LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

小麦新种质4844中外源P染色质的GISH与SSR分析

采用基因组原位杂交(GISH)检测和染色体组成分析方法,对大穗多花小麦新种质4844后代的15个株系进行遗传分析。结果发现,4844-12是1个稳定的异附加系,4844-2和4844-8是稳定的异代换系;对异代换系进行SSR分析表明,代换系中小麦的6D染色体被1对P染色体代换,说明这对冰草染色体与小麦6D染色体有部分同源关系,由此确定4844中的冰草染色体为6P;同时筛选出冰草6P染色体的4个SSR标记。

计算机视觉中基于多照片的同名点自动匹配

对多张图像上同名点的自动匹配算法进行了分析,提出了利用多张图像上的核线约束来实现同名点的匹配。首先,计算出一个待匹配点在另外两张图像中的核线,在核线附近确定出概略匹配点。然后,再次利用核线约束特性在确定的概略匹配点之间确定出唯一的匹配点。最后,用该方法对多张图像间的同名点进行了匹配试验,实验结果表明,该方法效果良好,具有较好的实用价值。

小麦3个NAC转录因子基因克隆与功能分析

NAC类转录因子参与植物基因在不同条件、不同发育期的表达调控,在植物的发育、生长及对外界的各种生物和非生物因子的胁迫应答中起关键的调控作用。本研究对非亲和条锈菌小种CYR32侵染诱导的抗条锈病基因Yr5近等基因系Taichung29*6/Yr5的cDNA文库进行筛选及同源克隆,获得了小麦3个NAC类转录因子的cDNA序列。序列分析结果表明,这3个转录因子都具有DNA结合结构域,即NAC结构域,且氨基酸序列在该结构域的A、B、C、D和E5个亚区高度保守;同时发现这3个NAC类转录因子都有核定位信号及相关的转录调控功能区域。通过系统进化树分析,发现其中之一的TaNAC1属于NAC转录因子家族第Ⅰ组的NAP亚组,TaNAC3属于ATAF1亚组,TaNAC5属于NAM亚组;根据系统进化树和相关基因的功能分析,我们推测小麦转录因子TaNAC1、TaNAC3和TaNAC5可能参与植物生长发育调控或对生物、非生物胁迫作出的应答反应。

粘虫核型多角体病毒在同源寄主细胞系内复制的研究

对MsNPV在同源寄主细胞系NEAU Ms 94 7311内复制进行了研究。结果表明 ,接种MsNPV后 72h ,细胞核内开始有成熟的多角体形成 ,病毒接种后 2 4 0h感染率最大 ,达 36.2 % ,至2 64h多角体完全成熟 ,达 2 5.0PIB/感染细胞。病毒增殖曲线表明 ,接毒后 2 4h在培养基中开始检测出MsNPV NOV ,2 4 0h滴度达最大值 ,为 6.32× 10 5TCID50 /mL。病毒连续传代至第 7代或第 8代以后 ,其感染率、病毒滴度及多角体产量均有显著下降。

甘蓝型优质无花瓣油菜NF001的发现与选育

1998年春在有性杂交组合940×中双821Y的F2群体中发现缺辩植株，之后通过兄妹交、自交连续进行了4代的定向选择，育成了无辩性状稳定的双低甘蓝型油菜常规优质品系NF001。其群体无辩基因外显率达100％，全无辩花率达98．6％～100％，无辩度达99．6％～100％，芥酸含量1％左右，硫代葡萄糖甙含量25．3～28．6μmol／g饼，含油量40％左右，蛋白质35．8％～37．1％，是一个具有特异性状的优异种质资源，具有较高的潜在育种价值。

