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结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用 被引量:4
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作者 陈磊 徐苗 +7 位作者 都伟欣 陈保文 王志玉 王雅君 董娜 苏城 沈小兵 王国治 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期403-409,共7页
目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化B... 目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定。纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况。结果成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 重组蛋白质 佐剂 AG85B hspx
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小鼠对结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因的免疫反应 被引量:2
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作者 袁伟 董娜 +4 位作者 张丽芳 林树柱 向志光 乔红伟 秦川 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第6期47-51,共5页
目的研究结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因的免疫原性。方法将40只BALB/c小鼠随机分成4组,NS组、BCG组、pcDNA-HspX组和pcDNA-Ag85B-Esat6-HspX组,每组10只。BCG组只在0周时皮内注射卡介苗1次。NS组、pcDNA-HspX组及融合基因组分别... 目的研究结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因的免疫原性。方法将40只BALB/c小鼠随机分成4组,NS组、BCG组、pcDNA-HspX组和pcDNA-Ag85B-Esat6-HspX组,每组10只。BCG组只在0周时皮内注射卡介苗1次。NS组、pcDNA-HspX组及融合基因组分别于0、2、4周肌肉注射生理盐水和重组质粒DNA,共免疫3次。在免疫的第2周,4周及最后一次免疫后2周检测体血清中的总IgG水平。同时,最后一次免疫后2周,取脾细胞检测细胞免疫反应。结果构建的融合基因重组质粒DNA免疫动物后能产生针对结核杆菌特定抗原的特异性细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因可作为DNA疫苗进行保护作用的研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 AG85B ESAT6 hspx DNA疫苗
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结核分枝杆菌HspX蛋白的原核高效可溶性表达及产物抗原性分析 被引量:1
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作者 李邦印 孙卫国 +4 位作者 王仲元 胡永亮 苏锐 李国利 程小星 《生物技术通讯》 CAS 2012年第1期38-41,共4页
目的:利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌HspX蛋白并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法:采用PCR方法,从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增HspX核酸序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21(DE3... 目的:利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌HspX蛋白并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法:采用PCR方法,从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增HspX核酸序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,用Western印迹初步评价HspX的抗原性。结果:经IPTG诱导,HspX蛋白在原核系统内获得了可溶性表达,经镍柱亲和层析获得了纯度达95%以上的重组蛋白。Western印迹结果证明重组HspX蛋白与结核病患者血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本呈阴性反应。结论:重组蛋白HspX在大肠杆菌中以可溶性形式表达,高纯度的重组融合蛋白有可能成为结核病的血清学诊断抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 hspx蛋白 可溶性表达 抗原性分析
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不同耐药型的结核分枝杆菌hspX基因序列与表达的比较
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作者 杨瑜 王楠 +5 位作者 李华 吴玲 王琪 谢贝 刘志辉 孟繁荣 《新医学》 CAS 2023年第5期340-343,共4页
