胎鼠海马神经干细胞生物学特性的研究

目的 研究胎鼠脑组织中海马神经干细胞的自我繁殖特性及多向分化潜能。方法 在碱性成纤维生长因子（FGF-2）作用下从胎鼠脑组织中分离、培养神经干细胞并诱导其分化,然后采用间接免疫荧光和免疫组化技术研究神经干细胞的特性。结果 由胎鼠海马中分离出的神经干细胞在体外分裂增殖形成干细胞团,分化产生神经元和胶质细胞,它们分别对神经上皮干细胞蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等抗原标记呈现阳性。结论 胎鼠脑海马中存在神经干细胞,其具有自我增殖特性和多向分化潜能,在FGF-2的作用下分裂增殖,并分化成神经元、胶质细胞。

针刺督脉穴对血管性痴呆模型大鼠行为及细胞凋亡影响的实验研究

目的:评价针刺督脉穴对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠模型的学习记忆改善情况及可能机制,为针刺治疗血管性痴呆提供理论依据。方法:采用两侧颈总动脉血管阻断加硝普钠降压法复制VD大鼠模型;对VD大鼠模型进行西药(喜得镇)、针刺和电针干预;采用morris水迷宫法观察学习记忆情况;应用免疫组化法测定海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达及原位末端标记法检测细胞凋亡。结果:(1)morris水迷宫学习记忆能力检测,经过6次训练,与对照组比较,模型组跳台时间延长;与模型组比较,各治疗组跳台时间明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)凋亡相关蛋白检测结果显示:与对照组比较,模型组海马组织bcl-2、bax及细胞凋亡明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,各治疗组海马组织bcl-2水平增高,bax及细胞凋亡水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:(1)各治疗组均可改善VD模型大鼠的认知能力,提高学习记忆成绩。(2)各治疗组均可抑制VD大鼠海马组织细胞凋亡。

异丙酚对大鼠缺血再灌注海马区Bax和Bcl-2表达的影响

目的研究异丙酚对缺血再灌注脑损伤大鼠海马区凋亡因子Bax、Bcl-2及大脑梗死体积的影响,探讨异丙酚对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法Wistar大鼠共40只,随机分为4组,每组10只,S组为假手术组,C组为缺血再灌注损伤对照组,I组为线栓梗塞缺血后异丙酚治疗组,R组为线栓梗塞缺血再灌注后异丙酚治疗组。结果C组、I组、R组的神经功能缺失体征评分无明显差异(P>0.05)。I组和R组的梗死体积比C组明显减小,差异有统计学意义(均P<0.01)。C组海马区单位面积内细胞核Bax阳性表达的细胞数目较S组、I组、R组升高(均P<0.05),S组、I组、R组3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。I组、R组海马区Bcl-2吸光度测定值分别高于C组和S组(均P<0.05)。但C组与S组之间、I组与R组之间比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论异丙酚可降低缺血再灌注脑损伤大鼠海马区凋亡因子Bax的表达和大脑梗死体积,提高抑制凋亡因子Bcl-2的表达,对缺血再灌注脑损伤有一定保护作用。

利血平脾虚证模型海马基因表达谱变化的研究

目的 应用基因芯片技术研究利血平脾虚证大鼠模型海马基因表达谱的变化。方法 雌性Wistar大鼠 3 0只 ,按体质量均衡随机分为实验组和对照组 ,实验组用利血平注射液背部皮下注射 ,造模第 1～ 9天 0 .15mg/ (kg·d) ,第 10～ 12天 0 .2 5mg/ (kg·d) ,第 13天 0 .5mg/(kg·d)。对照组同法注射同量注射用水。两组均第 14天处死 ,取海马 ,提取总RNA ,逆转录为cDNA ,用Cy3和Cy5两种荧光物质分别标记两组大鼠海马组织的cDNA ,制成探针以备检测。选用 2张BioDoorChip 40 96基因表达谱芯片 ,将探针与芯片杂交 ,计算机扫描后 ,用GenePixPro3 .0软件进行分析。结果 筛选出 2张芯片上 40 96条靶基因中 ,与脾虚证模型基因差异表达一致的基因 51条 ,占检测基因的 1.2 5% ,其中表达下调的基因 3 7条 ,已知基因 8条 ;表达上调的基因 14条 ,已知基因6条。模型大鼠海马的基因表达改变涉及免疫、炎症反应、蛋白聚糖、细胞骨架、离子通道、信号传导等多方面。结论脾虚证实质涉及海马的基因表达谱改变 。

