miR-17-5p靶向B7-H3对结直肠癌细胞生物学特性及免疫调节作用的影响

目的:探究miR-17-5p对B7-H3的调控以及在结直肠癌发展中的免疫调节作用。方法:收集25例人结直肠癌组织及相邻正常组织,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组化实验分析miR-17-5p、B7-H3和PD-L1的表达水平。将人结直肠癌HCT-116细胞分为4组:miR-NC组、miR-17-5p mimic组、si-NC组、si-B7-H3组。通过细胞集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术分析HCT-116细胞生长、侵袭能力和凋亡率。通过荧光素酶报告基因实验分析miR-17-5p对B7-H3的调控作用。通过ELISA实验分析细胞培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α的细胞因子水平。结果:与癌旁组织比较,结直肠癌组织中miR-17-5p表达下降,B7-H3表达升高。miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够降低HCT-116细胞集落形成数量和侵袭数量,促进HCT-116细胞凋亡,并能降低培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α水平。此外,miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够抑制HCT-116细胞PD-L1表达。结论:miR-17-5p能够靶向抑制B7-H3表达,影响结直肠癌发展中的免疫调节作用,并能抑制结直肠癌细胞的转移,促进结直肠癌细胞凋亡。

miR-17-5p、IL-6及MCP-1联合检测对卵巢子宫内膜异位症患者术后复发的预测价值

目的 分析研究血清微小RNA-17-5p(miR-17-5p)、白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)联合检测对卵巢子宫内膜异位症(OEM)患者术后复发的预测价值。方法 选取郑州大学第三附属医院2019年1月至2022年12月收治的OEM患者作为研究对象,将其命名为OEM组(n=100),另选同期在本院进行体检的健康女性为对照组(n=60)。比较两组血清miR-17-5p、IL-6及MCP-1水平;OEM组患者在入院后均进行手术与药物对症治疗,在治疗结束后对患者随访12个月。以多因素Logistic回归分析OEM患者术后复发的影响因素,并绘制ROC曲线分析血清miR-17-5p、IL-6、MCP-1水平对OEM患者术后复发的预测价值。结果 OEM组的血清miR-17-5p水平低于对照组,IL-6、MCP-1水平均高于对照组,差异有统计学意义(t=11.015、59.651、38.199,均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,囊肿直径>5 cm(OR=1.828)、ASRM分期为Ⅲ~Ⅳ期(OR=1.815)、血清miR-17-5p水平降低(OR=2.042)、IL-6水平升高(OR=2.136)及MCP-1水平升高(OR=1.966)均是OEM患者术后复发的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清miR-17-5p、IL-6、MCP-1水平及联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.816、0.781、0.745、0.933,联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论 miR-17-5p、IL-6及MCP-1联合检测对OEM患者术后复发具有一定预测价值。

口腔扁平苔藓患者血清miR-155-5p、SOCS1 mRNA水平与病损程度及Th17/Treg失衡的关系

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者血清微小核糖核酸-155-5p(miR-155-5p)、细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)mRNA水平与病损程度及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法选择OLP患者76例(观察组),其中非糜烂型28例、糜烂型48例(轻中度糜烂29例、重度糜烂19例),同期随机另选体检健康的志愿者50例(对照组),采集所有研究对象外周静脉血,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-155-5p、SOCS1 mRNA,采用流式细胞术检测Th17、Treg比例并计算Th17/Treg。采用Pearson/Spearman相关分析法分析OLP患者血清miR-155-5p水平与SOCS1 mRNA水平的关系以及二者与外周血Th17、Treg比例和Th17/Treg的关系。结果与对照组比较,观察组血清miR-155-5p水平以及外周血Th17比例和Th17/Treg升高,血清SOCS1 mRNA水平和外周血Treg比例降低(P均<0.05)。非糜烂型OLP及糜烂型OLP轻中度糜烂、重度糜烂患者血清miR-155-5p水平以及外周血Th17比例和Th17/Treg逐渐升高,血清SOCS1 mRNA水平和外周血Treg比例逐渐降低(P均<0.05)。相关性分析显示,OLP患者血清miR-155-5p水平与血清SOCS1 mRNA水平呈负相关关系(r=-0.809,P<0.01);血清miR-155-5p水平与外周血Th17比例、Th17/Treg均呈正相关关系(r/rs分别为0.819、0.820,P均<0.05),与Treg比例呈负相关关系(r=-0.735,P<0.05);血清SOCS1 mRNA水平与外周血Th17比例、Th17/Treg均呈负相关关系(r/rs分别为-0.770、-0.790,P均<0.05),与Treg比例呈正相关关系(r=0.733,P<0.05)。结论OLP患者血清miR-155-5p水平升高、血清SOCS1 mRNA水平降低,二者水平变化与病损程度加重和Th17/Treg失衡密切相关。

