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家蚕hsp20.4启动子克隆及其驱动表达产物EGT对家蚕蛹体发育的影响 被引量:3
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作者 谢敏 贡成良 +5 位作者 薛仁宇 盛洁 张晓荣 李艳梅 虞晓华 曹广力 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期246-253,共8页
为验证家蚕Bombyxmori热休克蛋白基因hsp20.4启动子的活性以及家蚕核多角体病毒egt的表达产物对家蚕发育的影响,本实验通过PCR扩增分别得到hsp20.4启动子片段和egt片段。利用hsp20.4的启动子和红色荧光蛋白报告基因DsRed构建重组载体,... 为验证家蚕Bombyxmori热休克蛋白基因hsp20.4启动子的活性以及家蚕核多角体病毒egt的表达产物对家蚕发育的影响,本实验通过PCR扩增分别得到hsp20.4启动子片段和egt片段。利用hsp20.4的启动子和红色荧光蛋白报告基因DsRed构建重组载体,在家蚕BmN细胞以及家蚕组织中得到了瞬时表达,表明所克隆的hsp20.4启动子序列具有热休克蛋白基因的启动子活性。又利用hsp20.4启动子和家蚕核多角体病毒的egt构建重组载体,通过注射到蚕蛹中进行瞬时表达,以检测egt表达产物对家蚕发育的影响,经42℃1h热诱导后,hsp20.4启动子控制的egt表达产物可以延迟家蚕发育。 展开更多
关键词 家蚕 hsp20.4启动子 家蚕核多角体病毒 EGT 发育
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Development of a Transient Assay for Investigating the Activation of Pea Hsp70 Gene Promoter by Potyviral Cistrons 被引量:5
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作者 战淑欣 王道文 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第4期433-437,共5页
建立了一个瞬时表达系统以研究豌豆种传花叶病毒 (PSbMV ,一种马铃薯Y类病毒 )不同基因对豌豆(PisumsativumL .)Hsp70基因启动子激活能力的差异。构建了豌豆Hsp70基因启动子指导下的GUS基因的表达载体 ,同时还制备了 35S启动子指导下的P... 建立了一个瞬时表达系统以研究豌豆种传花叶病毒 (PSbMV ,一种马铃薯Y类病毒 )不同基因对豌豆(PisumsativumL .)Hsp70基因启动子激活能力的差异。构建了豌豆Hsp70基因启动子指导下的GUS基因的表达载体 ,同时还制备了 35S启动子指导下的PSbMVP1和P3基因的表达载体。以表达载体DNA包被的金粉做子弹 ,利用基因枪对豌豆离体叶片进行共轰击实验 ,结果表明 ,PSbMVP1和P3基因在激活豌豆Hsp70基因启动子的能力上存在明显差异。 展开更多
关键词 PEA pea seed_borne mosaic virus HSP70 promoter
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Construction and Identification of HSP70 Antisense RNA Expression Vector for Genetic Engineering Male Sterility in Plant 被引量:2
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作者 刘立科 刘根齐 +5 位作者 侯宁 刘春光 陈建南 张文会 樊颖伦 吴冰洁 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第2期81-84,128,共5页
[ Objective] In order to study the relation between the HSPTO gene and male sterility of plant further. [ Methods ] Anther specific expression promoter Osg6B of rice was coloned by PCR then connected with HSP70 antise... [ Objective] In order to study the relation between the HSPTO gene and male sterility of plant further. [ Methods ] Anther specific expression promoter Osg6B of rice was coloned by PCR then connected with HSP70 antisense fragment to construct HSPTO antisense expression vector. The expression vector was identified by PCR experiment and enzyme digestion. [ Result] The sequence of coloned Osg6B promoter had 97% homology to the published sequence, and the cis-regulatory element in promoter area was integrated. HSP70 antisense expression vector driven by the promoter Osg6B was confired by colony PCR and enzyme digestion. [ Conclusion] The construction of expression vector would lay solid foundation for utilization of genetic engineering male sterility of plant. 展开更多
