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题名幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达及免疫学鉴定
被引量:1
- 1
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作者
韩飞
杨致邦
郭丽媛
范贵荣
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机构
重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室;神经科学研究中心;基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室
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出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期340-345,共6页
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基金
重庆市教委项目(渝教科2003-7-3)
重庆市科委攻关项目(No.CSTC,2005EA5020)
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文摘
目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价。纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用H.pylori NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织H.pylori培养;H.pylori定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织H.pylori感染的免疫保护作用。结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0mg/ml。Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16。预防组H.pylori感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P<0.05)。预防组不仅可以降低H.pylori的定植,而且能减轻H.pylori造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应。结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植。
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关键词
幽门螺杆菌
hp1188基因
表达
免疫原性
体内试验
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Keywords
Helwobacter pylori
hp1188 gene
Expression
Immunogenicity
In vivo experiment
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分类号
R392.11
[医药卫生—免疫学]
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题名幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达
被引量:2
- 2
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作者
韩飞
杨致邦
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机构
重庆三峡中心医院微免科
重庆医科大学基础医学院:病原生物学教研室
神经科学研究中心
基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室
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出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期822-825,共4页
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基金
重庆市教委项目(渝教科2003-7-3)
重庆市科委攻关项目(CSTC
2005EA5020)
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文摘
目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在H.pylori的黏附过程中的作用奠定基础。方法:以H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp1188,经DNA测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测表达,Westernblot鉴定相应抗原表位。结果:扩增的hp1188基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为30600Dalton,与预期相符;大肠杆菌裂解液中表达产物接近可溶性蛋白总量的一半,但沉淀中仍能检测到表达蛋白。目标蛋白纯化后均一性接近90%,Westernblot证实与多克隆抗体有良好结合能力。结论:成功克隆了hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
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关键词
幽门螺杆菌
hp1188基因
表达
-
Keywords
Helicobacter pylori
hp1188 gene
Expression
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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题名幽门螺杆菌重组1188蛋白的表达
被引量:1
- 3
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作者
韩飞
杨致邦
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机构
重庆三峡中心医院微生物免疫科
重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室
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出处
《重庆医学》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期218-220,223,共4页
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基金
重庆市教委项目(渝教科2003-7-3)
重庆市科委攻关项目(CSTC
2005EA5020)
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文摘
目的表达幽门螺杆菌(H.pylori)重组1188蛋白,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从H.pylori标准株NCTC 11637的基因组DNA中扩增hp1188基因片段,插入原核表达载体pQE-30,构建重组载体pQE30-hp1188,经DNA测序分析确认后,转化大肠杆菌DH5α,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Ni2+-NTA树脂纯化表达蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达形式和表达量。结果重组表达质粒pQE30-hp1188构建成功,所得序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为30.6 kD,与预期一致,蛋白表达量占全菌总蛋白的47%,上清液和沉淀中均有表达,重组蛋白纯化后纯度达90%以上。结论成功克隆hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
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关键词
螺杆菌
幽门
hp1188基因
克隆
表达
-
Keywords
helicobacter pylori
hp1188 gene
clone
expression
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分类号
R378
[医药卫生—病原生物学]
-
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题名幽门螺杆菌hp1188基因的克隆及高效表达
- 4
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作者
韩飞
杨致邦
郭丽媛
范贵荣
向瑜
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机构
重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室
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出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2009年第1期18-21,共4页
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基金
重庆市教委项目(渝教科2003-7-3)
重庆市科委攻关项目(CSTC
2005EA5020)
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文摘
目的克隆并表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用PCR法从H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA中扩增hp1188基因,克隆入原核表达载体pQE-30,构建重组原核表达质粒pQE30-hp1188,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达形式和表达量。表达蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化,Western blot鉴定其反应原性。结果所构建的重组表达质粒pQE30-hp1188序列完整,插入的基因片段全长810bp,与GenBank中的hp1188基因同源性达98%。表达的重组蛋白相对分子质量约为30600,以1.0mmol/L IPTG诱导4h,表达量最高,破菌上清和沉淀中均有表达,可溶性蛋白表达量占全菌总蛋白的47%。重组蛋白纯化后纯度可达90%,并可被H.pylori患者血清识别。结论已成功克隆了H.pylori hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
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关键词
幽门螺杆菌
hp1188基因
克隆
表达
-
Keywords
Helicobacterpylori
hp1188 gene
Cloning
Expression
-
分类号
R378
[医药卫生—病原生物学]
Q785
[生物学—分子生物学]
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