miR-17-5p通过调控PKD2对肺腺癌HCC827细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-17-5p在肺腺癌细胞中的表达及miR-17-5p对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其分子作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测人肺腺癌细胞系HCC827和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-17-5p的表达水平。实验分为miR-17-5p过表达组(miR-17-5p mimics组)、miR-17-5p低表达组(miR-17-5p inhibitor组)和阴性对照组(NC组)。通过CCK-8、流式细胞术、Transwell实验探讨miR-17-5p对肺腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。最后通过Targetscan数据库预测出PKD2是miR-17-5p下游潜在的靶基因,利用实时荧光定量PCR和Western-blot实验验证miR-17-5p与PKD2之间的相互作用关系。结果:miR-17-5p在HCC827细胞中高表达(P<0.001),上调miR-17-5p后显著促进了肺腺癌细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.01)及迁移(P<0.05)并抑制凋亡(P<0.01)。miR-17-5p与PKD2的3’UTR存在直接结合位点,并且过表达miR-17-5p在mRNA和蛋白水平均显著促进了PKD2的表达(P<0.01)。结论:PKD2是miR-17-5p的直接靶基因,miR-17-5p通过调控PKD2影响肺腺癌细胞的生物学行为。

特发性扩张型心肌病患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系

目的 探讨特发性扩张型心肌病(IDCM)患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系。方法 选取2019年1月至2023年1月绵阳市游仙区中医医院和四川省人民医院联合收治的IDCM患者136例(IDCM组),根据IDCM患者是否继发心力衰竭分为心衰组40例和非心衰组96例。选取同期68名无心脏病的健康志愿者设为对照组。比较IDCM组与对照组、心衰组与非心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平、N末端B型利钠肽(NT-proBNP)、超敏肌钙蛋白T(hs-TnT)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)。分析血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心功能指标的相关性。采用ROC曲线分析miR-34a-5p、miR-17-5p对IDCM继发心衰的预测价值。结果 IDCM组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IDCM组的血清NT-proBNP、hs-TnT水平高于对照组,LVEF低于对照组,LVEDD高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清NT-proBNP水平高于非心衰组,LVEF低于非心衰组,LVEDD高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与血清NT-proBNP水平呈正相关(r=0.498,r=0.306,P<0.001)。血清miR-34a-5p联合miR-17-5p预测IDCM继发心衰的灵敏度为0.875,特异度为0.802。结论 IDCM患者存在miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平上调情况,且miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心衰具有关联,对预测心衰有一定价值。