目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼... 目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼(MTB^(H+))、单耐链霉素(MTB^(S+))和单耐乙胺丁醇(MTB^(E+))]的菌株各10株,采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA,使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达。对PCR产物进行测序以检查正向和反向的多态性,并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对。以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异。结果PCR成功获得各组特异性的hspX基因,与H37Rv序列比对具有97%~99%的同一性,无存在明显差异;以相对定量2^(-ΔΔCt)法计算获得S、MDR、MTB^(R+)、MTB^(H+)、MTB^(S+)和MTB^(E+)菌株hspX的表达分别为0.98(0.89,1.23)、1.49(1.10,2.04)、1.41(0.55,2.80)、1.37(0.68,2.71)、0.91(0.59,1.62)和0.70(0.48,1.18)。以敏感菌株(S)组为对照组,不同耐药型菌株组与其比较,hspX表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论hspX基因在MTB中是保守的。在自然状态下,hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 hspx基因 耐药性
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结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因真核表达载体的构建
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作者 袁伟 刘江宁 +3 位作者 向志光 林树柱 张丽芳 秦川 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第4期52-55,共4页
目的构建结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因,并对其在体外真核细胞中进行表达。方法用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中分别扩增Ag85B、Esat6、HspX基因,插入到pUC19-T载体,序列测定正确后,将融合基因再次克隆到真核表达载体pcDN... 目的构建结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因,并对其在体外真核细胞中进行表达。方法用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中分别扩增Ag85B、Esat6、HspX基因,插入到pUC19-T载体,序列测定正确后,将融合基因再次克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)。重组质粒经酶切鉴定并测序正确后,用MegaTran1.0转染293T细胞,并用Western-Blot检测目的蛋白的表达。结果 Western-blot检测到分子量大小约65 kDa的目的蛋白。结论成功地构建了结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因的真核表达载体,且该重组载体可在体外真核细胞中获得特异性的表达。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 AG85B ESAT6 hspx
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HspX的功能及其在结核疫苗研制中的应用进展 被引量:1
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作者 梁正敏 宋银娟 +2 位作者 董玉慧 屈孟锦 周向梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期956-961,968,共7页
研制安全有效的结核疫苗一直是结核病研究的重点,因此,有必要对其主要致病菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原进行科学合理的评价。本文综述了潜伏性结核感染重要抗原HspX的致病机制及其在结核疫苗研制中的应用进展,... 研制安全有效的结核疫苗一直是结核病研究的重点,因此,有必要对其主要致病菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原进行科学合理的评价。本文综述了潜伏性结核感染重要抗原HspX的致病机制及其在结核疫苗研制中的应用进展,探讨了HspX抗原在不同类型疫苗研制中的作用,旨在为将来研制有效的结核疫苗提供较准确的信息。 展开更多
关键词 hspx 结核分枝杆菌 潜伏性结核感染 结核疫苗
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牛分枝杆菌FixB、HspX和MPB83基因的原核表达及鉴定
7
作者 陈爽 许芳 +2 位作者 张林波 张喜悦 范伟兴 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期15-19,共5页
为了给原核表达牛分枝杆菌Fix B、Hsp X和MPB83基因并纯化Fix B、Hsp X和MPB83蛋白,进一步研究它们在牛结核病诊断中作为特异性抗原的诊断价值及应用奠定基础,试验用PCR方法从牛结核分枝杆菌AF2122/97基因组中扩增出Fix B、Hsp X和MPB8... 为了给原核表达牛分枝杆菌Fix B、Hsp X和MPB83基因并纯化Fix B、Hsp X和MPB83蛋白,进一步研究它们在牛结核病诊断中作为特异性抗原的诊断价值及应用奠定基础,试验用PCR方法从牛结核分枝杆菌AF2122/97基因组中扩增出Fix B、Hsp X和MPB83基因片段,构建p ET-28a-Fix B、p ET-28a-Hsp X和p ET-28a-MPB83重组质粒,克隆到DH5ɑ感受态细胞,提取测序正确的阳性重组质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG于37℃诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式,Western-blot分析鉴定并用Ni-NTA层析柱纯化蛋白。