种酚酸在浓度为5~100 mg/L时线性关系良好,相关系数(R2)≥0.998;在样本加标回收试验中,平均加标回收率为61.8%~131.0%。该测定方法精密度、重复性、稳定性好,适用于陕西平利绞股蓝中酚酸含量的测定。

Modernization of Chinese herbal compound and the high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC-MS)

Chinese herbal compound is playing an important role on curing human diseases.And it has been a trend that Chinese herbal compound is being used all over the world in 21 century.However,our Chinese herbal compound is facing serious challenge for the lack of canonical system of quality criterion for Chinese herbal compound so it has been a urgent problem to set up the quality control standards and reveal therapeutic basis of Chinese herbal compound.In order to give full play to the advantages of Chinese herbal compound,modern scientific and technological is used to research of Chinese herbal compound,especially the high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(HPLC-MS),because it is high sensitive,rapid,and obtain more information.It is very necessary that HPLC-MS is uesed to elucidate the effective components of basic substances of Chinese Herbal Compound,and endow traditional Chinese medicine with modern scientific connotation.

基于HPLC-MS/MS测定替考拉宁中4种黄曲霉毒素

建立高效液相色谱-三重四极杆质谱法(HPLC-MS/MS)测定替考拉宁中4种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2。样品经溶解、萃取、氮气吹干、再溶解处理,去除了基质对目标物检测的干扰;处理样品经C_(18)色谱柱梯度洗脱分离,采用电喷雾离子源与正离子多反应监测(MRM)模式采集三重四极杆质谱数据,对替考拉宁中4种黄曲霉毒素同时进行检测。4种黄曲霉毒素在4.000 0~80.000 0 ng/L质量浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数r>0.999 9;检测限为0.06μg/kg,定量限为0.20μg/kg;回收率为85.3%~95.0%,RSD为3.3%~3.6%。对3批替考拉宁样品中的黄曲霉毒素进行检测,均未检到黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2。本方法操作简捷,灵敏度高,准确性好,适合于替考拉宁中黄曲霉毒素的定量测定。

HPLC法测定金丹附延颗粒中肉桂酸和桂皮醛的含量

目的:建立金丹附延颗粒中肉桂酸和桂皮醛的HPLC含量测定方法。方法:采用C 18色谱柱,流动相为乙腈和0.1%磷酸溶液,检测器检测波长设置为290 nm,输液泵流速1.0 mL·min^(-1),色谱柱柱温设置为25℃。结果:肉桂酸、桂皮醛分别在0.2079~10.3938μg·mL^(-1)、0.2025~10.1270μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=1.0000),回收率分别为100.3%、102.6%,回收率RSD分别为1.57%、1.82%。结论:该方法简单、稳定,可用于金丹附延颗粒中肉桂酸和桂皮醛的含量测定。