关键词 HSP70 Osg6B promoter Gene engineering Male sterility
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热激启动子控制的FT基因诱导杨树早期开花体系的优化 被引量:4
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作者 贾小明 张焕玲 樊军锋 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第11期37-43,共7页
为实现杨树早期开花,缩短育种周期,利用农杆菌介导的转化方法,探讨影响热激启动子控制的FT1基因转化白杨派杂种无性系的因素,优化其转化条件,并实现FT1基因的转化,采用热激诱导方法诱导2~3个月大的转基因植株早期开花。结果表明:叶盘... 为实现杨树早期开花,缩短育种周期,利用农杆菌介导的转化方法,探讨影响热激启动子控制的FT1基因转化白杨派杂种无性系的因素,优化其转化条件,并实现FT1基因的转化,采用热激诱导方法诱导2~3个月大的转基因植株早期开花。结果表明:叶盘转化前的预培养、菌液浓度、侵染时间及共培养时间对卡那霉素抗性植株再生率的影响均达到极显著水平;叶盘在愈伤组织诱导培养基上暗培养6天,然后用活化至OD600=0.5的菌液侵染60min,再在愈伤组织诱导培养基上共培养2天,该条件下FT1基因转化白杨派杂种的卡那霉素抗性植株再生率可达29.84%;37℃每天1h持续热激3周可使FT1基因顺利表达,促进转基因植株开花;热激植株大小是影响转基因植株热激诱导开花的限制因素,低于20cm的植株不能诱导开花;热激诱导可产生相对较多的正常花器,但花器变异仍然十分广泛。 展开更多
关键词 FT基因 热激启动子(HSP) 杨树 遗传转化 早期开花
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紫茎泽兰hsp90和hsp17.66基因启动子的克隆及其序列分析 被引量:1
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作者 宫伟娜 万方浩 +2 位作者 谢丙炎 郭建英 周艳 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期451-457,共7页
以入侵植物紫茎泽兰(Ageratina adenophora Sprengel)为材料,采用基于PCR方法的染色体步行和改良的热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)两种方法分别克隆到hsp90和hsp17.66基因的5′上游启动子序列,长度分别为... 以入侵植物紫茎泽兰(Ageratina adenophora Sprengel)为材料,采用基于PCR方法的染色体步行和改良的热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)两种方法分别克隆到hsp90和hsp17.66基因的5′上游启动子序列,长度分别为864 bp和1 485 bp(GenBank登录号分别为FJ434253和FJ434252)。测序结果表明:这两个启动子序列均具有hsp启动子特有的HSE元件,及其他一些启动子顺式作用元件,如TATA-box,CAAT-box等。 展开更多
关键词 紫茎泽兰 热激蛋白基因 启动子 克隆 染色体步行 TAIL-PCR
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常用活血化瘀中成药在预防过敏性紫癜患儿肾损害中的应用 被引量:2
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作者 李宏贵 罗文 《中医临床研究》 2016年第3期44-45,共2页
过敏性紫癜是儿童时期常见的一种全身性小血管变态反应性出血性血管炎综合征,临床主要表现为皮肤紫癜、腹痛、关节痛及肾损害等;其中肾损害是决定其预后的重要因素,且西医目前尚无特效的药物能够早期干预肾损害的进展。中医药治疗HSP有... 过敏性紫癜是儿童时期常见的一种全身性小血管变态反应性出血性血管炎综合征,临床主要表现为皮肤紫癜、腹痛、关节痛及肾损害等;其中肾损害是决定其预后的重要因素,且西医目前尚无特效的药物能够早期干预肾损害的进展。中医药治疗HSP有显著的疗效,尤其是活血化瘀药物在早期预防肾损害方面起着重要的作用。通过总结常用的活血化瘀药物,为临床治疗HSP、预防早期肾损害提供理论的依据。 展开更多
关键词 活血化瘀 过敏性紫癜 肾损害
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大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pY-α的构建
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作者 赵宝华 杨虹 +1 位作者 许崇波 石振华 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2002年第2期187-189,共3页