基于EST的普通小麦近缘物种第二部分同源群染色体特异分子标记

小麦近缘属物种中具有许多优良性状,为小麦遗传改良提供非常重要的基因资源。根据定位在普通小麦2B染色体长臂上的EST(expressed sequence tag,EST)序列开发了55个标记,在普通小麦品种中国春、二倍体山羊草(Aegilops longissi-ma,genome SlSl;Aegilops geniculata,genome MgMg)、四倍体山羊草(Aegilops peregrina,genome SpSpUpUp)、黑麦(Secale cereale‘BLANCO’,genome RR)、大麦(Hordeum vulgare‘BETZES’,genome HH)及这些物种在中国春背景下的二体异附加系中进行PCR扩增。结果表明:19个标记(占34.5%)至少能够在1个近缘种中有特异性扩增,筛选出2R、2H、2Sl、2Mg、2Sp和2Up染色体的特异标记分别为11、8、5、2、8和3个。这些基于EST序列开发的特异分子标记可以有效地检测和追踪导入小麦背景中的外源第二部分同源群染色体(片段)。

小麦同源染色体4B控制株高遗传差异的研究

利用有一定株高梯度的4个小麦品种的Rht3近等基因系,以及从两个Rht3近等基因系中自然产生的4B单体系HL苏三和HL望水白,运用单体正反交法和单体正反回交法研究了D望水白、D苏三、D扬三和D蜀万704的同源染色体4B控制株高遗传的差异。结果表明,D望水白的4B染色体同其它3个矮秆系的4B染色体相比具有显著的促高作用。由此推测,用D望水白的4B染色体代换进其它3个矮秆系可以不同程度地提高这些矮秆系的株高。本研究运用缺体正反交法比较了D苏三和D望水白4B染色体控制株高的遗传差异,结果同单体正反交法和单体正反回交法相近。

基于核线约束的图像匹配中同名点局部区间确定方法

为了提高图像匹配的效率,在同名核线上搜索同名像点时,研究缩小同名像点在同名核线上搜索范围的方法,提高匹配的速度和精度.首先根据研究区域的地形起伏情况确定地面点高程可能的取值,并求出左图像对应的地面点的点投影系数的取值范围;然后求出地面点对应的高低2个点三维坐标;最后根据高低点的三维坐标求出右图像上同名像点的范围,确定核线上局部搜索区间.通过交通视频检测立体图像的实验,给定2 m的地形起伏,同名像点在核线上的搜索区间大大缩小.该方法提高了匹配速度和匹配成功率.在计算机视觉和数字摄影测量领域具有广泛的应用.

ErbB2 RNA干扰联合^(60)Co γ照射对U251细胞增殖及凋亡的影响

构建特异性抑制白血病病毒致癌基因同源体2(ErbB2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并检测联合^(60)Coγ照射对U251细胞增殖抑制及促进凋亡作用。设计、合成ErbB2特异性的19bp短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到Psflence2.1-U6-H1载体中,构建ErbB2特异siRNA的表达载体,HindⅢ和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染U251细胞,四甲基偶氮唑盐法(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色,Annexin-(?)检测细胞凋亡情况。经双酶切与测序鉴定成功构建ErbB2-siRNA表达载体,转染星型胶质瘤细胞株U251细胞可显著抑制细胞增殖活性(p<0.05),并诱导细胞产生时间依赖性凋亡,24h凋亡细胞百分比增加10.52%,48h凋亡细胞百分比增加50.65%。联合^(60)Coγ照射U251细胞增殖活性较单独转染进一步显著降低(p<0.05)。运用Psilence2.1-U6-H1载体构建的ErbB2-siRNA表达载体可有效抑制U251细胞增殖并促进时间依赖性细胞凋亡;联合^(60)Coγ照射可增加增殖抑制效果。

用于临床标本的无细胞非同源末端连接检测体系的建立

目的 建立一个用于临床标本的体外非同源末端连接的检测体系。方法 从白血病细胞株和正常骨髓及外周血细胞中提取的核蛋白在体外与线性质粒pUC18DNA一起作用,通过琼脂糖凝胶电泳分离和SYBRgreenⅠ染色观察其连接能力。结果 白血病细胞株NB4、U937、K5 6 2、SHI 1、Jurkat的连接能力为10 .6 %～32 .9% ,正常骨髓或外周血细胞的连接能力为5 .2 %～2 0 .0 %。结论 无细胞的非同源末端连接检测体系的建立是研究人类白血病细胞DNA修复机制的实验基础。

