不同海拔高度大鼠严重烫伤延迟复苏心肌组织ET-1和HSP_(70)的变化

目的:探讨高原地区不同海拔高度(3 840 m,1 517 m)大鼠严重烫伤后延迟复苏心肌组织内皮素-1(ET-1)与热休克蛋白70(HSP70)的变化规律。方法:雄性W istar大鼠240只随机分为延迟复苏组(DFR,n=100)、即时复苏组(IFR,n=120)和对照组(CG,n=20),建立总体表面积30%的Ⅲ度烫伤模型,分别于伤后1、6、12、24、72和168 h取材。应用免疫组化方法检测心肌组织ET-1和HSP70的含量。结果:ET-1在心肌细胞浆及血管内皮组织表达高于对照组,随海拔梯度上升ET-1表达增高,海拔高组高于海拔低组,DFR组高于IFR组(P<0.01);HSP70表达在海拔低者差异早于海拔高者(P<0.01)。结论:高原地区大鼠严重烫伤后随海拔升高,心肌保护物质消耗增多,ET-1/HSP70调节变化更加显著。

热习服对中长跑运动员湿热环境下运动体液调节激素及Hsp70的影响

目的:探讨热习服对湿热环境下运动机体体液调节激素ALD、AVP、ANP、NE及Hsp70的影响。方法:16名中长跑运动员随机分为热习服组(HA)和对照组(HC),每组各8人;HA组先进行10天的热习服方案,使机体产生热习服,然后进行一次33℃、80%RH湿热环境下的40min、70%VO2max运动强度的热负荷运动;HC组不经过热习服阶段,直接进行一次同于热习服组的热负荷运动。热负荷运动前后测试实验对象的热应激的生理学指标及体液调节激素ALD、AVP、ANP、NE及Hsp70的水平,观察两组实验对象测试指标在热负荷运动前后的变化。结果:热负荷运动后,HA组和HC组核心温度和心率均非常显著性升高(P<0.01),出汗率无显著变化;HA组热负荷运动后的核心温度和心率水平比对照组低、出汗率水平比对照组高,但两组间差异无统计学意义。与运动前相比,HA组和HC组热负荷运动后红细胞压积非常显著性升高(P<0.01)。与运动前相比,HA组和HC组运动后ALD和NE非常显著性升高(P<0.01),AVP显著性升高(P<0.05),ANP显著性降低(P<0.05),Hsp70非常显著性升高(P<0.01),但组间检验均未见显著性差异(P>0.05)。结论:体液调节激素对维护热负荷运动过程中的机体水盐代谢和平衡发挥着重要作用;热习服一定程度上降低了机体对热负荷运动应激的生理生化热调节反应,提高了机体适应运动热环境的能力。

高温高湿环境犬肢体火器伤后TNF-α与HSP70含量变化的实验研究

为探讨高温高湿环境下肢体火器伤后肿瘤坏死因子 α(TNF α)与热休克蛋白 70 (HSP70 )含量变化的规律 ,将犬随机分为常温常湿组、热适应组、高温高湿组 ,分别在致伤前和火器伤后 1、3、4、6、8、10、14、18、2 4h检测TNF α与HSP70含量。结果发现 ,①伤道骨骼肌中TNF α较血浆中升高明显。常温常湿组 4h开始升高 ,14h达高峰 ;高温高湿组 1h升高 ,10h达到高峰 ,其峰值显著高于常温常湿组(P <0 0 5 ) ;热适应组变化基本和高温高湿组一致 ,只是升高幅度较低 (P<0 0 5 )。②淋巴细胞中HSP70含量在高温高湿组有两个高峰 ,分别为伤后 4h和 14～ 18h ;热适应组 3h达到高峰 ,持续高峰至 6h ;常温常湿组 6h达到高峰 ,且其伤道骨骼肌HSP70含量在伤后 14～ 18h也出现一个增幅不明显的高峰期。说明高温高湿环境下肢体火器伤后TNF α与HSP70含量增高 。

高温高湿环境下颅脑火器伤后兔脑HSP70变化

目的研究高温高湿环境下颅脑火器伤后兔脑热休克蛋白70(HSP70)的变化及其作用.方法采用高温高湿颅脑枪伤模型,24只新西兰大白兔随机分成常温(22.0±0.5℃、相对湿度50%)对照组、常温(22.0±0.5℃、相对温度50%)枪伤组和高温高湿(39.0±0.5℃、相对温度80%～85%)枪伤组,每组8只.采用Western blot法检测脑组织、淋巴细胞中HSP70,应用化学发光和X线片显示,凝胶图像分析仪定量分析.结果颅脑枪伤受高温高湿环境作用后,脑皮质、下丘脑和淋巴细胞的HSP70显著增高;淋巴细胞中的HSP70与大脑皮质、下丘脑的变化趋势相一致.结论脑组织和淋巴细胞中HSP70在高温高湿环境颅脑火器伤时显著增加.