利用分子生物学方法 ,以含人结核杆菌热休克蛋白 ( HSP) 70基因全长序列的质粒 p MT 70为模板 ,扩增出 hsp70启动子 ,将其定向克隆于 p UC 1 9,构建成重组质粒 p Y6 0 1 3;然后以重组质粒 p IJK 1为模板 ,扩增出分枝杆菌α信号肽基因并... 利用分子生物学方法 ,以含人结核杆菌热休克蛋白 ( HSP) 70基因全长序列的质粒 p MT 70为模板 ,扩增出 hsp70启动子 ,将其定向克隆于 p UC 1 9,构建成重组质粒 p Y6 0 1 3;然后以重组质粒 p IJK 1为模板 ,扩增出分枝杆菌α信号肽基因并将其克隆到 p Y6 0 1 3质粒中 hsp70启动子的下游 ,得到了大肠杆菌分枝杆菌表达质粒 p Y-α. 展开更多
关键词 hsp70启动子 α-信号肽 BCG穿梭表达质粒 大肠杆菌 分枝杆菌 pY-α 卡介苗
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利用FLP/frt重组系统产生无选择标记的转基因烟草植株 被引量:23
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作者 单晓映 李蓓 张举仁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期744-750,共7页
在植物转基因植株产生过程中,对转化细胞进行抗性筛选是通用程序,转化细胞的抗性一般是抗生素抗性或除草剂抗性,将赋予转化细胞抗性的选择标记基因删除是提高转基因植物生物安全性的重要措施。来自于啤酒酵母的FLP/frt位点特异性重组系... 在植物转基因植株产生过程中,对转化细胞进行抗性筛选是通用程序,转化细胞的抗性一般是抗生素抗性或除草剂抗性,将赋予转化细胞抗性的选择标记基因删除是提高转基因植物生物安全性的重要措施。来自于啤酒酵母的FLP/frt位点特异性重组系统可有效删除同向定点重组位点frt之间的基因。通过多步骤重组,建立了可在植物中广泛应用的FLP/frt位点特异性重组系统。该系统包括含有frt位点的植物表达载体pCAMBIA1300-betA-frt-als-frt和含有由热诱导启动子hsp启动的FLP重组酶基因的植物表达载体pCAMBIA1300-hsp-FLP-hpt。利用二次转化的方式将二者先后转入烟草植株,热激处理后,热诱导型启动子hsp调控的重组酶FLP基因的表达催化位于选择标记基因als两侧同向frt位点间的重组反应,有效地删除了选择标记基因als。41%的经热激处理的二次转化植株发生了选择标记基因的删除,表明该系统在获得无选择标记基因的转基因植株中有很好的应用价值。 展开更多
关键词 选择标记基因 FLP/frt 位点特异性重组系统 hsp热诱导启动子
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热激蛋白70B'启动子调控的热诱导型载体pHSP-shTERT的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞的抑制效应
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作者 李岩琦 李静 +5 位作者 李海霞 王雪芳 朱燕 叶凡 张振中 任雪玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期130-135,共6页
目的:构建靶向端粒酶逆转录酶(telomerose reverse transcriptas,TERT)的热激蛋白(heat shock protein,HSP)70B'启动子调控的热诱导型RNAi表达载体,观察热诱导条件下其在人乳腺癌MCF-7细胞内的RNAi效应及其对MCF-7细胞增殖和凋亡的... 目的:构建靶向端粒酶逆转录酶(telomerose reverse transcriptas,TERT)的热激蛋白(heat shock protein,HSP)70B'启动子调控的热诱导型RNAi表达载体,观察热诱导条件下其在人乳腺癌MCF-7细胞内的RNAi效应及其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:PCR扩增HSP70B'启动子序列,用其构建热诱导型靶向TERT的重组载体并转染MCF-7细胞,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测GFP的表达,优化转染和热诱导条件;以未经热诱导的转染细胞为对照组,RT-PCR和Western blotting检测重组载体转染与热诱导对MCF-7细胞内GFP与TERT的mRNA和蛋白表达的影响;MTT实验和流式细胞术分别检测对MCF-7细胞增殖与凋亡的影响。结果:成功构建热诱导型重组载体pHSP-GFP、pHSP-shGFP和pHSP-shTERT;在最适热诱导条件(42℃、40 min)下,共转染质粒pHSP-shGFP和pCMV-GFP的MCF-7细胞中GFP表达量显著低于对照组(t=-48.35,P=0.000 43)。pHSP-shTERT转染组MCF-7细胞内TERT mRNA[(12.24±1.96)%vs(80.18±2.28)%;t=-286.5,P=0.000 012]和蛋白[(1.64±0.42)%vs(63.45±3.12)%;t=-31.37,P=0.001]的表达均显著下调,细胞存活率显著下降[(58.93±2.95)%vs(91.22±4.16)%;t=15.747,P=0.004],细胞凋亡率显著提高[(40.97±4.80)%vs(8.33±1.14)%;t=-11.672,P=0.007]。结论:靶向TERT的pHSP-shTERT载体可以在热诱导条件下实现MCF-7细胞内靶基因的沉默,从而抑制MCF-7细胞的生长、诱导该细胞的凋亡。 展开更多
关键词 热激蛋白 70B 启动子 热诱导 RNA干扰 乳腺癌 MCF-7细胞 绿色荧光蛋白 端粒酶逆转录酶
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