LncRNAHOTAIR靶向miR-17-5p/TXNIP对狼疮性肾炎进展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA同源盒基因转录反义RNA(LncRNAHOTAIR)靶向miR-17-5p/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对狼疮性肾炎(LN)进展的机制。方法取60只MRL/lpr雌性小鼠,随机分为模型组、LncRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组、阴性对照组和LncRNAHOTAIR敲低+miR-17-5p antagomir组,每组12只,另取12只C57BL/6J雌性小鼠作为对照组,检测各组小鼠肾功能、免疫器官指数;以HE染色实验检测各组小鼠肾组织病理形态;以酶联免疫吸附测定(ELASA)法测定各组小鼠血清抗双链DNA(dsDNA)、免疫细胞因子免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)和免疫印迹法检测各组小鼠肾组织LncRNAHOTAIR、miR-17-5p及TXNIP表达。以双荧光素酶报告基因实验检测小鼠肾小球系膜细胞中LncRNAHOTAIR对miR-17-5p、miR-17-5p对TXNIP的靶向调节。结果与对照组比较,模型组小鼠肾组织发生严重病理损伤,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达降低(P<0.05),尿蛋白浓度、血尿素氮(BUN)、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达升高(P<0.05)。与模型组比较,Ln⁃cRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组小鼠肾组织病理损伤减轻,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达升高(P<0.05),尿蛋白浓度、BUN、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达降低(P<0.05)。下调miR-17-5p可减弱敲低LncRNAHOTAIR组对模型组小鼠各指标的作用。结论敲低LncRNAHOTAIR可通过上调miR-17-5p而降低TXNIP表达,进而减少LN小鼠免疫炎性因子产生,增强其免疫功能,抑制体内炎症发生发展,最终减轻小鼠肾组织损伤并改善其肾功能。

血清miR-15b-5p、miR-17-5p水平与子宫内膜癌临床病理特征和预后的关系

目的研究血清微小RNA(miR)-15b-5p、miR-17-5p水平与子宫内膜癌(EC)临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年1月至2020年6月三二○一医院收治的82例EC患者作为研究对象,设为EC组。另选取同期进行体检的40例健康女性设为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-15b-5p、miR-17-5p水平。比较不同临床病理特征EC患者血清miR-15b-5p、miR-17-5p水平。采用Pearson分析相关性。绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用Log-Rank检验比较不同血清miR-15b-5p、miR-17-5p水平患者的预后。采用Cox回归模型分析EC患者预后的影响因素。结果EC组血清miR-15b-5p、miR-17-5p相对表达量及血清糖类抗原125(CA125)水平高于对照组(P<0.05)。EC患者血清miR-15b-5p、miR-17-5p水平与国际妇产科联盟(FIGO)分期、肿瘤分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05)。EC患者血清miR-15b-5p、miR-17-5p水平与CA125呈正相关(r=0.661、0.702,P<0.05)。miR-15b-5p高表达组、miR-15b-5p低表达组3年总体生存率分别为47.50%(19/40)、90.48%(38/42)。miR-17-5p高表达组、miR-17-5p低表达组3年总体生存率分别为46.15%(18/39)、90.70%(39/43)。miR-15b-5p高表达组累积生存率低于miR-15b-5p低表达组(P<0.05)。miR-17-5p高表达组EC累积生存率低于miR-17-5p低表达组(P<0.05)。血清miR-15b-5p、miR-17-5p、CA125、FIGO分期、淋巴结转移是影响EC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论EC患者血清miR-15b-5p、miR-17-5p水平升高,与患者不良临床病理特征有关,是评估EC患者生存预后的血清标志物。

胞磷胆碱钠联合尤瑞克林对缺血性脑卒中患者miR-17-5p、miR-29b表达的影响

目的探讨胞磷胆碱钠、尤瑞克林对缺血性脑卒中患者miR-17-5p、miR-29b表达的影响。方法以在医院进行治疗的100例缺血性脑卒中患者为观察对象,并利用随机表法分为对照组、联合组,时间为2023年2月至2024年2月,分别给予尤瑞克林单一治疗及胞磷胆碱钠、尤瑞克林联合治疗。检测两组脑血流灌注指标、炎症因子、氧化应激、miR-17-5p、miR-29b水平和临床疗效,统计并记录患者不良反应。结果两组治疗前CBF、CBV、hs-CRP、miR-29b、IL-6、TNF-α、miR-17-5p比较,差异无统计学意义(P>0.05);患者在经过治疗后,CBF、CBV、miR-29b、SOD、GSH-Px水平升高,hs-CRP、IL-6、TNF-α、miR-17-5p、MDA水平降低,且联合组CBF、CBV、miR-29b、SOD、GSH-Px水平高于对照组,hs-CRP、TNF-α、IL-6、miR-17-5p、MDA水平与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组不良反应发生率、治疗总有效率高于对照组(P<0.05),不良反应轻微,均可耐受。结论胞磷胆碱钠、尤瑞克林联合能够改善患者临床疗效,提高患者预后。