EZH2对先天性巨结肠结肠组织中GFRα1表达的影响

目的通过检测先天性巨结肠(HSCR)患儿结肠组织内胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)的表达水平,探讨EZH2在调控GFRα1基因表达及HSCR发病过程中的作用。方法随机选取24例行巨结肠根治术的HSCR患儿,取痉挛段结肠组织为试验组。以同期18例因新生儿坏死性小肠结肠炎而接受手术治疗的患儿,取手术切除的坏死结肠组织作为对照组。利用实时荧光定量PCR及Western blot检测两组结肠组织内GFRα1、EZH2的表达水平。将人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y分为EZH2过表达组和阴性对照组,EZH2过表达组转染pCMV6-EZH2质粒,阴性对照组转染pCMV6质粒,检测转染后细胞中GFRα1、EZH2的表达水平。结果与对照组相比,试验组GFRα1及EZH2 mRNA和蛋白的表达水平降低(P<0.05),且EZH2蛋白表达水平与GFRα1蛋白呈正相关(r=0.606,P=0.002)。与阴性对照组相比,EZH2过表达组EZH2及GFRα1表达水平明显上调(P<0.05)。结论HSCR患儿结肠组织中EZH2低表达可能是GFRα1表达不足,诱发HSCR的原因之一。

水稻不育系系谱抗稻瘟病基因同源序列的克隆与序列分析

根据已知NBS-LRR类抗病基因结构中氨基酸的保守区域设计简并引物,对水稻不育系系谱NBS-LRR类抗病基因同源序列进行克隆、测序和聚类。同源序列克隆与分析表明,7个水稻不育系系谱亲本中共获得14个阳性克隆,其中11个含有NBS-LRR类抗病基因所特有的保守氨基酸结构域KinaseⅠ、KinaseⅡ、KinaseⅢ及跨膜区域。这些片段间同源性最高达98.3%,最低仅为29.7%;11个氨基酸片段与抗病基因Xal(AB002266)的同源性较高,42%-45%的氨基酸序列相同,59%-64%的氨基酸序列相似,且与水稻其他NBS-LRR类抗性蛋白相似性很高。通过聚类分析,可以将其分为3类,分别记为G1、G2、G3,并发现抗源谷农13所含有的G3类基因,通过天谷、福伊传给后代谷丰、全丰。

胰岛素和表皮生长因子刺激引起的蛋白激酶B磷酸化与PTEN突变的关系

目的研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)突变对人鼻咽癌细胞系CNE-1中蛋白激酶B(Akt)的磷酸化的影响。方法 CNE-1细胞用含100 m L/L胎牛血清RPMI1640培养基培养,并分别转染野生型PTEN(wt PTEN)质粒、突变型PTEN C124S质粒和突变型PTEN G129E质粒。各组细胞加刺激前用无血清RPMI1640培养基饥饿过夜,用0.15 IU/m L胰岛素或0.3μg/m L重组人表皮生长因子(rh EGF)刺激,Western blot法检测Akt的磷酸化水平。结果胰岛素和rh EGF刺激均可导致CNE-1细胞Akt信号激活;wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活;PTEN C124S突变体可激活胰岛素刺激引起的Akt信号,但不可激活rh EGF刺激引起的Akt信号;PTEN G129E突变体抑制胰岛素刺激引起的Akt信号激活。结论 wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活,但PTEN C124S和G129E突变体不能一致性激活Akt信号表达。这表明PTEN基因突变可能与Akt信号表达无关。