黄芩苷、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1对过氧化氢所致大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的 :探讨黄芩苷、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1对过氧化氢所致的大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法 :采用新生 1dSD大鼠海马神经元原代培养 ,以H2 O2 ( 5 0 μM)造成细胞损伤模型 ,将黄芩苷、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1的高 ( 2 0 μg ml)和低 ( 0 2 μg ml)两个剂量加入到培养细胞液中。在4h时 ,检测细胞形态及释放出的LDH活性变化 ,观察到上述药物对海马神经元损伤的直接保护作用。结果 :低剂量黄芩苷和三七皂苷R1与模型组比较 ,未见明显差异 ,三种组分高剂量和丹参酮ⅡA低剂量组与模型组比较 ,均有明显差异。结论 :黄芩苷、丹参酮ⅡA。

血管性痴呆大鼠海马中神经递质囊泡转运体的表达

目的:探讨大鼠在慢性全脑缺血的状态下,其与递质相关的不同的囊泡转运体,如谷氨酸囊泡转运体(vGluTs)、乙酰胆碱囊泡转运体(vAChT)、氨基丁酸转运蛋白(vGAT)在海马CA1-3区内表达的特点。方法:采用BCCAO法建立血管性痴呆动物模型,Morris水迷宫实验和T-迷宫延迟交替实验检测大鼠学习记忆能力,Western blot及免疫组织化学法检测痴呆大鼠vGluTs、vAChT、vGAT在海马CA1-3区中表达的特点。结果:Morris实验中,痴呆组大鼠的逃避潜伏期时间明显延长(P<0.05);穿越平台次数明显减少(P< 0.05);在象限中游行距离的百分比明显缩短(P<0.01)。T-迷宫实验中,痴呆组大鼠延缓交替作业的错误率明显增高(P<0.01)。与正常及对照组比,痴呆组大鼠海马CA1-3区vGluT1和vGluT3的水平明显降低(P<0.01)。与正常及对照组比,痴呆组大鼠海马CA1-3区vAChT的表达有所下降(P<0.01)。与正常及对照组相比,痴呆组大鼠vGluT1和vGluT3阳性神经元的数量在海马CA1-3区表达下降,vAChT阳性神经元的数量在海马CA1-3中表达也明显下降(P<0.01)。结论:谷氨酸能和胆碱能囊泡转运体功能缺陷、谷氨酸中枢胆碱能递质间的不平衡、神经元的缺失、CA1-3区海马信息环路的破坏是慢性全脑缺血状态下大鼠产生认知功能障碍的主要原因。

间歇性缺氧对大鼠认知功能和海马CA1区超微结构的影响

目的观察间歇性缺氧对大鼠认知功能及海马CA1区神经元超微结构的影响。方法SD雄性大鼠16只,随机分为正常组(UC,n=8)和间歇性缺氧组(IH,n=8)。UC组正常饲养,IH组每日间歇缺氧7 h建立间歇性缺氧大鼠模型,通过Morris水迷宫测试检测其学习和记忆能力,并于灌注固定后应用透射电镜观察海马CA1区超微结构。结果(1)Morris水迷宫学习成绩(定位航行实验):第5 d训练结束时IH组大鼠逃避潜伏期明显长于UC组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Morris水迷宫记忆成绩:IH组穿越平台次数[(1.38±0.92)次]较UC组减少[(3.75±1.04)次](P<0.01);IH组跨越目标象限时间占整个游泳时间的百分率[(20.52±3.41)%]也较UC组减少[(39.89±5.63)%](P<0.01)。(3)电镜下可见IH组神经元细胞质的电子密度增加,核染色质浓缩并聚集核膜附近,粗面内质网排列紊乱或扩张并出现脱颗粒现象,线粒体主要表现为肿胀、空泡变性及嵴消失,突触结构分界不清,突触小泡稀疏。UC组无明显病变。结论IH可致大鼠学习记忆障碍和海马神经元超微结构改变,IH所引起的大鼠学习记忆障碍与海马神经元超微结构的改变密切相关。