变应性鼻炎患者血清miR-149-5p、Notch1 mRNA表达与Treg/Th17平衡的关系

目的探讨变应性鼻炎(AR)患者血清miR-149-5p、Notch1 mRNA表达与调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞(Th)17平衡的关系。方法选择98例AR患者(AR组)和30例健康体检志愿者(对照组),根据疾病严重程度将AR患者分为轻度组(51例)、中重度组(47例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-149-5p、Notch1 mRNA表达,采用流式法检测外周血中Treg、Th17及其细胞因子。Pearson相关性分析血清miR-149-5p、Notch1 mRNA表达与外周血中Treg、Th17及其细胞因子以及miR-149-5p与Notch1 mRNA表达的相关性。结果AR组血清miR-149-5p表达,白细胞介素(IL)-10、转化生长因子-β(1 TGF-β1)水平以及外周血Treg细胞、Treg/Th17值低于对照组(P均<0.05),血清Notch1 mRNA表达,IL-6、IL-17、IL-22、IL-23水平以及外周血Th17细胞高于对照组(P均<0.05)。中重度组血清miR-149-5p表达,IL-10、TGF-β1水平以及外周血Treg细胞、Treg/Th17值低于轻度组(P均<0.05),血清Notch1 mRNA表达,IL-6、IL-17、IL-22、IL-23水平以及外周血Th17细胞高于轻度组(P均<0.05)。AR组血清miR-149-5p表达与外周血Treg细胞、Treg/Th17值、血清IL-10、TGF-β1水平呈正相关(r分别为0.367、0.539、0.265、0.301,P均<0.05),与血清IL-6、IL-17、IL-22、IL-23水平以及外周血Th17细胞呈负相关(r分别为-0.289、-0.213、-0.336、-0.243、-0.221,P均<0.05)。Notch1 mRNA表达与外周血Treg细胞、Treg/Th17值、血清IL-10、TGF-β1水平呈负相关(r分别为-0.346、-0.508、-0.281、-0.293,P均<0.05),与血清IL-6、IL-17、IL-22、IL-23水平以及外周血Th17细胞呈正相关(r分别为0.326、0.241、0.302、0.285、0.237,P均<0.05)。血清miR-149-5p与Notch1 mRNA表达呈负相关(r=-0.550,P<0.05)。结论AR患者血清miR-149-5p表达下调,Notch1 mRNA表达上调,且与AR患者Treg/Th17失衡有关。

LncRNA MEG3靶向调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠血-脑屏障的影响

目的探讨LncRNA MEG3通过调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生小鼠血-脑屏障的影响。方法90只C57BL小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、si-NC组、si-LncRNA MEG3组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组,每组15只。除对照组外,其余组小鼠构建HIBD模型,并采用Longa评分评估小鼠神经损伤情况;电镜观察脑组织周围血管内皮细胞超微结构;EB法测定小鼠血-脑屏障通透性;qRT-PCR法测定各组小鼠脑组织LncRNA MEG3、miR-17-5p水平;Western blotting法测定小鼠脑组织ZO-1、Occludin蛋白水平。结果与对照组相比,模型组小鼠血管内皮薄厚不均、多处呈现水肿状态;与模型组相比,si-LncRNA MEG3组小鼠血管内皮细胞逐渐连接紧密、薄厚较为均匀,水肿减少;与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组血管内皮细胞损伤加剧。与对照组相比,模型组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,si-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著降低,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论LncRNA MEG3沉默可能通过上调miR-17-5p,降低HIBD新生小鼠血-脑屏障通透性,维持血-脑屏障对大脑的保护作用,保护脑组织。