人大肠癌细胞系HCT116中Sirt 1基因敲除细胞株的构建

目的利用AAV介导的体细胞基因敲除技术,在人大肠癌细胞系HCT116中对靶基因Sirt 1进行敲除,达到基因沉默的目的。方法构建Sirt1打靶载体,通过病毒包装、感染、药物筛选、PCR鉴定、Western blotting鉴定等步骤获得Sirt 1基因敲除的细胞株。结果经过筛选和鉴定后获得两个Sirt1-/-阳性克隆,成功构建HCT116 Sirt1-/-细胞系。结论通过体细胞敲除技术,我们成功地获得Sirt1敲除肠癌细胞株。

同分异构物分子结构与性能间的定量关系 1.多环芳烃中直链结构长度的优势

本文研究了多环烃异构物的分子轨道能量与电子活动性能的关系,包括各种并苯、联苯类异构物的分子轨道能级以及电子光谱等有关性能。每组异构物中,与最高占有分子轨道能级E_1及直接相关的性能以最长直链物为最低级限,带有侧位环的异构物则依侧位环数目递增,与E_(-1)及其直接相关性能,则以最长直链物为最高极限,依直环数的缩减而递减。各组异构物之间,性能～环数图线上形成的同系列曲线和等直环线都表明分子中直链的长度是主要因素。

体外研究RNA干扰介导的SIAH2基因沉默对人肝癌细胞HepG2的影响（英文）

目的:研究发现泛素连接酶SIAH2在多种肿瘤中高表达,为了研究SIAH2和肝癌发病之间的相关性,利用RNA干扰技术观察泛素连接酶SIAH2基因表达抑制对人肝癌细胞株Hep G2细胞周期和凋亡的影响。方法:采用免疫组化检测50例HCC和相应癌旁组织中SIAH2蛋白的表达。构建特异性靶向SIAH2的重组干扰质粒转染人肝癌细胞Hep G2,采用RT-PCR和Western blotting技术检测重组质粒对SIAH2 mRNA和蛋白表达的影响,MTS比色法测定重组质粒转染对细胞体外增殖能力的影响,流式细胞术检测重组质粒转染后细胞周期和凋亡的变化。Transwell实验检测细胞体外侵袭能力变化。结果:SIAH2在肝癌组织中表达明显升高。靶向SIAH2的干扰RNA能显著抑制SIAH2 mRNA和蛋白的表达水平;与Hep G2-neo组、Hep G2-NC组和未转染Hep G2组相比,SIAH2干扰组(Hep G2-S3)细胞增殖速度明显减慢,细胞明显阻滞于G1期,细胞凋亡率明显升高,体外侵袭能力减弱。结论:SIAH2通过促进肝癌细胞增殖和侵袭在肝癌发病中发挥癌基因作用,上述研究为以SIAH2为靶点的肝癌基因治疗提供实验依据。