逍遥散对抑郁模型大鼠海马中枢神经递质含量及BDNF和TrkB表达的影响

目的探讨逍遥散对抑郁模型大鼠海马中神经递质(5-HT、NE、DA)的含量及海马脑源性神经营养因子(BDNF)和其受体型酪氨酸蛋白激酶B(Trk B)表达的影响,揭示逍遥散抗抑郁的机制。方法将SD雄性大鼠50只随机分为正常组,模型组,盐酸氟西汀组(3 mg/kg),逍遥散高、低剂量组(14、7 g/kg)。除正常组外,对其余各组大鼠进行56 d的孤养加慢性应激刺激,第29天起灌胃给药,连续给药28 d,给药结束后解剖大鼠取海马。采用放免法测定大鼠海马中神经递质5-HT、DA、NE的含量变化;采用免疫组化法检测海马中BDNF和Trk B阳性神经元面密度值的变化。结果与正常组相比,模型组大鼠海马中5-HT、DA、NE的含量显著下降,BDNF和Trk B阳性神经元面密度值显著减小(P<0.01),与模型组相比,逍遥散高、低剂量可以显著增加海马中5-HT、DA、NE的含量,明显提高BDNF和Trk B阳性神经元面密度值(P<0.05或P<0.01)。结论逍遥散可明显改善抑郁模型大鼠的抑郁状态,其机制与其可增加相关神经递质的含量,增强BDNF和Trk B表达有关。

晚期糖化终末产物对大鼠海马神经元的损伤作用与机制

目的研究晚期糖化终末产物(AGEs)对海马神经元存活、生长的影响和机制,以探讨AGEs在阿尔茨海默病发生中的作用。方法取培养1 d的新生大鼠海马神经元,分为对照组和AGEs-BSA组。在含终浓度为100 mg.L-1、500 mg.L-1、2000 mg.L-1的牛血清白蛋白(BSA)或AGEs-BSA的培养液中培养24 h,显微镜下观察神经元形态变化,噻唑蓝(MTT)法测定神经元存活率,硫代巴比妥法测定神经元脂质过氧化物(LPO)含量。结果100 mg.L-1BSA或AGEs-BSA条件下,2组海马神经元的形态、存活率及LPO含量均无明显差异(P>0.05)。500 mg.L-1和2 000 mg.L-1条件下,AGEs-BSA组的海马神经元生长状况均较差,细胞存活率均降低(P<0.05,P<0.01),LPO含量均升高(P<0.05,P<0.01),且2 000 mg.L-1组上述变化更显著(P<0.01)。结论AGEs对体外培养的海马神经元有剂量依赖性损伤作用。过氧化应激是AGEs损伤海马神经元的途径之一。

活血祛瘀解郁法对卒中后抑郁症大鼠海马基因BDNF表达的研究

目的:研究活血祛瘀解郁法对卒中后抑郁症大鼠海马基因的BDNF表达情况。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎致大鼠慢性低灌注PSD模型,采用免疫组化法分析海马BDNF蛋白的表达的变化。结果:与模型组相比,给药组大鼠海马表现为BDNF阳性细胞数量明显增多。结论:中药治疗使实验性卒中后抑郁症大鼠海马BDNF基因表达水平增高。

创伤后应激障碍大鼠海马组织5-HT1受体mRNA的表达

目的探讨创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)大鼠海马组织中5-羟色胺受体1mRNA的表达。方法随机将雄性Wistar大鼠分为对照组和PTSD组,采用改良的单一连续应激(SPS&S)方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,Morris水迷宫实验检测大鼠记忆功能,化学发光法检测大鼠血清皮质醇浓度。建模后1d、4d、7d、14d分离海马组织,RT-PCR方法检测5-羟色胺受体1的变化。结果 (1)对照组水迷宫实验逃避潜伏期为(5.632±1.065)s,模型组为(20.762±3.236)s(t=9.932,P<0.01);(2)对照组血清皮质醇浓度为(1.25±0.12)μg/dl,模型组为(0.58±0.09)μg/dl(t=7.340,P<0.01);(3)应激后1d、4d、7d、14d海马5-HT1A受体mRNA表达相对水平分别为0.846±0.067、0.510±0.052、1.007±0.137、1.109±0.106,与对照组1.223±0.152相比较,1d、4d、7d表达低于对照组(P<0.05);5-羟色胺1受体其他亚型未见表达。结论 PTSD大鼠海马中5-HT1A受体mRNA表达降低。

揿针对肿瘤抑郁模型小鼠血清学及海马结构的影响

目的探讨揿针对肿瘤抑郁造模小鼠血清学及海马结构的影响。方法选取健康雄性昆明小鼠45只,均在其腹腔内注射S180瘤株,制备肿瘤模型。肿瘤造模成功后,肿瘤小鼠均进行为期14 d的慢性不可预知温和刺激(CUMS)抑郁造模,造模成功后,按随机数字表法分为揿针组、传统针灸组,肿瘤抑郁造模组,以5只健康雄性昆明小鼠作为正常对照,集体饲养。揿针组、传统针灸组均针刺“百会”、“印堂”干预14 d。2周后观察小鼠海马结构改变,酶联免疫吸附(ELISA)法测定小鼠血清五羟色胺(5-HT)和肾上腺素(EBI)水平。结果与模型组相比,传统针灸组、揿针组均能提高小鼠血清中的5羟色胺含量,有统计学意义(P<0.01),且两组均能降低其肾上腺素(EBI)含量,有统计学意义(P<0.01),但揿针组小鼠的两项血清学含量水平低于传统针灸组小鼠的水平。揿针和传统针灸组小鼠海马结构得到改善。结论揿针能够改善肿瘤抑郁模型小鼠抑郁状态及海马结构,但是改善的疗效次于传统针灸组的疗效,两者联合能够起到事半功倍的疗效。