过敏性鼻炎病人外周血MALAT1、miR-17-5p的表达及临床意义

目的:探讨过敏性鼻炎病人外周血肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、微小RNA17-5p(miR-17-5p)的表达水平及其临床意义。方法:选取过敏性鼻炎病人125例作为观察组,择同期体检健康者62名作为对照组。以荧光定量聚合酶链反应检测受试者外周血MALAT1、miR-17-5p表达水平,绘制ROC曲线评估外周血MALAT1、miR-17-5p对过敏性鼻炎发生的诊断价值,Spearman相关性分析外周血MALAT1、miR-17-5p与病人疾病严重程度的相关性,再以多因素logistic回归分析影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素。结果:观察组外周血MALAT1 mRNA水平低于对照组,miR-17-5p水平高于对照组(P<0.05);ROC曲线分析显示,MALAT1 mRNA曲线下面积为0.812,miR-17-5p曲线下面积为0.845,MALAT1 mRNA灵敏性优于miR-17-5p,特异性低于miR-17-5p,两者联合检测诊断价值更高;中重度过敏性鼻炎病人血清MALAT1 mRNA水平明显低于轻度病人(P<0.05),miR-17-5p水平明显高于轻度病人(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血MALAT1 mRNA水平与过敏性鼻炎疾病严重程度呈负相关关系(r=-0.779,P<0.01),miR-17-5p水平与疾病严重程度呈正相关关系(r=0.774,P<0.01);多因素logistic回归分析结果显示,低水平MALAT1 mRNA、高水平miR-17-5p为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素(P<0.05)。结论:过敏性鼻炎病人外周血中MALAT1 mRNA呈低表达,miR-17-5p呈高表达,与疾病严重程度关系密切,为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素,可能作为诊断过敏性鼻炎及评估疾病严重程度的潜在指标。

血清miR-208a、miR-17-5p表达与急性心肌梗死患者左心室重构和预后的关系

目的 分析血清微小RNA-208a(miR-208a)、miR-17-5p表达与急性心肌梗死(AMI)患者左心室重构(LVR)和预后的关系。方法 选取2021年1—8月首都医科大学附属北京安贞医院心脏内科冠心病中心收治AMI患者133例,根据随访6个月时左心室收缩末期容积(LVESV)分为LVR组51例和非LVR组82例,并根据6个月时是否发生主要不良心血管事件分为预后不良组44例和预后良好组89例。采用qPCR检测患者血清miR-208a、miR-17-5p的表达水平,超声心动图检查左心室舒张末期内径(LVEDD)、舒张末期室间隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)、左心室质量指数(LVMI)、LVESV。Spearman相关性分析LVR组患者血清miR-208a、miR-17-5p表达与确诊时LVESV的相关性,多因素Logistic回归分析AMI患者预后不良的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-208a、miR-17-5p表达对AMI患者预后不良的预测价值。结果 LVR组血清miR-208a、miR-17-5p表达水平高于非LVR组(t/Z=7.432、10.964,P均<0.001);LVR组LVEDD、IVST、LVPWT、LVMI、LVESV高于非LVR组(t/Z=11.774、8.611、6.416、9.676、5.336,P均<0.001)。预后不良组血清miR-208a、miR-17-5p表达高于预后良好组(t/Z=5.270、5.376,P均<0.001)。Spearman相关性分析显示,LVR组血清miR-208a、miR-17-5p表达与确诊时LVESV呈正相关(r_(s)=0.868、0.735,P均<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,年龄大、Killip分级≥Ⅲ级和血清miR-208a、miR-17-5p升高为AMI患者预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=1.058(1.005~1.114)、4.984(1.564~15.880)、1.051(1.007~1.097)、1.098(1.027~1.175)],LVEF升高为其独立保护因素[OR(95%CI)=0.932(0.892~0.975)]。ROC曲线分析显示,血清miR-208a、miR-17-5p及二者联合预测AMI患者预后不良的曲线下面积分别为0.781、0.795、0.866,二者联合预测的价值高于单项指标(Z/P=2.102/0.025、2.511/0.014)。结论 AMI患者血清miR-208a、miR-17-5p表达升高与LVR和预后不良相关,可作为AMI患者预后不良的辅助预测指标。