南北方武警战士外周血淋巴细胞热、冷损伤时热应激蛋白70表达的差异

[目的 ]分析祖籍在宁夏、江苏、广东三个地区的武警士兵外周血淋巴细胞热、冷损伤时热应激蛋白 70(HSP70 )表达水平的差异性及其可能的意义。 [方法 ]用流式细胞仪检测淋巴细胞中HSP70表达水平。 [结果 ]不同地区比较发现 ,宁夏籍士兵基础和热损伤时 ( 4 5℃ ,0 .5h)HSP70表达水平分别为 ( 80 9.93± 5 8.3 7)、( 95 9.2 3± 90 .2 8)荧光道数 ,均比广东籍士兵分别为 ( 75 4.3 4± 60 .82 )、( 887.2 9± 72 .85 )荧光道数显著升高 (P <0 .0 5 ) ;冷损伤条件下 ( 10℃ ,1h) ,三地区士兵HSP70表达水平差异未见显著性。 [结论 ]南北方武警战士淋巴细胞基础和热损伤条件下HSP70表达水平存在差异性 ;冷损伤条件下 ,三地区士兵HSP70表达水平差异无显著性。

参元丹晚期药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌PKC及HSP70的影响

目的应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白(HSP70)表达,探讨参元丹(SYD)的晚期药理性预适应作用及其机制。方法选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只。随机分为6组,分别为对照组、再灌注组、晚期假性缺血预处理组、晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组。每组10只。分别造模,取血、心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,彩色病理图像分析心肌梗死面积。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果彩色病理图像分析,SYD能够代替心绞痛缺血、缺氧刺激,减小心肌梗死面积,具有晚期药理性预适应的心脏保护作用。晚期假性缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组无PKC的表达,提示PKC未参与晚期缺血预适应的细胞内信号转导。晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组均有HSP70大量表达,晚期药物预处理组亦有HSP70表达,提示晚期缺血预处理的心肌保护作用机制与HSP70有关,SYD具有独立的晚期药理预适应作用,晚期药物预处理组+缺血预处理组的HSP70表达有SYD作用存在;SYD的心肌保护作用机制与HSP70有关。结论SYD具有晚期药理预适应样心肌保护作用;SYD晚期预适应心肌保护作用的机制可能与HSP70的介导有关;SYD晚期预适应可能与缺血预适应协同发挥心肌保护作用。

维生素E在青年和老年大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中的作用

目的:探讨维生素E(VE)在青年和老年大鼠肾缺血/再灌注损伤(RI/RI)中的作用。方法:采用夹闭双侧肾动、静脉45min后恢复血流的方法制作RI/RI模型,测定血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)浓度,免疫组化检测肾皮质热休克蛋白70(HSP70)表达。流式细胞术检测肾皮质细胞凋亡率。结果:缺血/再灌注(I/R)后BUN、Scr含量明显升高,老年I/R组MDA含量高于青年I/R组,SOD含量低于青年IR组,HSP70、NO以及肾皮质细胞凋亡率高于control组;VE可显著降低RI/RI大鼠BUN、Scr、MDA、iNOS水平,升高NO和SOD水平,增加HSP70的表达,降低肾皮质细胞凋亡率。结论:VE可通过促进肾组织HSP70的表达,增加NO和SOD水平,提高大鼠体内清除自由基的能力,从而对青、老年大鼠肾缺血/再灌注损伤(RI/RI)起到一定的保护作用。