RP-HPLC法检测大鼠海马中4种氨基酸类神经递质含量的研究

建立了RP-HPLC测定大鼠海马中4种氨基酸类神经递质含量的方法。以2,4-二硝基氟苯（DNFB）为衍生化试剂进行柱前衍生,色谱条件为Diamonsil C18（4.6mm×200mm,5μm）色谱柱,乙腈和醋酸钠缓冲液为流动相,采用二元梯度洗脱,UV350nm检测。结果显示：在18min内,4种氨基酸分离完全,在0.01-100μg/mL范围内线性关系良好,天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、γ-氨基丁酸（GABA）相关系数分别为0.9985、0.9976、0.9943、0.9924;日内变异系数分别为2.4%、3.8%、3.2%和3.5%;标准加入平均回收率分别为94.80%、93.93%、92.69%和96.74%。

强直电刺激右背海马诱发双侧海马神经元癫痫相关性单位放电特征

目的 :探讨双侧海马细胞癫痫相关性单位放电特征。方法 :双玻璃微电极同步记录大鼠 44对双侧海马神经元单位放电 ,每隔 5～ 10min重复强直电刺激右背海马 (0 .6～ 0 .4mA 60Hz 2s)一次 ,共施加 10～ 12个刺激串。结果 :强直电刺激可以诱发双侧海马神经元单位放电的原发性和继发性后放 ,呈现明显的双侧非对称性和动态发展特征 ,甚至出现双侧交互性改变 ,与人类颞叶癫痫的病理生理特征相吻合 :进行性发展、跨大脑半球扩布和动态变化。强直电刺激对海马细胞单位自发放电具有易化或抑制、调制或解调作用 ,并取决于这些细胞的基础单位放电。东莨菪碱可以解调电刺激引起的海马细胞爆发式单位放电成为紧张性放电 ,诱导强直电刺激后单位放电频率的抑制效应。结论 :强直电刺激右背海马后 。

氯胺酮对SD幼鼠海马神经元细胞凋亡和突触素表达的影响

目的观察氯胺酮对7d龄SD幼鼠海马神经元细胞凋亡和突触素(P38)表达的影响。方法7d龄SD幼鼠共30只,随机分成3组,分别注射氯胺酮25mg/kg(K1组)、50mg/kg(K2组),对照组注射生理盐水50ml/kg(K0组),24h后取材,采用Tunel法检测神经元细胞凋亡,免疫组化染色和Westernblot技术检测SD幼鼠海马突触素的表达,进行图像分析。结果注射氯胺酮后24h,海马神经元细胞凋亡计数K0组(5.3±1.7)、K1组(9.5±4.2)、K2组(23.4±7.6),免疫组化染色突触素灰度值:K0组为(174.11±4.68),K1组为(181.36±4.17),K2组为(198.25±3.06)。Westernblot突触素蛋白电泳条带积分光密度值K0组为(4007±758),K1组为(2621±465),K2组为(987±183)。结论注射氯胺酮后24h,SD大鼠海马神经元细胞大量凋亡,突触素表达减少可能和氯胺酮神经毒性有关。

氟西汀对创伤后应激障碍大鼠海马组织5-HT1A受体表达的影响

目的:研究创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马组织中5-羟色胺受体1A(5-HT1A受体)表达变化,探讨氟西汀治疗PTSD的机制。方法:随机将雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组和氟西汀组,采用改良的单一连续应激(SPS&S)方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,氟西汀组大鼠每天腹腔注射氟西汀(10mg.kg-1)治疗。采用免疫印迹法检测大鼠海马组织5-HT1A受体表达,RT-PCR方法检测5-HT1A mRNA的表达。结果:对照组、模型组及氟西汀组大鼠海马组织中5-HT1A相对表达分别为1.18±0.12、0.39±0.05和0.71±0.09,模型组和氟西汀组低于对照组(P<0.05),氟西汀组高于模型组(P<0.05);对照组、模型组及氟西汀组大鼠海马组织中5-HT1A mRNA表达的积分光密度分别为0.95±0.12、0.19±0.05和0.74±0.05,模型组和氟西汀组低于对照组(P<0.05),氟西汀组高于模型组(P<0.05)。结论:PTSD大鼠海马组织5-HT1A受体表达减弱,应用氟西汀后可逆转这种现象,提示氟西汀可能通过逆转5-HT1A受体表达降低发挥治疗作用。