结果表明:成功扩增了大小依次约为957 bp、435 bp和663 bp的Fix B、Hsp X和MPB83基因,将其连接p ET-28a原核表达载体,原核表达的Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白均以包涵体形式存在,分子质量依次约为37 ku、21 ku和28 ku。经Western-blot鉴定表达产物为Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白,Ni-NTA成功洗脱出目的蛋白。说明试验成功构建了牛分枝杆菌Fix B、Hsp X和MPB83基因的原核表达载体,并纯化了Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白,可用于进一步的应用研究。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 FixB hspx MPB83 原核表达 纯化
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结核分枝杆菌抗原Ag85B-Mpt64 190-198-HspX融合蛋白免疫原性的初步观察 被引量:2
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作者 李青 姜雯雯 +6 位作者 雒彧 于红娟 宋楠楠 王秉翔 刘昕 张颖 祝秉东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期103-107,共5页
目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答,本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190~198位的氨基酸多肽(CD8^+T细胞表位)及Ag85B,构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX(AMH),并对其... 目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答,本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190~198位的氨基酸多肽(CD8^+T细胞表位)及Ag85B,构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX(AMH),并对其免疫原性进行研究。方法PCR分别扩增Ag85B、Mpt64 190-198-HspX基因,并依次插入pET-28a质粒中,在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸(DDA+BCG—PSN)混合构建亚单位疫苗,分别于1、4、7周皮下免疫C57BL/6小鼠3次,最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应。结果该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达,经Ni—NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白;构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原(PPD、Ag85B、Mpt64 190-198和HspX)的特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性。结论融合蛋白AMH作为结核亚单位疫苗候选的融合蛋白抗原有必要进一步研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 融合蛋白 AG85B hspx
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结核分枝杆菌rPstS1-HspX融合蛋白的制备及其血清学诊断价值 被引量:1
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作者 宋广忠 石君帆 +4 位作者 李召东 杨明瑾 漏磊君 李涛 王秀芝 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2012年第4期260-263,共4页
目的表达、纯化结核分枝杆菌rPstS1-HspX(rPH)融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法异丙基.陆D一硫代吡喃半乳糖苷(帆)诱导rPH融合蛋白表达,并用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。Western印迹分析纯化后融合蛋... 目的表达、纯化结核分枝杆菌rPstS1-HspX(rPH)融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法异丙基.陆D一硫代吡喃半乳糖苷(帆)诱导rPH融合蛋白表达,并用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。Western印迹分析纯化后融合蛋白的免疫反应性。最后用ELISA法检测194份血清抗体样本,其中来源于肺结核患者94份,非结核肺部疾病患者52份,健康对照者48份。结果rPH融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性非包涵体形式表达,相对分子质量为51000。经亲和层析后得到了浓度为0.62ng/mL,纯度达92%的融合蛋白。Western印迹实验证实纯化后融合蛋白能与结核病阳性血清发生特异性免疫应答。重组蛋白rPH血清检测的灵敏度为77.6%(73/94),特异性为92.0%(92/100)。结论成功表达和纯化了rPH融合蛋白,其用于结核病血清学诊断具有较好的灵敏度和较高的特异性,是ELISA的可靠抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 rPstS1-hspx融合蛋白 血清学诊断
