不同因素对桑枝多糖含量影响的研究

为了比较不同因素对桑枝多糖含量的影响,以葡萄糖为标准品,采用热水浸提法提取,使用苯酚硫酸法显色,利用紫外分光光度计测其吸光度(A)值,将A值代入标准曲线,得出多糖含量.通过对样品多糖含量的比较,发现不同部位中,上段>中段>下段;不同地区中,浙江>江苏>和县>云南>亳州>含山;不同组织结构中,形成层外组织结构>形成层内组织结构;不同粗细程度的粉末,过7号筛粉末>过6号筛粉末>过5号筛粉末>过4号筛粉末>过3号筛粉末,根据试验结果,得出多糖含量较高的桑枝样品条件为浙江上部形成层外组织过7号筛粉末样品.

改良热酚水法制备大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的研究

采用热酚水法提取肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的脂多糖(LPS),经浓缩酶解,离心分离得纯化LPS,酸解制得O-特异性侧链(O-PS),能有效去除核酸及杂蛋白,抗原具有鲎试剂凝集活性及对产蛋鸡有较强的免疫原性,建立了一种改良热酚水法提取制备O157:H7特异性脂多糖抗原的方法。

肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立

目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。

正交试验优化洋葱多糖提取工艺研究

目的确定提取洋葱多糖的最佳工艺条件,并测定其含量。方法采用热水提醇沉法提取洋葱多糖,并用正交试验设计对提取工艺条件进行优化;采用苯酚-硫酸法测定洋葱多糖含量。结果正交试验3个因素对多糖提取率的影响强度为料液比>提取温度>提取时间,料液比为1∶20,提取温度为70℃,提取时间为2 h时,洋葱多糖提取率(4. 57%)最高,提取的洋葱多糖含量为64. 56%。结论采用该方法洋葱多糖提取率高且含量也很高,操作简便,容易实施,重复性好,可作为洋葱多糖的含量测定方法。

藏药沙棘枝叶多糖的提取与含量测定

目的确定得糖率最高的提取部位并测定该部位提取物中多糖含量.方法以沙棘枝叶多糖得率为标准,通过超声波辅助-乙醇回流脱脂-热水浸提提取方法,比较水提取物、甲醇提取物、乙酸乙酯提取物的得糖率;Sevage法除蛋白后,采用苯酚-浓硫酸法测定沙棘多糖中总糖的含量.结果乙酸乙脂提取物、甲醇提取物、水提物部位的得糖率分别为4.01%、4.84%、6.42%,且水提物中总糖平均含量为28.51%.结论超声波辅助方法提取沙棘枝叶中的多糖,得糖率高;苯酚-浓硫酸法测定沙棘枝叶中多糖含量的方法简便、灵敏、准确,适合于沙棘多糖含量的测定.

猪痢疾密螺旋体水相抗原的提取及鉴定

本试验应用热水酚法提取了猪痢疾密螺旋体菌壁的水相抗原，并用琼扩法、火箭电泳法以及被动血凝法测定了该抗原的特异性。结果表明，该抗原能特异性地与兔抗猪痢疾密螺旋体的抗血清和单克隆抗体６Ｈ结合，而与抗非致病性密螺旋体抗血清不发生反应。

丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析

为了提取、纯化天鹅源丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS）并检测其活性，试验通过热酚水法提取丙型副伤寒沙门氏菌LPS，采用DNaseI、RNaseA和蛋白酶K及醇沉法纯化LPS，测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量，鲎试剂检测凝集活性，显色基质法测定其活性。结果显示，纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS平均产率为1．48％，多糖含量为3．84％，蛋白含量为1．49％，核酸含量为5．45％，且核酸片段低于100bp，SDS-PAGE电泳和银染结果显示条带主要集中在10～15ku范围内，与2EU／mL鲎试剂的最小凝集浓度是10．99ng／mL，显色基质法测定其活性为9．82×10^5EU／mg。该试验提取、纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS纯度较高，生物活性良好。

不同产地枸杞多糖含量的比较研究

目的比较不同产地枸杞多糖的含量。方法采用热水浸提法分别提取宁夏、浙江和四川产枸杞中的多糖成分,苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量。结果浙江产枸杞多糖含量0.830%,宁夏产枸杞多糖含量0.769%,四川产枸杞多糖含量0.590%。结论不同产地枸杞多糖含量不同,可能与环境、采摘时间及加工过程等有关。

银耳多糖的提取工艺研究

[目的]研究热水浸提法提取银耳多糖的最佳工艺条件。[方法]采用苯酚-硫酸法测定银耳总多糖的含量,以提取温度、提取时间、提取次数、溶剂用量为4个影响因素,每个因素分别设计3个水平进行正交试验,优化银耳多糖的提取工艺。[结果]试验表明,热水浸提法提取银耳多糖的最佳工艺为40倍量水,90℃提取3 h,共提取2次,此条件下多糖得率最高。[结论]研究可为银耳多糖的开发应用提供参考依据。

第七批细菌内毒素国家标准品原料制备方法的研究

目的进行第七批细菌内毒素国家标准品原料制备方法的研究。方法采用4种方法制备内毒素,对得到的内毒素原料进行理化分析后,选取其中最好的制备方法,再采用正交法对其实验条件进行优化。结果最终方法确定为:复苏、培养和收获大肠杆菌;热酚水法粗提;超速离心(4℃,105000×g,4h)纯化;冻干得到原料。结论确立了第七批细菌内毒素国家标准品原料的制备方法。