戊四氮点燃大鼠海马CA_3区钙超载与亚低温对点燃大鼠脑保护作用的研究

目的海马CA3区钙超载是否在癫痫的发病机制中起主要作用及亚低温对癫痫是否有治疗意义。方法用荧光倒置显微镜来测定癫痫状态下海马CA1、CA3区钙超载的情况,并用钙离子拮抗剂尼莫地平作用于海马脑片看钙超载的变化。然后将大鼠分为头皮温度为41℃、37℃、32℃、26℃的4组,通过对4组点燃大鼠行为学和海马组织病理学的观察来看亚低温对癫痫的脑保护作用。结果癫痫大鼠海马CA1、CA3区钙超载高于对照组,CA3区钙超载高于CA1区,在尼莫地平的作用下CA3区钙超载明显降低。组织病理学改变显示CA3区是海马区神经元变性、坏死最明显的部位。而亚低温下癫痫的发作程度和神经元变性、坏死最轻。结论钙超载参与了癫痫的发病机制,其中海马CA3区的钙超载在癫痫发病机制中起主要作用。而亚低温对脑有保护作用。

癫痫大鼠海马CA3区钙超载与癫痫发病机制的相关性研究

目的:探讨癫痫的发病机制,海马CA3区钙超载是否在癫痫的发病机制中起主要作用。方法:用荧光倒置显微镜来测定癫痫状态下海马CA1、CA3区钙超载的情况,并用钙离子拮抗剂尼莫地平作用于海马脑片看钙超载的变化。并把点燃成功的大鼠麻醉后做海马脑片,看海马的组织病理学改变。结果:癫痫大鼠海马CA1、CA3区钙超载高于对照组,CA3区钙超载高于CA1区,在尼莫地平的作用下CA3区钙超载明显降低。组织病理学改变亦显示CA3区是神经元变性、坏死是海马区最明显的部位。结论:钙超载参与了癫痫的发病机制,其中海马CA3区的钙超载在癫痫发病机制中起主要作用。

颞叶癫痫儿童脑海马组织内BDNF表达变化的意义

目的探讨脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)发病机制中的作用。方法观察组为2012年3月-2013年3月在某医院神经外科癫痫中心16例TLE患儿术中切除的海马脑组织,对照组为2011年9月-2013年3月某医院神经外科8例非癫痫手术患儿的海马脑组织。标本采用免疫组化SABC法进行检测。免疫组化结果的判定以显微镜下观察,按每张切片的阳性细胞着色程度及数量,采用积分综合计量,并采用Ridit分析。结果按照显微镜下观察评分对两组数据进行分类,经Ridit分析可知两组分级差异有统计学意义(Hc=9.2472,P<0.01),故认为观察组海马脑组织中BDNF表达强于对照组中海马脑组织BDNF表达。结论 BDNF在颞叶癫痫患儿的海马脑组织中表达增强,可能在颞叶癫痫的发病机制中起重要作用。

银杏内酯B对胆固醇和载脂蛋白E4损伤海马神经元活性和生长的影响

目的探讨高胆固醇和载脂蛋白E4(apoE4)对海马神经元生长和活性的影响及银杏内酯B的保护作用。方法采用无血清培养基体外培养初生大鼠海马神经元,采用神经元特异性烯醇化酶免疫荧光进行鉴定。用160μg/ml的银杏内酯B处理海马神经元16h,40μg/ml25-OH-胆固醇和30μg/mlapoE4继续处理24h。MTT比色实验观察海马神经元生长活力的改变;Image-Proplus分析系统观察神经元最长突起长度和胞体长短经的改变。结果25-OH-胆固醇和apoE4降低海马神经元活性,抑制海马神经元突起的生长,与单纯apoE4和单纯胆固醇相比有显著性差异;银杏内酯B对神经元活性有提高趋势,但与模型组无显著差异(P>0.05),银杏内酯B可以有效促进损伤神经元突起生长,与模型组相比有显著差异(P<0.05)。结论高胆固醇在apoE4环境下损伤海马神经元,促进老年性痴呆的发生,银杏内酯B对损伤神经元在一定程度上有保护作用。