hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌中的表达

目的探讨食管鳞癌及正常组织微小RNA(miRNA)分子表达谱的差异,寻找并验证具有差异表达的miRNA。方法随机选3例首次诊治食管鳞癌患者的手术切除标本,取癌组织及正常粘膜。采用荧光探针杂交芯片扫描技术,获得食管鳞癌miRNA表达谱,并对表达谱的可靠性进行荧光实时定量RT-PCR验证。另取15例首次诊治食管鳞癌患者手术切除标本的癌组织及正常粘膜,对其中具有表达差异的hsa-miR-126和hsa-miR-518b进行进一步验证。结果得到了食管鳞癌及正常组织的MicroRNA表达谱,分析得到表达变化且具有统计学意义(单侧t检验,P<0.05)的miRNA11个,其中上调1个,下调10个。在另外15对验证样本中,hsa-miR-126上调10例(配对t检验,P<0.05),hsa-miR-518b下调12例(配对t检验,P<0.05)。结论 hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌组织和正常组织中存在差异表达,hsa-miR-126在食管癌组织中上调,hsa-miR-518b下调。

hsa-miR-518b反义寡核苷酸对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨hsa-miR-518b反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对胃癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在胃癌中的作用机制。方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的hsa-miR-518b ASODN,将其转染于胃癌细胞株SGC7901。用Realtime RT-PCR分析hsa-miR-518b在胃癌细胞转染前后的表达情况,MTT检测胃癌细胞转染后的生长情况,流式细胞仪分析细胞周期。结果:转染hsa-miR-518b ASODN后,胃癌细胞hsa-miR-518b表达显著降低(P=0.000),生长受到抑制(P=0.000),大量胃癌细胞阻滞于G1期(P=0.000)。结论:hsa-miR-518b ASODN能使胃癌细胞阻滞于G1期,抑制胃癌细胞的生长。提示hsa-miR-518b可能通过促进细胞周期G1/S期转换而促进胃癌细胞生长。

miR-518b靶向调控LAPTM4B在稽留流产发病中的作用

目的:探讨miR-518b在稽留流产发病中的作用。方法:①利用双荧光素酶报告实验验证miR-518b与LAPTM4B的靶向关系。②HTR8/SVneo细胞分别转染miR-518b mimic及其阴性对照(NC)质粒,24 h后实时荧光定量PCR法及Western blot法检测细胞中miR-518b、LAPTM4B mRNA及蛋白的表达。③HTR8/SVneo细胞分别转染miR-518b mimic NC、miR-518b mimic和miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒24 h后,与人脐静脉血管内皮细胞混合,行成管实验。④收集22例稽留流产患者及24例同期正常妊娠并自愿行人工流产者(对照组)的绒毛组织,实时荧光定量PCR法检测miR-518b、LAPTM4B mRNA,免疫组化法检测微血管密度(MVD),Western blot法检测LAPTM4B蛋白的表达。结果:①双荧光素酶报告实验证实miR-518b与LAPTM4B存在靶向关系。②与miR-518b mimic NC组比较,miR-518b mimic组细胞中LAPTM4B蛋白和mRNA表达水平均下降(P<0.05)。③miR-518b mimic NC组、miR-518b mimic组及miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒组新生小管数分别为(31.00±1.00)、(16.33±2.08)、(32.67±2.08),3组比较,差异有统计学意义(P<0.001);miR-518b mimic组小于NC组和miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒组(P<0.05)。④稽留流产组绒毛组织中miR-518b表达高于对照组,LAPTM4B mRNA、蛋白表达水平及MVD均低于对照组(P<0.05)。稽留流产组miR-518b与LAPTM4B mRNA的表达、MVD呈负相关(r=-0.546,-0.439,P<0.001);LAPTM4B蛋白表达与MVD呈正相关(r=0.686,P<0.001)。结论:miR-518b可能通过调控LAPTM4B的表达,抑制绒毛滋养层细胞血管成管能力,参与稽留流产的发病。

lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进骨关节炎大鼠软骨细胞的炎症反应和细胞凋亡

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HOXD反义生长相关长链非编码RNA(HOXD antisense growth-associated long non-coding RNA,lncHAGLR)对大鼠膝关节退行性软骨细胞C518细胞的炎症反应和凋亡的作用与潜在机制。方法采用StarBase和荧光素酶报告基因法预测和确认ln-cHAGLR和微小RNA(microRNA,miR)-26a之间的相互作用。为研究lncHAGLR对miR-26a表达的调控作用,将C518细胞分为沉默lncHAGLR的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)载体质粒(si-ln-cHAGLR)组、siRNA的阴性对照(negative control of siRNA,si-NC)组、miR-26a抑制剂阴性对照(nega-tive control of miR-26a inhibitor,inhibitor-NC)组、miR-26a的抑制剂(miR-26a-inhibitor)组。此外,为研究lncHAGLR是否通过调控miR-26a对C518细胞的炎症和凋亡具有调控作用,将C518细胞分为5组:Control组、白细胞介素(interleukin,IL)-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-lncHAGLR组和IL-1β+si-lncHA-GLR+miR-26a-inhibitor组。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析lncHAGLR和miR-26a的水平。采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydro-genase,LDH)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测C518细胞的增殖、细胞毒性和凋亡情况。蛋白质印迹检测切割模式的半胱天冬酶3(CLEAVED-CASPASE3)、核因子κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)、磷酸化的NF-κB P65(phosphorylated NF-κB P65,P-NF-κB P65)的表达。ELISA法检测白细胞介素(interleukin,IL)-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的释放。结果lncHAGLR直接靶向miR-26a。在IL-1β组,lncHAGLR水平明显较Control组增高,miR-26a水平较Control组降低(P均<0.05)。此外,IL-1β+si-lncHAGLR组减轻了IL-1β诱导的C518细胞的炎症并抑制了凋亡,而且细胞的活力增加,LDH释放减少,CLEAVED-CASPASE3的表达被抑制,TNF-α和IL-6的分泌减少,且p-NF-κB P65表达减少(P均<0.05)。IL-1β+si-lncHAGLR+miR-26a-inhibitor组逆转了IL-1β+si-lncHAGLR组的结果(P均<0.05)。结论lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进C518细胞的炎症反应和细胞凋亡,表明lncHAGLR可能是治疗骨关节炎的一个有价值的靶点。

miR-518b在稽留流产患者绒毛组织及血清中的表达及其意义

目的:探讨稽留流产患者绒毛组织及血清中miR-518b的表达及其意义。方法:应用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测30例稽留流产患者(观察组)及30例早孕人工流产患者(对照组)绒毛组织及血清中miR-518的表达量。结果:观察组患者绒毛组织及血清中miR-518b的表达量均明显高于对照组(P<0.01)。结论:miR-518b在稽留流产患者绒毛及血清中的表达升高,可能与稽留流产的发病相关。

Hsa-miR-125b在人胃癌耐药细胞株中的表达及其靶基因的功能分析

研究表明,Hsa-miR-125b在人胃癌耐氟尿嘧啶细胞株BGC823/Fu中表达下降。为进一步探讨hsa-miR-125b在获得性耐药中所起的作用,文章应用miRbase、靶基因预测软件、Gene Ontology数据库及KEGG数据库对hsa-miR-125b的序列特征、进化保守性、靶基因及功能以及靶基因所参与的信号通路等进行了深入的生物信息学分析。结果显示:has-miR-125b在多个物种之间具有高度序列保守性;通过软件预测获得hsa-miR-125b靶基因79个,其分子功能包括转录调节、蛋白质结合和肽酶类活性等(P<0.001),其所参与的生物学过程主要有细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的正性或负性调控以及细胞因子刺激反应性、药物反应性、DNA损伤反应性等(P<0.001),调控包括MAPK、Wnt、p53等多条信号转导通路(P<0.01)。上述结果表明hsa-miR-125b可能参与调控多个生物学过程和信号转导通路,而其中细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期等生物学过程以及MAPK、Wnt、p53等信号通路已被证实与肿瘤耐药的发生有关。因此,hsa-miR-125b可能通过调控上述环节中的靶基因来影响肿瘤细胞对药物的敏感性,从而为hsa-miR-125b在肿瘤耐药中的作用机制提供新的研究线索。