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结核分枝杆菌rESAT6-CFP10和rPstS1-HspX融合蛋白的血清学诊断价值
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作者 李召东 宋广忠 +3 位作者 赵爱桔 徐美华 张艳 范大鹏 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2013年第5期311-313,共3页
目的 探讨结核分枝杆菌rESAT6-CFP10(rEC)和rPstS1-HspX(rPH)融合蛋白用于结核病血清学诊断的价值.方法 以rEC和rPH融合蛋白为抗原,用金标免疫渗滤法(DIGFA)检测370份血清中的抗结核抗体,其中肺结核患者血清131份,非结核肺病患者... 目的 探讨结核分枝杆菌rESAT6-CFP10(rEC)和rPstS1-HspX(rPH)融合蛋白用于结核病血清学诊断的价值.方法 以rEC和rPH融合蛋白为抗原,用金标免疫渗滤法(DIGFA)检测370份血清中的抗结核抗体,其中肺结核患者血清131份,非结核肺病患者血清114份,健康人群血清125份.结果 rEC和rPH融合蛋白单一或联合检测肺结核患者血清抗结核抗体的的灵敏度分别为70.23%、71.76%和84.73%.联合检测的灵敏度显著高于rEC或rPH单一检测,且差异有统计学意义(x2=1.181,P<0.01 ;x2=0.036,P<0.05).3种方法用于检测非结核肺病患者和健康人血清的特异性差异均无统计学意义(x2=0.527、0.097,P>0.05).结论 rEC和rPH融合蛋白均有较高的灵敏度和特异性,联合检测有助于进一步提高结核病血清学诊断的灵敏度. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 血清学 rESAT6-CFP10 rPstS1-hspx
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结核分枝杆菌Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4重组基因克隆及表达 被引量:1
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作者 吴玉敏 谭继英 +3 位作者 王革 刘万波 胡丽娜 祝秉东 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第6期414-417,共4页
目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴... 目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴定,构建原核重组表达质粒PET30a-Mtb8.4和PET30a-Hspx。抽提重组质粒,产物经纯化后与目的基因Hspx、Mtb8.4连接,转化及测序鉴定,构建重组目的基因质粒PET30a-Mtb8.4-Hspx(PET30a-MH)和PET30a-Hspx-Mtb8.4(PET30a-HM)载体,转化大肠埃希菌BL21,以IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果 SDS-PAGE蛋白电泳验证去标签MH和HM融合蛋白分子质量单位为28 ku,与预期值相符。结论本研究成功表达去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM,为结核亚单位疫苗免疫原性和临床前研究奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 MTB8.4 hspx 克隆 表达
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结核分枝杆菌PstS1和HspX蛋白的免疫反应性及诊断价值评价 被引量:1
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作者 李娜 李马超 +4 位作者 肖彤洋 闫宇涵 李晓琴 刘海灿 万康林 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期192-197,共6页
目的:评价结核分枝杆菌PstS1和HspX蛋白的体液和细胞免疫反应性,为结核病免疫学诊断和疫苗候选抗原的筛选提供参考。方法:利用分子克隆表达和Ni 2+亲和层析技术纯化获得重组目的蛋白PstS1和HspX。收集健康志愿者和结核分枝杆菌感染志愿... 目的:评价结核分枝杆菌PstS1和HspX蛋白的体液和细胞免疫反应性,为结核病免疫学诊断和疫苗候选抗原的筛选提供参考。方法:利用分子克隆表达和Ni 2+亲和层析技术纯化获得重组目的蛋白PstS1和HspX。收集健康志愿者和结核分枝杆菌感染志愿者血液样本及其背景流行病学资料,以重组PstS1和HspX蛋白作为抗原,进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和酶联免疫斑点试验(ELISPOT)分别检测特异性IgG抗体和分泌IFN-γ的抗原特异性T淋巴细胞。对数据进行统计学分析,评价重组PstS1和HspX蛋白的体液和细胞免疫反应性。 结果:重组PstS1和HspX蛋白均能特异性刺激结核分枝杆菌感染者体内较多的效应T细胞分泌IFN-γ,结核分枝杆菌感染组与健康对照组的检测结果差异有统计学意义( P<0.01);重组PstS1和HspX蛋白作为ELISPOT诊断抗原的特异度和灵敏度分别为92.11%(35/38)和65.96%(31/47),68.42%(26/38)和91.49%(43/47)。重组PstS1和HspX蛋白也具有一定的体液免疫反应性,但仅HspX蛋白特异性抗体水平在结核分枝杆菌感染组与健康对照组间的差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:重组PstS1和HspX蛋白均具有较好的细胞免疫反应性,属于细胞免疫优势抗原。两者均具有较好的细胞免疫诊断性能,同时也是较好的潜在抗结核疫苗候选抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 PstS1 hspx 免疫优势抗原
