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Ecc36菌株hrpN基因的克隆、表达及HrpN_(EccPR)蛋白的生物学活性
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作者 贾振华 刘方 +3 位作者 宋聪 黄亚丽 马宏 宋水山 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期36-41,共6页
为了揭示hrp基因表达的Harpins蛋白能够广泛地诱导植物对植物病虫害防卫反应的分子机制,通过琼脂固体平板法,发现胡萝卜软腐欧文氏菌Ecc36菌株具有很高的胞外酶分泌活性,该菌接种非寄主植物烟草,能够引起过敏反应(HR),结果表明,Ecc36携... 为了揭示hrp基因表达的Harpins蛋白能够广泛地诱导植物对植物病虫害防卫反应的分子机制,通过琼脂固体平板法,发现胡萝卜软腐欧文氏菌Ecc36菌株具有很高的胞外酶分泌活性,该菌接种非寄主植物烟草,能够引起过敏反应(HR),结果表明,Ecc36携带hrp基因。用地高辛标记的hrp N基因作探针,通过Southern杂交证明了Ecc36菌株中含有hrp N基因,命名为hrp NEcc PR基因;核苷酸序列分析表明,hrp NEcc PR基因的开放阅读框ORF为1 254 bp,编码的Harpin蛋白(命名为HrpN_(EccPR)蛋白)由417个氨基酸残基组成,其分子量为45.27 ku,等电点为5.73,与其他几种软腐欧文氏菌Harpin蛋白有较高的同源性。此外,将hrp NEcc PR基因克隆到表达载体p ET28a(+)上,将构建的hrp NEcc PR基因表达载体(p ET30a-Ecc PR)转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG(异丙基硫代-β-D半乳糖苷)诱导HrpN_(EccPR)蛋白表达,纯化后的HrpN_(EccPR)能诱导烟草发生过敏反应,表明HrpN_(EccPR)蛋白具有激发植物免疫反应的生物活性,可为进一步研究HrpN_(EccPR)蛋白诱导植物防卫反应的机制奠定基础。 展开更多
关键词 hrpnEccPR蛋白 基因克隆 hrpn基因 胡萝卜软腐欧文氏菌 过敏反应
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转HrpN的工程菌E4对水稻根际细菌群落结构的影响 被引量:2
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作者 朱红惠 姚青 赵立平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期1-5,共5页
采用单一碳源回收菌群的方法与ERIC PCR方法相结合 ,检测水稻 (OryzasativaL )根际施用转基因微生物E4(EnterobacteriacloacaeE4)后 ,其根际微生物的群落结构和多样性的变化 ,进而推测转基因微生物E4在田间施用的安全性。结果表明 :转... 采用单一碳源回收菌群的方法与ERIC PCR方法相结合 ,检测水稻 (OryzasativaL )根际施用转基因微生物E4(EnterobacteriacloacaeE4)后 ,其根际微生物的群落结构和多样性的变化 ,进而推测转基因微生物E4在田间施用的安全性。结果表明 :转基因微生物E4施用到水稻根际后 ,水稻根际的代谢指纹图谱和DNA指纹图谱都发生了改变 ,采用southernblot ting检测显示 :E4成为根际的优势菌 ,这对植物生长有利 。 展开更多
关键词 hrpn 根际细菌 群落结构
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胡萝卜软腐欧文氏菌CSSY002菌株hrpN基因的克隆、鉴定及其表达产物Harpin蛋白的活性分析 被引量:4
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作者 曹茂林 张珏 +2 位作者 汤承 CUI Yaya 吴伯骥 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期161-165,共5页
从感染软腐病的胡萝b组织中分离出胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝b亚种( Erwinia carotovora subsp, carotovora)CSSY002菌株.用该菌株接种非寄主植物烟草不能引起过敏反应.构建CSSY002菌株的基因组文库,应用α-P^32标记的hrpN基因作探针... 从感染软腐病的胡萝b组织中分离出胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝b亚种( Erwinia carotovora subsp, carotovora)CSSY002菌株.用该菌株接种非寄主植物烟草不能引起过敏反应.构建CSSY002菌株的基因组文库,应用α-P^32标记的hrpN基因作探针,通过菌落原位杂交技术从该文库中筛选到1.5~2.0 kb的hrpN-like阳性克隆,进一步将该片段亚克隆到pBluescript—II SK(+)载体中,进行核苷酸序列测定.结果表明,hrpN-like基因(即hrpNCSSY002基因)的开放阅读框(ORF)为1071bp,其核苷酸序列已在Genbank注册,登录号为bankit AY999002.hrpN-like基因的编码产物Harpin—like蛋白(即HarpinCSSY002蛋白)由356个氨基酸残基组成,分子量为36.64×10^3,等电点pI5.9.将hrpN—like基因构建到表达质粒pET-28a(+)的17强启动子下,并转化到大肠杆菌工程菌JM109(DE3)细胞中,经WTG(异丙基硫代-β-D半乳糖苷)诱导获得Harpin-like蛋白的高效表达,并通过接种烟草叶片的过敏反应检测Harpin—like蛋白的生物学活性. 展开更多