生物信息学预测hsa-miR-26b的作用靶标及功能

目的通过生物信息学预测hsa-miR-26b的靶基因,进一步分析其潜在功能,为其后续功能研究提供理论依据。方法用pubmed、谷歌(google)等工具检索hsa-miR-26b相关文献;用miRbase、NCBI、UCSC Browser和Promoter scan等在线工具分析hsa-miR-26b序列及所在基因组特征;用TargetScan、PicTar及miRanda预测hsa-miR-26b的靶基因;通过功能富集分析(GOanalysis)和信号转导通路富集分析(Pathway analysis),预测所得靶基因和已证实的靶标基因。结果研究证实hsa-miR-26b与神经发育、心肌肥大及各种肿瘤发生、发展有关;hsa-miR-26b位于CTDSP1基因内含子内,但可能具有与该基因不同的启动子;3种方法预测结果取交集获得可能靶标基因33个,合并已知靶标基因14个;hsa-miR-26b靶基因主要参与钠离子转运、溶酶体组织和生物形成、抑制细胞增殖、转运等生物学过程,涉及Notch、氨基糖类代谢、ABC转运子、VEGF及TGF-β等信号转导通路。结论 hsa-miR-26b的功能较为广泛,与发育、代谢等密切相关。

miR-517a,miR-518b,miR-519a在出生体重异常儿胎盘及母体血清中表达的研究

目的:检测出生体重异常儿胎盘及母体血清中microRNA517a(miR-517a)、microRNA518b(miR-518b)、microRNA519a(miR-519a)的表达,探讨这三种微RNAs(miR-NAs)对出生体重的影响。方法:选择无妊娠并发症和合并症的足月分娩产妇,按胎儿出生体重分为:正常出生体重儿组(对照组,15例)、巨大儿组(20例)及小样儿组(15例)。分别收集3组的新鲜胎盘组织及母体血清,用实时荧光定量PCR方法检测3组miRNAs的变化。结果:miR-517a在巨大儿组(3.28±1.04)与小样儿组(3.63±1.45)胎盘中的表达均显著高于对照组(0.29±0.91)(P均<0.05);miR-519a在巨大儿组(4.62±0.44)与小样儿组(5.99±1.06)胎盘中的表达亦均显著高于对照组(2.65±0.57)(P均<0.05);而miR-518b在3组胎盘中的表达无统计学差异(P>0.05)。miR-517a在巨大儿组(2.76±0.44)与小样儿组(3.69±0.79)母体血清中的表达均显著高于对照组(0.14±1.81)(P均<0.05);miR-519a在巨大儿组(1.93±0.76)与小样儿组(0.47±1.17)母体血清中的表达均显著低于对照组(4.56±0.74)(P均<0.05);而miR-518b在三组母体血清中的表达无统计学差异(P>0.05)。结论:miR-517a、miR-519a参与了异常出生体重的调节。

hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证

目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。

胶质瘤组织中hsa-miR-106b的表达与功能的初步研究

目的:探讨hsa-miR-106b在胶质瘤组织中的表达情况及可能起的作用。方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)方法检测12例脑外伤内减压切除正常脑组织患者和47例不同级别脑胶质瘤患者组织中hsa-miR-106b的表达。结果:胶质瘤组织和正常脑组织中hsa-miR-106b基因扩增的△Ct值分别为2.96±1.08和7.21±1.96,正常脑组织中hsa-miR-106b表达明显高于胶质瘤组织(P=0.013);胶质瘤组织的恶性程度越高,hsa-miR-106b表达越高(P=0.003)。结论:hsa-miR-106b高表达在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。

hsa-miR-10b在3株宫颈癌细胞系中的表达及靶基因预测

目的分析3株宫颈癌细胞系中hsa-miR-10b表达水平,并预测hsa-miR-10b的靶基因。方法用PCR技术检测3株宫颈癌细胞系中hsa-miR-10b表达水平;Pub Med检索hsa-miR-10b相关文献;miRbase和NCBI分析其序列保守性及所在基因组特征;TargetScan、PicTar及miRanda数据库预测其靶基因,并结合已证实的靶基因对其进行功能和信号通路富集分析。结果与C-33A相比,HeLa和CaSki中hsa-miR-10b表达水平显著下调(P<0.01);hsa-miR-10b与多种肿瘤的发生发展有关;hsa-miR-10b定位于人染色体2q31.1,在各物种之间具有高度保守性;其靶基因主要参与转录、基因表达调控和细胞增殖等生物学过程(P<0.05),涉及肿瘤、细胞周期和ARF等信号通路(P<0.05)。结论 hsa-miR-10b功能广泛,与宫颈癌的发生发展密切相关,靶基因的预测为后续研究提供依据。