MS相关的hsa-miR-17-5p靶基因预测和关键基因筛选

目的对人类miR-17-5p(hsa-miR-17-5p)靶基因预测和富集分析,并结合基因的差异表达寻找多发性硬化症的生物学标志物。方法利用生物信息学方法,预测hsa-miR-17-5p靶基因,对预测结果进行基因本体数据库(Gene Ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome,KEGG)富集分析,并构建蛋白质互作网络图(Protein-Protein Interaction Networks,PPI)。再结合多发性硬化症患者和健康对照组的差异表达基因,进一步筛选出hsa-miR-17-5p对多发性硬化症影响的关键基因。最后,利用RNA22 v2验证关键基因是否存在结合位点。结果不同网站预测后,取交集获取376个公共靶基因,这些靶基因有复杂的相互作用,主要存在于胞浆与核质,参与多种转录调控和蛋白质磷酸化等生物学过程,同时也与癌症、病毒感染和免疫系统等信号通路相关;靶基因和多发性硬化症患者的相对下调基因有三个共同基因PDLIM5、KCNB1、BTBD7。进一步验证上述关键基因结合位点,发现仅有PDLIM5存在P值小于0.05的结合位点。结论hsa-miR-17-5p靶基因参与多种生物学过程,而且PDLIM5、KCNB1、BTBD7基因很可能是hsa-miR-17-5p对多发性硬化症产生影响的重要桥梁,其中PDLIM5尤为重要。

lncRNA HOTAIR/miR-17-5p/Smad7通路调控激素性股骨头坏死的机制研究

目的研究lncRNA HOTAIR对激素性股骨头坏死(steroidinduced necrosis of femoral head,SONFH)的影响。方法收集激素性股骨头坏死患者骨髓组织25例,正常对照组为25例股骨颈骨折患者。培养人骨髓间充质干细胞(hBMSCs),用地塞米松(DEX)培养,CCK-8测定细胞增殖。用HOTAIR过表达载体或miR-17-5p模拟物转染细胞。hBMSCs分为hBMSCs组、hBMSCs+成骨诱导组、hBMSCs+成骨诱导+空载组、hBMSCs+成骨诱导+过表达HOTAIR组、hBMSCs+成脂诱导组、hBMSCs+成脂诱导+空载组和hBMSCs+成脂诱导+过表达HOTAIR组。RT-qPCR测HOTAIR、miR-17-5p、Smad7、RUNX2、RRAR-γ的mRNA表达。Western blot法检测Smad7蛋白的表达。双荧光素酶报告基因测法确认HOTAIR和miR-17-5p间的结合。碱性磷酸酶(ALP)活力检测试剂盒与茜素红染色评估细胞的成骨分化;油红O染色评估细胞的成脂分化。结果HOTAIR和Smad7在激素性股骨头坏死组织中表达上调,而miR-17-5p表达下调(P均<0.05)。双荧光素酶报告实验证实hBMSCs中HOTAIR的直接结合靶点是miR-17-5p,而Smad7是miR-17-5p的靶基因。HOTAIR的过表达诱导了hBMSCs的成脂分化和RRAR-γ表达,并抑制了成骨分化和RUNX2表达(P均<0.05)。结论过表达lncRNA HOTAIR直接靶向miR-17-5p并抑制hBMSCs的成骨分化,还能够促进成脂分化和Smad7的表达。

骨髓增生异常综合征患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达变化及其与临床特征和预后的关系

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达变化及其与临床特征和预后的关系。方法选择MDS患者76例(MDS组)、健康志愿者32例(对照组),采集所有研究对象空腹外周静脉血,离心留取血清,采用RT-qPCR法检测血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达。比较两组血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达;分析血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达与MDS患者临床特征和预后的关系。结果MDS组血清miR-125b-5p相对表达量低于对照组,血清miR-17-5p相对表达量高于对照组(P均<0.05)。IPSS-R分级高危+极高危MDS患者血清miR-125b-5p表达低于IPSS-R分级低危+中危MDS患者,血清miR-17-5p表达高于IPSS-R分级低危+中危MDS患者(P均<0.05)。以血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达的均数为临界值,将MDS患者分为血清miR-125b-5p低表达者与高表达者、血清miR-17-5p低表达者与高表达者。血清miR-125b-5p低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均低于血清miR-125b-5p高表达者,血清miR-17-5p低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均高于血清miR-17-5p高表达者(P均<0.05)。结论MDS患者血清miR-125b-5p表达下调、血清miR-17-5p表达上调,二者表达变化与IPSS-R分级高危、极高危以及预后不良有关。