子宫颈细胞系及子宫颈上皮病变中共刺激分子B7-H1的表达及与HPV16感染的关系

目的探讨人子宫颈细胞系及子宫颈病变组织中共刺激分子B7-H1的表达,及与HPV16感染的关系。方法采用qRT-PCR法检测正常子宫颈上皮细胞H8(转染HPV16 E6基因)系、人类永生化表皮细胞(HaCat)系、子宫颈癌细胞[SiHa(HPV16感染)、Caski(HPV16、18共感染)和Hella细胞(HPV18感染)]系中HPV16 E6 mRNA的含量;应用Western blot法检测5种细胞系中B7-H1蛋白表达量;采用免疫组化SP法检测149例慢性子宫颈炎组织、子宫颈上皮内病变(cervical intra-epithelial neoplasia,CIN)及子宫颈鳞癌组织中B7-H1蛋白的含量,分析B7-H1与子宫颈鳞癌临床病理特征及预后的关系。结果HPV16 E6 mRNA在转染HPV16 E6基因而永生化的正常子宫颈上皮H8细胞系中表达最高(P<0.05),HPV16 E6 mRNA在Caski及SiHa细胞系中表达也明显增高(P<0.05)。B7-H1蛋白在Hella细胞系中表达最强,在Caski、SiHa和H8细胞系中均有表达,且明显高于HaCat细胞系(P<0.01)。B7-H1在慢性子宫颈炎、CIN及子宫颈鳞癌组织中的阳性率分别为28.0%、59.4%和80.0%,随着子宫颈病变的严重程度,B7-H1表达增强(P<0.01),且B7-H1在子宫颈鳞癌中的表达与子宫颈鳞癌分化程度有关(P<0.01),在子宫颈病变组织中,HPV16的表达随病理分级逐渐增高,在慢性子宫颈炎、CIN和子宫颈鳞癌组织中分别为20.0%、48.4%和85.0%(P<0.01);相关性分析发现,在CIN和子宫颈鳞癌组织中,B7-H1与HPV16均相关(rCIN=0.726、r子宫颈鳞癌=0.773,P<0.05)。结论HPV16感染促使B7-H1在子宫颈病变中的表达,B7-H1的表达与子宫颈病变的严重程度有关,激活B7-H1/PD-1信号通路可能是高危型HPV持续感染的因素之一。

永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子、细胞周期蛋白B1和PTEN的表达

目的观察核干细胞因子(nucleostemin,NS)、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)及抑癌基因PTEN mRNA和蛋白的表达情况。方法正常食管上皮细胞(shantou human embryonic esophageal epithelial cell line,SHEE)和永生化食管上皮恶变细胞(shantou human embryonic esophageal carcinoma epithelial cell line,SHEEC)连续传代培养,取对数生长期SHEE和SHEEC细胞,采用RT-PCR及Western blot方法检测细胞中NS、Cyclin B1及PTEN mRNA和蛋白的表达并做相关性分析,MTT法检测抑制NS表达后的细胞增殖活性。结果以SHEE细胞中NS、Cyclin B1和PTEN mRNA的表达量为1,SHEEC细胞中对应的相对表达量分别为(2.047±0.507)、(2.214±0.213)及(0.668±0.188),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);SHEE及SHEEC细胞中NS、Cyclin B1及PTEN蛋白表达量分别为(1.142±0.113),(3.161±0.108)、(1.585±0.056),(2.173±0.058)及(1.894±0.341),(1.162±0.524),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);NS mRNA和蛋白与Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=0.832,P<0.01;r=0.991,P<0.05),与PTEN mRNA和蛋白的表达呈负相关(r=-0.924,P<0.01;r=-0.769,P<0.05);MTT检测结果显示,NS RNA干扰(RNA interference,RNAi)组与空白对照组和阴性对照组在干扰后12 h细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05),而在干扰后24、36、48 h差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SHEEC细胞中NS、Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达量均高于SHEE,而PTEN的表达量低于SHEE,NS可能对细胞恶变有影响。

硫酸右旋糖苷对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MGC-803细胞增殖、集落形成和凋亡的影响及可能的机制。方法培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(PBS处理)和实验组(0.3%DS处理);应用EdU细胞增殖实验检测DS对胃癌MGC-803细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验检测DS对胃癌MGC-803细胞集落形成能力的影响;AnnexinⅤ-PI双染流式检测细胞凋亡的变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞不同时间点(2、 8、 12、 24 h)EZH2、 Cleaved-caspase3蛋白表达水平。结果 EdU实验结果显示,与对照组相比,DS明显抑制胃癌MGC-803细胞增殖(P<0.01)。平板克隆形成实验结果表明,DS组集落形成能力较对照组显著降低(P<0.01), AnnexinⅤ-PI双染流式结果显示,实验组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0 .01);Westernblot结果表明,实验组EZH2的表达较对照组明显下调(P<0 .05), Cleaved-caspase3的表达较对照组明显上调(P<0 .05)。结论 DS能明显抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导凋亡,其机制可能与抑制EZH2的表达有关。