Association between hsa-miR-34b/c rs4938723 T>C promoter polymorphism and cancer risk: a meta-analysis based on 6,036 cases and 6,204 controls

Objective： Emerging evidence shows that microRNAs （miRNAs） function as tumor suppressors or oncogenes in human carcinogenesis. A single nucleotide polymorphism （SNP） located in the pri-miRNA promoter may affect the processing and expression of mature miRNA. However, previous studies showed conflicting results regarding the association of hsa-miR-34b/c rs4938723 T 〉 C promoter polymorphism with cancer. Therefore, we conducted a meta-analysis to determine the association of polymorphism with cancer risk. Methods： A computerized search of PubMed, Web of Science, and Chinese National Knowledge Infrastructure （CNKI） for publications on hsa-miR-34b/c rs4938723 T 〉 C promoter polymorphism and cancer risk was performed and the genotype data were analyzed in a meta-analysis. Odds ratios （ORs） with 95% confidence intervals （CIs） were estimated to assess the association. Test of heterogeneity, cumulative meta-analysis, sensitivity analysis and assessment of bias were performed in our meta-analysis by STATA software 12.0. Results： There was no significant association between hsa-miR-34b/c rs4938723 polymorphism and overall cancer risk in the comparison models. Moreover, subgroup analysis revealed that the variant CT （OR = 1.19, 95% CI： 1.03-1.37） and CC/CT （OR =1.18, 95% CI： 1.03-2.35） genotypes were associated with an increased risk of hepatocellular carcinoma （HCC） compared with wild-type TT genotype. However, a decreased risk of colorectal cancer （CRC） was found in the genetic model of CCFFF （OR =0.66, 95% CI： 0.47-0.92） and CC/CT-TT （OR =0.67, 95% CI： 0.49-0.93）. Conclusions： The results suggest that hsa-miR-34b/c rs4938723 polymorphism may play an opposite role in different types of cancer based on current studies, which is the main origin of heterogeneity in this metaanalysis. Further large-scale studies and functional studies between this polymorphism and cancer risk are warranted.

Hsa-miR-106b-25簇的靶基因预测及生物信息学分析

目的 Hsa-miR-106b-25簇涉及肿瘤的多种生物学过程,文中对hsa-miR-106b-25簇:miR-106b、miR-93、miR-25进行靶基因的预测及功能分析,为进一步研究这3个miRNAs的功能及他们之间的相互作用调节机制提供线索。方法应用miRBase数据库获取miR-106b、miR-93及miR-25的序列信息,选择Target Scan、Pic Tar、miRanda 3种在线靶基因预测软件分别预测它们的靶基因,取交集并结合miRTarbase数据库中3种及3种以上实验验证过的靶基因作为进一步生物信息学分析的基因集合;分别对基因集合进行生物过程的功能富集分析,pathway分析及蛋白互作分析。结果 hsa-miR-106b-25簇的预测靶基因富集于多个生物学过程及功能,其生物过程主要集中于:大分子新陈代谢调节、代谢过程的调节、细胞周期;KEGG通路主要富集于:胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胆囊癌等肿瘤相关通路,蛋白互作显示基因簇中3个成员miRNA的预测靶基因编码蛋白质间存在复杂的相互作用,靶基因KAT2B、PTEN、TP53、CDH1、MDM2、E2F1、RB1、SMAD7编码蛋白在互作网络中具有核心地位。结论 miR-106b-25簇中的3个成员通过调控细胞周期的转换作用于肿瘤通路过程进而调节下游靶蛋白参与肿瘤的发生过程。

