hpc2研究进展

生物个体的胚胎发育以及细胞的增殖、分化 ,都同时受到多种基因的严格调控 ,PcG基因家族就是一类重要的发育相关基因 .而hPc2基因是人PcG基因家族中的一个重要成员 ,其编码的HPC2蛋白 ,不仅可以和HPH、BMI 1以及RING1等其他人类PcG蛋白结合形成HPC/HPHPcG复合体 ,以蛋白复合体的形式参与对homeotic基因的表达抑制 ,以维持机体的正常发育以及细胞的增殖和定向分化 ,还发现它能与其他多种蛋白质相结合 ,提示HPC2可能具有多种功能 .因此 ,对hPc2的深入研究不仅有助于进一步阐明PcG基因家族的作用机理 ,扩展人们对基因表达调控的认识 ,还有助于发现PcG基因家族与其他信号转导通路的联系 ,更好地理解细胞信号网络系统 .

人宫颈癌HPC2基因的克隆及其原核和真核表达载体的构建

目的:构建人宫颈癌HPC2基因的原核及真核表达载体,进一步研究该基因在宫颈癌发生中的作用。方法:从人宫颈癌HeLa细胞中提取总RNA。用RT-PCR方法扩增出人宫颈癌HPC2全序列基因,插入pT7 b lue载体。酶切鉴定及序列分析后,构建人HPC2基因的原核及真核表达载体。结果:成功扩增出人宫颈癌HPC2基因;并构建pGEX4T1-HPC2原核表达载体及pCMV-F lag-HPC2真核表达载体。结论:人HPC2基因的原核及真核表达载体的构建为深入研究HPC2基因与宫颈癌的发生奠定了基础。

HPC2真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

目的构建在哺乳动物细胞中表达的HPC2真核表达载体,并分析其在HEK293细胞中的表达。方法从重组pcDNA3/HPC2载体上将HPC2cDNA序列亚克隆至带有flag标记的真核表达载体pcDNA3-flag上,经PCR、酶切和测序鉴定,将重组质粒pcDNA3-flag/HPC2用脂质体瞬时转染HEK293细胞,细胞裂解后,用Westernblot分析并观察HPC2在HEK293细胞中的表达情况。结果PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-flag/HPC2构建正确,并可在HEK293细胞内高效表达。结论成功构建了pcDNA3-flag/HPC2真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达,为进一步研究HPC2的功能提供了重要的实验材料。