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结核分枝杆菌H37Ra株HspX蛋白的表达条件优化、纯化和鉴定 被引量:1
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作者 魏婧 郑如明 +3 位作者 李康生 李柏青 许涛 汪洪涛 《生命的化学》 CAS 2023年第2期286-295,共10页
以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得HspX基因,通过DNA无缝克隆技术将其克隆至pET28a质粒中,构建重组表达质粒pET28a-HspX。将pET28a-HspX转化至大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3),采用不同温度、IPTG浓度和时间诱导... 以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得HspX基因,通过DNA无缝克隆技术将其克隆至pET28a质粒中,构建重组表达质粒pET28a-HspX。将pET28a-HspX转化至大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3),采用不同温度、IPTG浓度和时间诱导HspX蛋白表达。使用Ni-IDA亲和层析柱纯化目的HspX蛋白,透析去除咪唑,通过Western blot检测HspX抗原特异性。最终确定表达重组蛋白HspX的最佳诱导条件为:诱导温度37℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导时间8 h。结果表明,获得了高纯度和被特异性识别的可溶性Hsp X蛋白,为未来Hsp X蛋白用于结核病诊断试剂和疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 hspx 原核表达 纯化 条件优化
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表达结核分枝杆菌融合抗原TB10.4-HspX的重组酵母免疫效果研究
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作者 张宇飞 陆健 +1 位作者 刘建平 王洪海 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期478-483,490,共7页
结核病是一种严重危害人类健康的传染病,其防治难点主要在于抗药性菌株的出现以及唯一的抗结核疫苗——卡介苗的效果不理想.为发展新型抗结核疫苗,本研究中构建了表达结核分枝杆菌融合抗原TB10.4-HspX(TB10H)的重组酿酒酵母,分别以皮下... 结核病是一种严重危害人类健康的传染病,其防治难点主要在于抗药性菌株的出现以及唯一的抗结核疫苗——卡介苗的效果不理想.为发展新型抗结核疫苗,本研究中构建了表达结核分枝杆菌融合抗原TB10.4-HspX(TB10H)的重组酿酒酵母,分别以皮下注射和滴鼻两种方式免疫小鼠,检测免疫效果.结果显示,该重组酿酒酵母通过皮下注射的方式免疫后刺激小鼠产生TB10H特异性抗体IgG,分泌Th1型细胞因子IFN-γ,而且重组酵母免疫后在一定程度上刺激小鼠树突状细胞的成熟分化和抗原递呈作用.一系列结果表明,表达融合抗原TB10H的重组酿酒酵母能够有效激发小鼠抗原特异性免疫应答. 展开更多
关键词 结核病 疫苗 重组酿酒酵母 TB10.4 hspx
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结核分枝杆菌休眠相关蛋白HspX的生物信息学分析、制备及对大肠埃希菌生长抑制探究 被引量:1
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作者 马锐 马金花 +3 位作者 杨壤 李雅婷 赵志浩 马国荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第5期529-535,共7页
目的分析HspX蛋白的基本性质及其编码基因对大肠埃希菌(E.coli)生长的影响,为将其作为结核病疫苗候选分子和临床检测生物标志物的可行性提供实验依据。方法应用生物信息学方法分析HspX蛋白基本生化性质;构建原核重组表达载体并在E.coli... 目的分析HspX蛋白的基本性质及其编码基因对大肠埃希菌(E.coli)生长的影响,为将其作为结核病疫苗候选分子和临床检测生物标志物的可行性提供实验依据。方法应用生物信息学方法分析HspX蛋白基本生化性质;构建原核重组表达载体并在E.coli中表达,用金属螯合层析法纯化HspX蛋白,观察该蛋白及其编码基因对宿主菌E.coli-BL21(DE3)和E.coli-DH5α生长的影响。结果生物信息学分析HspX蛋白由144个氨基酸残基组成,相对分子质量为16.22728×10^(3),等电点为5.00;该蛋白无信号肽,含有14个磷酸化位点,为亲水性细胞壁蛋白。其在大肠埃希菌中以可溶性表达,经镍金属螯合填料一步纯化得到纯度为86.9%的重组蛋白。重组质粒(pET28a-Rv2031c)能显著抑制其表达宿主菌E.coli-BL21(DE3)的生长,但不会抑制其克隆宿主菌E.coli-DH5α的生长。结论HspX蛋白能抑制E.coli-BL21(DE3)宿主菌的生长,其可能是结核分枝杆菌在宿主体内滞留发挥作用的效应物之一。 展开更多
关键词 hspx Rv2031c 载体构建 重组表达 生物信息学分析
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HspX protein as a candidate vaccine against Mycobacterium tuberculosis: an overview 被引量:1
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作者 Arshid Yousefi-Avarvand Mohsen Tafaghodi +1 位作者 Saman Soleimanpour Farzad Khademi 《Frontiers in Biology》 CAS CSCD 2018年第4期293-296,共4页