lncRNA TMEM161B-AS1通过调控hsa-miR-135b对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)TMEM161B-AS1对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法以含30 mmol/L葡萄糖的培养基体外培养人肾小管细胞HK-2,分别转染TMEM161B-AS1过表达载体和阴性对照载体,设为TMEM161B-AS1组和对照组。qRT-PCR检测各组细胞TMEM161B-AS1和hsa-miR-135b表达。CCK-8法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和细胞凋亡情况。通过生物信息学软件LNCediting预测TMEM161B-AS1的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测不同细胞的相对荧光素酶活性。Western blot检测细胞上皮-间质转化表型蛋白的表达情况。结果与对照组比较,TMEM161B-AS1组细胞TMEM161B-AS1表达水平明显升高,hsa-miR-135b表达水平及细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,TMEM161B-AS1组细胞培养2~5 d增殖能力明显升高(P<0.05)。与转染has-miR-NC比较,转染hsa-miR-135b能显著降低HK-2细胞TMEM161B-AS1 WT的荧光素酶活性(P<0.01)。与对照组比较,TMEM161B-AS1组上皮细胞表型蛋白ZO-1、E-Cadherin、Claudin-1表达明显增加,间质细胞表型蛋白α-SMA、Fibronectin表达明显降低(P<0.05)。结论lncRNA TMEM161B-AS1通过下调hsa-miR-135b表达,促进高糖诱导肾小管上皮细胞的增殖,抑制其凋亡及上皮-间质转化。

hsa-miR-26b靶向ERα调控人卵巢癌HO-8910细胞周期的作用机制

目的探讨hsa-miR-26b靶向ERα基因调控人卵巢癌HO-8910细胞周期的分子机制.方法HO-8910细胞分为3组:空白对照组(control组)、miR-26b激动剂组(miR-26b mimic组)和miR-26b激动剂阴性对照组(mimic NC组),Real-time PCR检测miR-26b转染效率,细胞增殖试验(CCK8)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期,Real-time PCR和Western Blot检测ERα mRNA和蛋白的表达水平,双荧光素酶报告基因检测miR-26b与ERα 3′UTR的相互作用.结果CCK8显示miR-26b可抑制HO-8910细胞增殖活性,流式细胞术显示细胞增殖活性抑制与G1期阻滞相关,Real-time PCR和Western Blot显示其可抑制ERα mRNA和蛋白表达,并抑制Cyclin D1和CDK6蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测显示miR-26b与ERα 3′UTR可相互结合.结论miR-26b通过负调控ERα表达水平,下调Cyclin D1和CDK6以阻滞HO-8910细胞G1期,从而抑制细胞的增殖活性.

MicroRNA的生物表达与结核病诊断和治疗监测的相关性及其对结核病易感基因表达调控的研究

目的探究微小核糖核酸(MicroRNA)对结核病诊断和治疗监测及易感基因表达调控的意义。方法选取136例肺结核患者作为肺结核组,另选择142例健康体检者作为对照组。以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组血清hsa-miR-20b、CUL4A mRNA、GBP5 mRNA水平;检测干扰素调节因子8基因(IRF8)、循环换血RNA-103571(hsa-circRNA-103571)、γ-干扰素(IFN-γ)水平。比较两组血清hsa-miR-20b、GBP5 mRNA、CUL4A mRNA的表达量;比较两组血清IRF8、hsa-ciceRNA-103571、IFN-γ水平;分析肺结核患者hsa-miR-20b与IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-γ的相关性;回归分析肺结核发生的影响因素;分析血清hsa-miR-20b对肺结核的诊断效能。结果肺结核组患者血清hsa-miR-20b、GBP5 mRNA、CUL4A mRNA的表达水平分别为(3.35±0.20)、(2.94±0.23)、(0.41±0.15),对照组分别为(1.01±0.23)、(1.02±0.13)、(1.03±0.11);与对照组相比,肺结核组患者血清hsa-miR-20b、GBP5 mRNA的表达水平均升高,CUL4A mRNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺结核组患者血清IRF8(389.39±46.85)pg/ml、hsa-circRNA-103571(22.48±5.06)ng/L均高于对照组的(327.62±41.76)pg/ml、(11.36±3.17)ng/L,IFN-γ(5.58±1.36)pg/ml明显低于对照组的(12.72±4.78)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,肺结核患者血清hsa-miR-20b与IRF8、hsa-circRNA-103571水平呈正相关(r=0.585、0.539,P<0.05),与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.485,P<0.05)。以hsa-miR-20b、IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-γ水平为自变量,以肺结核是否发生为因变量,行Logistic回归分析,结果显示hsa-miR-20b、IRF8、hsa-circRNA-103571是肺结核发生的危险因素(P<0.05),IFN-γ是肺结核发生的保护因素(P<0.05)。血清hsa-miR-20b水平对肺结核发生诊断的曲线下面积(AUC)为0.898,截断值为1.44,其灵敏度为83.82%,特异度为88.03%。结论肺结核患者血清hsa-miR-20b表达上调,hsa-miR-20b与炎症相关因子具有一定相关性,其可能与炎症因子共同影响肺结核疾病病变过程。