关键词 胡萝卜软腐欧文氏菌 过敏反应 克隆和亚克隆 hrpn基因 HARPIN蛋白
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EcbCSL101菌株hrpN基因的克隆、表达及HarpinEcbCSL101蛋白的生物学活性 被引量:3
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作者 林燕燕 陶宗娅 +1 位作者 崔亚亚 吴伯骥 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期888-892,共5页
胡萝卜软腐欧文氏菌甜菜亚种(Erwinia carotovora subsp.betavasculorum)EcbCSL101菌株具有很强胞外酶分泌活性,接种非寄主植物烟草引起过敏反应。Southern blotting结果表明EcbCSL101菌株中含有hrpN基因。PCR扩增含EcbCSL101完整开放... 胡萝卜软腐欧文氏菌甜菜亚种(Erwinia carotovora subsp.betavasculorum)EcbCSL101菌株具有很强胞外酶分泌活性,接种非寄主植物烟草引起过敏反应。Southern blotting结果表明EcbCSL101菌株中含有hrpN基因。PCR扩增含EcbCSL101完整开放阅读框的DNA片段并克隆到表达载体pET28a(+)中。核苷酸序列分析表明,EcbCSL101菌株的hrpN基因的ORF为1113bp,编码36.65 kD HarpinEcbCSL101蛋白(GenBank,DQ355519),与其它几种软腐欧文氏菌Harpin蛋白有较高的同源性。将含有hrpNEcbCSL101基因的重组质粒转化到大肠杆菌JM109(DE3)中进行表达,纯化后的HarpinEcbCSL101能诱导烟草发生过敏反应。 展开更多
关键词 胡萝卜软腐欧文氏菌甜菜亚种 hrpn基因 HARPIN蛋白 过敏反应
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产过敏素harpin的固氮工程菌的某些特性研究 被引量:1
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作者 朱红惠 李艳琴 +2 位作者 赵立平 邱晓颖 丘明祺 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期18-22,共5页
研究了产过敏素harpin的固氮工程菌(Enterobacter cloacae E4)在番茄、烟草叶片上的致过敏能力及该菌所携的双质粒的稳定性。试验结果表明:E4与DH5(pCPP430)致过敏能力的速度和强度基本相同。E4与308R(pCPP430)相比,烟草上它们致过敏能... 研究了产过敏素harpin的固氮工程菌(Enterobacter cloacae E4)在番茄、烟草叶片上的致过敏能力及该菌所携的双质粒的稳定性。试验结果表明:E4与DH5(pCPP430)致过敏能力的速度和强度基本相同。E4与308R(pCPP430)相比,烟草上它们致过敏能力的速度基本一致,但308R(pCPP430)致过敏能力的强度更强,在番茄叶片上,E4和308R(pCPP430)致过敏能力的速度和强度基本一样。E4所携的双质粒pCPP430和pMC73A在宿主细菌中是不稳定的,在宿主细菌连续繁殖过程中,质粒pCPP430和pMC73A随宿主细菌的繁殖而发生缺失,当连续传代48代时,双质粒的丢失率达100%,而且各含一种质粒的细胞产生的机率基本相同。 展开更多
关键词 过敏素harpin 固氮工程菌 特性 E4 hrpn基因 NIFA基因 致过敏能力 质粒稳定性 诱导抗病性
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胡萝卜软腐欧文氏菌甜菜亚种Ecb菌株表达的一种Harpin蛋白 被引量:3
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作者 赫荣乔 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期994-994,共1页
1986年,hrp基因被首次报道。由于Wei等(1992)从梨火疫病菌(Brwinia amylovora)中分离出了能激发过敏反应的HarpinEa蛋白,细菌所产生的Harpin分子受到了同行的重视。基于对Harpin蛋白的深入研究,国外已研制出了相关新型、高效、安全... 1986年,hrp基因被首次报道。由于Wei等(1992)从梨火疫病菌(Brwinia amylovora)中分离出了能激发过敏反应的HarpinEa蛋白,细菌所产生的Harpin分子受到了同行的重视。基于对Harpin蛋白的深入研究,国外已研制出了相关新型、高效、安全的生物农药。近年来,国内涉及Harpin蛋白结构与功能的研究课题组逐年增多,并在某些方面取得了较好的进展。 展开更多
关键词 胡萝卜软腐欧文氏菌甜菜亚种 hrpn基因 HARPIN蛋白 过敏反应
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