miR-17-5p调控LIMK1/cofilin1通路对子宫内膜异位症发生发展的影响

目的:探究微小核糖核酸-17-5p(miR-17-5p)调控LIM激酶1(LIMK1)/丝切蛋白1(cofilin1)通路对子宫内膜异位症发生发展的影响。方法:选取行子宫切除术的30例子宫内膜异位症患者作为子宫内膜异位症在位内膜组,另选取30例非雌激素依赖性疾病患者作为正常子宫内膜组。对两组患者的在位内膜细胞中LIMK1、cofilin1表达量采用实时荧光定量PCR法检测,对所获取的在位内膜细胞进行转染,Transwell法检测细胞的侵袭能力;CCK-8法检测细胞的增殖能力;ELISA法检测子宫内膜细胞中细胞因子ICAM-1、VEGF、MMP-9表达。结果:在位内膜组患者的miR-17-5p表达水平低于正常子宫内膜组(P<0.05);在位内膜组的LIMK1蛋白及其mRNA、cofilin1蛋白及其mRNA相对表达水平均高于正常子宫内膜组(P<0.05);在位内膜组未转染组(EC组)及转染阴性对照(EC-C组)情况下细胞侵袭能力显著高于正常子宫内膜组(NC组),但转染情况下(EC-miR-17-5p-RNAi组)细胞侵袭能力显著低于正常子宫内膜组(NC-miR-17-5p-cDNA组),两组患者细胞转染阴性对照(EC-C组、NC-C组)与未转染状态(EC组、NC组)差异无统计学意义(P>0.05);转染情况在位内膜组患者(EC-miR-17-5p-RNAi组)细胞侵袭力低于未转染状态(EC组),但正常子宫内膜组(NC-miR-17-5p-cDNA组)高于未转染组(NC组,P>0.05)。EC组细胞增殖能力在24 h、48 h、72 h、96 h均高于NC组细胞(P<0.05);EC-miR-17-5p-RNAi组各时间段细胞增殖能力与EC组相比较均升高(P<0.05);EC组与EC-C组在各时间段的细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);NC-miR-17-5p-cDNA组在各时间段的增殖能力均低于NC组(P<0.05);NC-C组各时间段的细胞增殖能力与NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。基础状态下,EC组ICAM-1、MMP-9和VEGF水平高于NC组,EC-miR-17-5p-RNAi组与EC组比较明显升高(P<0.05);EC组与EC-C组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);NC组ICAM-1、MMP-9和VEGF水平明显高于NC-miR-17-5p-cDNA组(P<0.05),但与NC-C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-17-5p在内异症细胞中表达水平下调,通过负向调控LIMK1/cofilin1通路抑制细胞增殖、侵袭,在内异症发生及进展过程中发挥基因调节功能。

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的:观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法:将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后,模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水,miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分,测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量,检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率,caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果:miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组,miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组;miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白表达明显低于模型组,Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达高于模型组;miR-17-5p inhibitor组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax、p-ERK1/2蛋白表达显著高于其他2组,Bcl-2蛋白表达低于其他2组。结论:miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的脑损伤具有一定的保护作用,miR-17-5p可抑制ERK1/2信号通路激活。