膀胱移行细胞癌组织中has-miR-200b、E-cadherin的表达变化及意义

目的检测膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中hsa-miR-200b基因、E-cadherin蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测58例BTCC患者肿瘤组织中的E-cadherin蛋白,用实时定量PCR法检测其中的hsa-miR-200b基因。结果 BTCC组织中E-cadherin表达缺失率为25.86%(15/58),hsa-miR-200b表达量为36.27±34.2;BTCC组织中E-cadherin蛋白、hsa-miR-200b基因表达均与BTCC病理分级有关(P均<0.05)。E-cadherin正常表达组的hsa-miR-200b基因表达量为2.63±0.39,与E-cadherin表达缺失组的0.73±0.39相比明显增高(P<0.001)。结论 BTCC组织中hsa-miR-200b、E-cadherin蛋白的表达上调,且二者的表达有相关性。二者可能在在BTCC发生发展过程中起重要作用。

阴道超声检测联合miR-23、miR-518b对稽留流产结局的预测价值

目的探讨稽留流产患者的阴道超声特征、胎盘绒毛组织中miR-23和miR-518b的表达及其对流产结局的预测价值。方法选取于2020年1月至2022年8月河北省邯郸市中心医院妇产科门诊及住院,停经9周左右,行阴道超声检查的100例稽留流产患者,根据稽留流产结局分为稽留流产成功组(50例)和稽留流产失败组(50例)。比较分析两组的miR-23和miR-518b水平以及超声检查指标:螺旋动脉(SA)、子宫动脉(UTA)的搏动指数(PI)、阻力指数(RI)和收缩期峰值流速(PS);多因素Logistic回归分析影响稽留流产患者流产失败的因素;采用RT-PCR法检测胎盘绒毛组织和外周血中miR-518b和miR-23的表达;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析阴道超声联合外周血miR-518b和miR-23对稽留流产的预测价值;构建列线图模型并验证。结果稽留流产失败组的miR-23、miR-518b、SA和UTA中的PS水平高于稽留流产成功组,稽留流产失败组的SA和UTA中的RI水平低于稽留流产成功组(P<0.05),行多因素Logistic回归分析结果,miR-23水平、miR-518b水平、SA中的RI、SA中的PS、UTA中的RI、UTA中的PS均为稽留流产患者流产失败的因素(P<0.05);稽留流产失败组的胎盘绒毛和外周血中miR-518b和miR-23的表达水平明显升高(P<0.001)。胎盘绒毛中miR-518b和miR-23的表达与外周血中miR-518b和miR-23的表达呈正相关(P<0.001)。阴道超声联合miR-23和miR-518b对稽留流产的AUC值为0.821,灵敏度为78.96%,特异度为87.52%,对稽留流产的预测效果最好(P<0.001)。根据多因素分析结果建立列线图模型,结果显示训练集和验证集的C-index分别为0.885、0.860,受试患者的特征曲线下面积(AUC)分别为0.817、0.795。结论经阴道超声指标比较多,干扰因素较少,对稽留诊断准确性也有一定的判断价值,但早期疾病超声指标不典型很容易误判,所以联合miR-23、miR-518b对稽留流产有较高的预测价值。