阿司匹林对脑缺血-再灌注损伤不同时段的细胞保护作用

目的观察阿司匹林(ASA)对大鼠脑缺血-再灌损伤(CIRl)24h和72h的细胞保护作用。方法线栓法制作局部大脑缺血2h、再灌24h或72h模型,观察60mg.kg-1阿司匹林对脑损伤面积、脑皮层正常锥体神经元密度、脑细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响。TTC染色测定脑损伤面积,HE染色观察锥体神经元密度,TUNEL法检测脑细胞凋亡,免疫组化法测定热休克蛋白70表达。结果CIRl24h,脑损伤面积、脑细胞凋亡数目及热休克蛋白70表达均增加,正常锥体神经元密度下降。阿司匹林明显缩小脑损伤面积,提高正常锥体神经元密度,抑制脑细胞凋亡,对热休克蛋白70表达无明显影响。CIRl72h时,与24h相比,脑损伤面积、脑细胞凋亡数目及热休克蛋白70表达均降低,正常锥体神经元密度无明显改变。阿司匹林明显缩小脑损伤面积,提高正常锥体神经元密度,抑制脑细胞凋亡,热休克蛋白70无阳性表达。结论阿司匹林对脑缺血-再灌损伤24h和72h,通过抑制凋亡和应激反应发挥明显的细胞保护作用。

川芎嗪预处理对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪预处理与缺血预适应对大鼠视网膜缺血再灌注损伤是否具有相似的保护作用,以及联合应用川芎嗪预处理和缺血预适应能否进一步加强视网膜对缺血的耐受性。方法选取健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠70只,采用前房灌注法建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,随机分入假手术组、缺血再灌注组、川芎嗪预处理组、5min缺血预适应组(缺血预适应组)和川芎嗪预处理+缺血预适应组(联合组),每组14只。川芎嗪预处理组大鼠在视网膜缺血再灌注损伤前24h给予川芎嗪80mg/kg腹腔内注射,每8h1次,共3次;缺血预适应组大鼠在视网膜缺血前24h给予5min缺血预适应(行前房穿刺,抬高0.9%氯化钠注射液瓶,只维持5min);联合组大鼠在视网膜缺血前24h给予5min缺血预适应,其余操作同川芎嗪预处理组;假手术组大鼠右眼行前房穿刺,不做缺血再灌注;缺血再灌注组大鼠仅做缺血再灌注处理,不予其他处理。分别于光学显微镜和透射电子显微镜下观察大鼠视网膜组织结构,检测视网膜超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和热休克蛋白(HSP)70表达水平。结果再灌注24h时,光学显微镜和透射电子显微镜下可见川芎嗪预处理组、缺血预适应组和联合组大鼠的视网膜损伤程度较缺血再灌注组轻,其中联合组大鼠视网膜损伤程度最轻。缺血再灌注组的SOD活性显著低于其他4组(P值均<0.05),假手术组的SOD活性显著高于其他4组(P值均<0.05),缺血预适应组和川芎嗪预处理组均显著低于联合组(P值均<0.05)。缺血再灌注组的MDA含量显著高于其他4组(P值均<0.05),假手术组的MDA含量显著低于其他4组(P值均<0.05),缺血预适应组和川芎嗪预处理组均显著高于联合组(P值均<0.05)。再灌注24h时,假手术组HSP70的光密度(D)值显著低于其他4组(P值均<0.05),缺血再灌注组显著低于缺血预适应组、川芎嗪预处理组和联合组(P值均<0.05),缺血预适应组和川芎嗪预处理组均显著低于联合组(P值均<0.05)。缺血预适应组与川芎嗪预处理组间SOD活性、MDA含量和HSP70的D值的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论川芎嗪预处理与缺血预适应一样,对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用,缺血预适应与川芎嗪预处理联合应用可进一步加强视网膜对缺血损伤的耐受性。

脾气虚大鼠胃平滑肌线粒体蛋白质控的研究

目的围绕平滑肌线粒体蛋白质控(MPQC)探讨脾气虚胃失通降的可能机制。方法 16只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组和脾气虚组(模型组),每组8只。炭末推进法测定胃残留率;酶联免疫吸附试验检测胃窦部平滑肌ATP含量;透射电镜观察胃窦部平滑肌细胞线粒体结构;蛋白质印迹法检测胃窦部平滑肌细胞线粒体热休克蛋白70(Hsp70)、Lon蛋白酶(LonP)、酪蛋白裂解酶(Clp)XP复合物表达水平。结果与正常组比较,模型组胃残留率增加(P <0.01),ATP水平下降(P <0.05),线粒体数量减少且有空泡化现象,Hsp70表达变化不明显,但LonP和ClpX及ClpP表达均升高(均P <0.01)。结论脾气虚胃失通降与可能胃窦部平滑肌MPQC异常所导致的线粒体产能下降有关。