LncRNA BLACAT1调节miR-17-5p/DDX5轴对子宫内膜癌细胞恶性进展的影响

目的探讨LncRNA BLACAT1调节miR-17-5p/DDX5轴对子宫内膜癌(EC)细胞恶性进展的影响。方法将EC细胞系Ishikawa细胞分为:NC组、si-NC组、si-BLACAT1组、si-BLACAT1+miR-NC、si-BLACAT1+miR-17-5p inhibitor组。qRT-PCR检测BLACAT1、miR-17-5p、DDX5表达水平,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测迁移和侵袭,Western blot检测DDX5、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,荧光素酶实验检测BLACAT1、DDX5与miR-17-5p的靶向关系。结果BLACAT1、DDX5在EC细胞中表达水平升高,miR-17-5p表达降低(P<0.05),选择Ishikawa细胞进行实验。与NC组、si-NC组相比,si-BLACAT1组细胞BLACAT1、DDX5 mRNA、OD450值(24 h、48 h、72 h)、迁移和侵袭数目、Bcl-2表达降低,miR-17-5p、凋亡率、Bax表达升高(P<0.05);抑制miR-17-5p减弱了干扰BLACAT1对Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭的抑制,降低细胞凋亡率(P<0.05);BLACAT1靶向负调控miR-17-5p表达,miR-17-5p靶向负调控DDX5表达。结论干扰BLACAT1可通过调节miR-17-5p/DDX5轴抑制EC细胞恶性进展。

Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p在高龄妊娠期糖尿病患者中的表达及相关性研究

目的探析网膜素-1(Omentin-1)、分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP-5)、微小RNA(miR)-17-5p在高龄妊娠期糖尿病(GDM)患者中的表达及相关性。方法选择该院2021年3月至2022年3月就诊的40例高龄GDM患者作为观察组,选择同期接受产检的40例健康高龄孕妇作为对照组。所有研究对象采用酶联免疫吸附试验检测Omentin-1、SFRP5,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p。对比两组孕妇临床特征,包括一般资料、口服葡萄糖耐量试验2 h(OGTT 2 h)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p表达;采用Logistic回归模型分析GDM独立影响因素;采用Spearman分析Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p与GDM患者HOMA-IR的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p单项及联合诊断GDM效能。结果两组患者的年龄、体质量指数(BMI)、OGTT 2 h、HOMA-IR、Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,高BMI、高HOMA-IR、低表达Omentin-1、低表达SFRP5、高表达miR-17-5p为GDM的独立危险因素(P<0.05),GDM患者HOMA-IR与血清Omentin-1、SFRP5呈负相关(r=-0.498、-0.643,P<0.05)。而与miR-17-5p呈正相关(r=0.731,P<0.05)。ROC曲线结果显示,Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p联合的曲线下面积(AUC)为0.867(95%CI:0.753~0.942),且高于单项检测指标(P<0.05);联合检测的灵敏度、特异度分别为87.43%、77.69%,具有较高诊断价值。结论Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p为高龄GDM的独立影响因素,血清Omentin-1、SFRP5与HOMA-IR呈负相关,miR-17-5p与HOMA-IR呈正相关;且Omentin-1、SFRP5、miR-17-5p联合诊断效能优于单项指标诊断。

EBV-miR-BART17-5p对鼻咽癌细胞增殖及迁移功能的调控及其作用机制

目的 探讨EB病毒(epstein-barr virus,EBV)编码的EBV-miR-BART17-5p对鼻咽癌细胞增殖及迁移的调控及其机制。方法 将慢病毒Vector control和EBV-miR-BART17-5p mimic分别感染至HK1-EBV细胞,记为Vector control组和Mimic组,采用RT-qPCR验证慢病毒感染效果;EdU和CCK-8实验分别检测细胞的增殖能力;平板克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测EBV-miR-BART17-5p靶基因PTEN的蛋白表达水平。结果 与Vector control组比较,Mimic组HK1-EBV细胞中EBV-miR-BART17-5p表达量显著升高(P<0.001),细胞增殖、集落形成和迁移能力均明显增强(均P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.001)。结论EBV-miR-BART17-5p能调控鼻咽癌细胞HK1-EBV增殖和迁移,其作用机制可能与EBV-miR-BART17-5p反向调控肿瘤抑制因子PTEN表达有关。