胎盘早剥孕妇血浆miR-515-3p miR-518b的检测水平及意义

目的检测胎盘早剥孕妇血浆中miR-515-3p、miR-518b的表达情况,探讨二者在胎盘早剥发病中的作用及关系。方法选取2017年2月—2020年2月在义乌復元私立医院产科建卡的产检疑为胎盘早剥的183例孕妇作为观察组,后经病理检查显示,其中128例发生胎盘早剥,为胎盘早剥组,55例未发生胎盘早剥,为未发生胎盘早剥组。胎盘早剥组中轻型73例,重型55例,同时选取70例正常孕妇作为对照组。采用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)法测定血浆中miR-515-3p、miR-518b表达水平;分析miR-515-3p、miR-518b在胎盘早剥孕妇血浆中的表达与临床病理特征的关系;Pearson法分析胎盘早剥孕妇血浆中miR-515-3p、miR-518b表达水平的相关性;ROC曲线分析miR-515-3p、miR-518b对胎盘早剥的诊断价值。结果观察组孕妇血浆中miR-515-3p、miR-518b表达水平均显著高于对照组(P<0.05);观察组孕妇血浆中miR-515-3p、miR-518b表达水平与胎盘早剥程度、是否发生弥散性血管内凝血(DIC)、产后出血(PPH)及急性肾功能衰竭(ARF)相关(P<0.05)。观察组孕妇血浆中miR-515-3p、miR-518b水平呈正相关(r=0.885,P=0.000)。血浆中miR-515-3p诊断胎盘早剥的ROC曲线下面积(AUC)为0.830,灵敏度为68.8%,特异度为85.7%;miR-518b诊断胎盘早剥的ROC曲线下面积为0.852,灵敏度为69.5%,特异度为85.7%。结论胎盘早剥患者血浆中miR-515-3p、miR-518b均呈高表达,两者呈正相关且与胎盘早剥严重程度、是否发生DIC、PPH及ARF有关,血浆miR-515-3p、miR-518b对胎盘早剥具有一定的诊断价值。

喉鳞状细胞癌SMAD3和hsa-miR-193b表达与靶向关系验证

目的 Hsa-miR-193b与LSCC的发生发展密切相关。本研究探讨LSCC中miR-193b与SMAD3的表达及二者的靶向调控关系。方法 qRT-PCR检测山西医科大学第一医院2013-01-03-2014-06-30来源的20例喉鳞状细胞癌(laryngal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及癌旁正常黏膜组织中miR-193b的表达,qRT-PCR、蛋白质印迹法检测SMAD3的表达。构建野生型和突变型SMAD3 3′UTR载体,与miR-193bmimics或NC共转染HEK-293T细胞,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。结果 qRT-PCR检测结果,癌组织miR-193b总表达为11.50±6.289,癌旁正常组织为1.00±0.000,与癌旁正常组织相比,miR-193b在LSCC组织中的表达上调且差异有统计学意义,t=7.466,P<0.001;癌组织SMAD3表达为0.402±0.201,癌旁正常组织表达为1.00±0.000,SMAD3在LSCC组织中的表达降低且差异有统计学意义,t=13.31,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果,癌组织SMAD3表达为1.57±0.127,癌旁正常组织表达为3.68±0.198,SMAD3在癌组织的表达降低且差异有统计学意义,t=48.40,P<0.001。经测序,成功构建野生型与突变型SMAD3 3′UTR载体,共转染后各组样品经检测显示,miR-193b+mutSMAD3组荧光素酶活性变化倍数为1.042±0.100 8,NC+mutSMAD3组为1.102±0.070 6,差异无统计学意义(t=0.854,P=0.442),miR-193b+SMAD3组荧光素酶活性变化倍数为0.449±0.047 2,NC+SMAD3组为1.124±0.014 1,miR-193b+SMAD3组比NC+SMAD3组荧光素酶活性明显降低(t=31.89,P=0.001),说明miR-193b可以与SMAD3 3′UTR结合。结论 LSCC组织中miR-193b表达上调,SMAD3表达明显降低。SMAD3是miR-193b的直接调控靶基因。