不同海拔高度体育专业新生冷热应激水平差异比较

目的比较山区与平原体育专业新生对冷、热应激的热应激蛋白70(HSP70)表达水平的差异。方法选取不同生源地体育专业新生,抽取外周血液,将其分为3个不同处理组,用流式细胞仪测定淋巴细胞中HSP70表达水平。结果山区学生HSP70基准水平和热应激处理后HSP70表达水平均与平原地区学生相比有差异(P<0.05),冷应激时,两生源地学生没有差别;受到热应激和冷应激时,其HSP70表达水平均比其基准水平高,有显著性差异(P<0.05)。结论热应激时来自于山区学生与来自于平原地区学生HSP70表达水平存在差异。

脾气虚大鼠肝脏细胞线粒体蛋白质控的研究

目的:观察肝细胞线粒体结构和功能及其蛋白质控,探讨肝耐受脾气虚的可能机制。方法:16只SPF级雄性SD大鼠根据随机数字表法平均分成两组,即8只正常组(对照组)和8只脾气虚组(模型组)。透射电镜观察肝细胞线粒体结构,比色法和JC-1法分别检测肝组织ATP和肝细胞线粒体膜电位(membrane membrane potential,MMP),Western blot法检测肝细胞线粒体热休克蛋白(hot shock protein,HSP)70、Lon蛋白酶(Lon protease,LonP)以及酪蛋白裂解酶(caseinolytic protease,Clp)XP复合物等表达。结果:两组线粒体大量分布于细胞核附近,形态相似,均呈卵圆形,边缘清楚,内部致密,未见到明显异常变化。与正常组相比,模型组ATP和MMP水平均下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。与正常组相比,模型组HSP70、ClpX、ClpP表达均上升,LonP表达下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:肝耐受脾气虚的机制与肝细胞线粒体蛋白质控机制增强有关。

针灸预处理对不同时间心肌缺血再灌注损伤兔血浆内皮素、血清肌酸激酶和心肌组织热休克蛋白70表达的影响

目的:探讨针灸预处理对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)兔的心肌预防保护机制。方法:将新西兰大耳白兔随机分为假手术组、模型组、电针预处理组和艾灸预处理组,各组按预处理后造模时间再分3个亚组,每组6只。电针预处理组及艾灸预处理组造模前电针或艾灸"内关",每次20min,每日1次,共治疗5d。各组分别于预处理5d后0、24、48h行冠脉结扎法复制兔心肌缺血再灌注模型。酶联免疫法检测血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)及血浆内皮素(endothelin,ET),用免疫组化法检测心肌组织热休克蛋白70(heat shock protein,HSP 70)表达。结果:与假手术组比较,模型组各不同时间段血浆ET含量和血清CK含量明显升高(P<0.01,P<0.05),HSP 70表达虽有所增强,但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,电针预处理24、48h血浆ET含量及血清CK含量均降低(P<0.01,P<0.05),艾灸预处理48h血浆ET含量降低(P<0.01);电针预处理后48h及艾灸预处理后0、24、48hHSP 70表达较模型组显著升高(P<0.01,P<0.05),其中艾灸24h组HSP 70表达又显著高于电针24h组(P<0.01)。结论:电针与艾灸预处理对MIRI均具有预防保护作用,其作用机制可能与血浆ET含量、血清CK含量减少,及心肌组织HSP 70表达增强有关,这种预防保护效果还存在时间的差异,电针与艾灸均具有延迟保护作用。

参元丹药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌梗死面积、蛋白激酶C及热休克蛋白70的影响

目的:应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白70(HSP70)表达,探讨参元丹的药理性预适应作用及其机制。方法:选取Wistar大鼠60只,随机分为6组,分别造模、取血、取心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积。应用免疫组化试剂盒对组织切片进行处理。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果:彩色病理图像分析参元丹能够代替心绞痛的缺血、缺氧的刺激,减小心肌梗死面积,具有药理性预适应的心脏保护作用。PKC的表达情况:假性缺血预处理组的心肌组织中偶见微弱的一处表达。缺血预处理组和药物预处理+缺血预处理组的大鼠心肌组织中PKC大量的表达,药物预处理组大鼠心肌组织的PKC表达充分,提示PKC在参元丹的药理性预适应样心肌保护过程中起作用。HSP70的表达情况:对照组、再灌注组、假性缺血预处理组、缺血预处理组HSP70没有表达,药物预处理组HSP70有表达,药物预处理+缺血预处理组HSP70表达明显,提示HSP70的表达与参元丹的作用相关。结论:参元丹具有药理预适应样作用;参元丹预适应心肌保护作用的机制可能与PKC和HSP70的介导有关。