BACKGROUND: Tuberculosis (TB) is a contagious infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). This disease with two million deaths per year has the highest mortality rate among bacterial infections... BACKGROUND: Tuberculosis (TB) is a contagious infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). This disease with two million deaths per year has the highest mortality rate among bacterial infections. The only available vaccine against TB is BCG vaccine. BCG is an effective vaccine against TB in childhood, however, due to some limitations, has not proper efficiency in adults. Also, BCG cannot produce an adequately protective response against reactivation of latent infections. OBJECTIVE: In the present study we will review the most recent findings about contribution of HspX protein in the vaccines against tuberculosis. METHODS: Therefore, many attempts have been made to improve BCG or to find its replacement. Most of the subunit vaccines for TB in various phases of clinical trials were constructed as prophylactic vaccines using Mtb proteins expressed in the replicating stage. These vaccines might prevent active TB but not reactivation of latent tuberculosis infection (LTBI). A literature search was performed on various online databases (PubMed, Scopus, and Google Scholar) regarding the roles of HspX protein in tuberculosis vaccines. RESULTS: Ideal subunit post-exposure vaccines should target all forms of TB infection, including active symptomatic and dormant (latent) asymptomatic forms. Among these subunit vaccines, HspX is the most important latent phase antigen of M. tuberculosis with a strong immunological response. There are many studies that have evaluated the immunogenicity of this protein to improve TB vaccine. CONCLUSION: According to the studies, HspX protein is a good candidate for development of subunit vaccines against TB infection. 展开更多
关键词 hspx protein Mycobacterium tuberculosis VACCINE
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结核分枝杆菌体外休眠模型的建立 被引量:1
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作者 付晓蕊 郑青 +4 位作者 周磊 旦正尖措 苏明权 郝晓柯 马越云 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第11期2032-2036,共5页
目的:模拟结核分枝杆菌体内缺氧和微营养的生长环境建立其休眠模型。方法:将牛分枝杆菌卡介苗野生株BCG菌株在"微需氧+pH5.0+10%Dubos"的条件下培养,以菌株生长停滞,菌体表面脂质体增厚为休眠标准进行鉴定。取不同时间菌株测... 目的:模拟结核分枝杆菌体内缺氧和微营养的生长环境建立其休眠模型。方法:将牛分枝杆菌卡介苗野生株BCG菌株在"微需氧+pH5.0+10%Dubos"的条件下培养,以菌株生长停滞,菌体表面脂质体增厚为休眠标准进行鉴定。取不同时间菌株测定600 nm下的吸光度(A)值绘制生长曲线,同时进行金胺O-尼罗红(Auramin-O,Nile Red)双荧光染色和实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime-PCR,qRT-PCR)检测休眠相关基因的表达量,确定菌株进入休眠状态。结果:在休眠条件培养过程中,BCG菌株的生长速度与常规条件培养菌株相比明显减慢(P<0.01),并且在休眠条件培养中第10、14和18天细菌生长基本接近停滞状态(P<0.01);同时金胺O荧光染色显示绿色荧光减弱,尼罗红红色荧光增强;休眠相关基因hspX、devR表达量逐渐上调,且培养第18天菌株明显高于第0天培养菌株(P<0.05)。结论:应用"微需氧+p H5.0+10%Dubos"条件培养,以金胺O-尼罗红染色和devR表达为标准,可以成功建立结核分枝杆菌休眠模型。 展开更多
关键词 休眠 金胺O 尼罗红 hspx基因 devR基因
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