脾气虚大鼠小肠黏膜细胞线粒体蛋白质控的研究

目的围绕线粒体蛋白质控(mitochondrial protein quality control, MPQC)探讨脾气虚小肠黏膜细胞线粒体损伤的可能机制。方法 16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证(模型)组,每组8只;透射电镜观察小肠黏膜细胞线粒体超微结构;分离小肠黏膜细胞线粒体,比色法检测其ATP含量和呼吸链复合物(complex, C)I-IV活性,Western blot法检测呼吸链CV、热休克蛋白70,Lon蛋白酶,酪蛋白裂解蛋白酶XP(caseinolytic protease XP,ClpXP)表达。结果与正常组比较,模型组线粒体嵴减少,ATP水平下降(P<0.05),呼吸链CIII和IV活性及CV表达降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05),ClpX和ClpP表达均升高(均P<0.01)。结论脾气虚小肠黏膜细胞线粒体结构和功能损伤与其MPQC异常有关。

模拟微重力环境下人HaCaT细胞热损伤效应研究

目的探讨模拟微重力环境下人HaCaT细胞的热损伤效应。方法取人HaCaT细胞,采用随机数字表法分为模拟微重力热损伤(SMGTI)组、正常重力热损伤(NGTI)组和正常重力假伤(NGFI)组。NGFI组和NGTI组细胞于培养瓶中常规培养,SMGTI组细胞应用旋转细胞培养系统模拟微重力培养。将SMGTI组和NGTI组细胞置于45℃热水中10 min制作热损伤模型,NGFI组细胞置于37℃温水中10 min致假伤。伤后12 h,倒置相差电子显微镜下观察3组细胞形态。伤后2、6、12 h,取3组单细胞悬液,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量反转录PCR检测热休克蛋白70(HSP70)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)mRNA表达量,实验重复3次。伤后2、6、12 h,取3组细胞培养上清液,酶联免疫吸附测定法检测肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)浓度,实验重复3次。各组各时间点样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验、Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney U检验。结果(1)伤后12 h,NGFI组细胞形态规则,细胞间排列规则,未见细胞碎片。NGTI组细胞形态较规则,细胞碎片较少,细胞间排列较NGFI组紧密。SMGTI组不规则形态细胞较多,大小不一,可见死亡细胞碎片。(2)NGTI组伤后2 h G1期细胞百分比较NGFI组和SMGTI组明显升高(P<0.05),伤后6、12 h较NGFI组和SMGTI组明显降低(P<0.05)。NGTI组伤后2 h的G2/M期细胞百分比较SMGTI组明显降低(P<0.05),NGTI组伤后6、12 h G2/M期细胞百分比较NGFI组和SMGTI组明显升高(P<0.05)。NGTI组伤后2、6、12 h S期细胞百分比较SMGTI组明显升高(P<0.05),NGTI组伤后2、6 h S期细胞百分比较NGFI组明显降低(P<0.05)。(3)伤后2、6 h,NGTI组细胞HSP70 mRNA表达量为2.50±0.30、3.99±0.35,较NGFI组明显升高(1.14±0.15、0.82±0.27,P<0.05),较SMGTI组明显升高(1.17±0.53、1.65±0.59,P<0.05)。伤后2、6、12 h,SMGTI组细胞MMP-9 mRNA表达量较NGTI组明显升高(Z=-2.319、-2.882、-2.908,P<0.05)。伤后各时间点,NGTI组细胞caspase-3 mRNA表达量与NGFI组、SMGTI组相近(P>0.05)。(4)伤后2、6、12 h,NGTI组细胞培养上清液中HB-EGF浓度较NGFI组明显降低(P<0.01)。伤后2、6 h,SMGTI组细胞培养上清液中HB-EGF浓度较NGTI组明显升高(P<0.01)。结论模拟微重力条件下热损伤人HaCaT细胞的增殖、分泌功能以及创伤修复相关蛋白表达呈现复杂、多元的变化,这为进一步研究失重条件下损伤修复提供了理论基础。