纳米氧化锌对人胚肺成纤维细胞的生物毒性

【目的】研究化妆品添加剂-氧化锌纳米粒子对正常人胚肺成纤维细胞(HELF)的生物毒性。【方法】采用MTT法检测氧化锌纳米粒子对体细胞存活率的影响;利用光学显微镜评价细胞的形态学变化;电子显微镜观察细胞与纳米氧化锌作用前后表面微结构的变化。【结果】在测试的2.5～150mg·L-1浓度范围内,氧化锌纳米粒子对HELF细胞均有抑制作用,细胞毒性呈明显的剂量依赖效应关系。浓度在20mg·L-1以上时,氧化锌纳米粒子可致使细胞生存率低于10%。荧光显微镜可见典型的细胞凋亡改变。扫描电子显微镜观察到HELF细胞表面与高浓度纳米粒子作用后产生的纳米级孔。【结论】纳米氧化锌粒子由于小尺寸效应和Zn2+自身毒性的协同作用,高浓度时抑制细胞结活性,致使细胞死亡。在化妆品中添加氧化锌纳米粒子作为紫外屏蔽剂时,建议控制浓度为20mg·L-1以下。旨在对化妆品生产企业在功效添加方面起到警示作用,也为卫生监督提供理论依据。

以STO细胞和hELF作为胚胎生殖细胞培养饲养层的比较

目的：比较以STO细胞和人胚胎肺成纤维细胞（hELF）作为饲养层对人胚胎生殖嵴细胞（EG）生长的影响以及经丝裂酶素C处理后的两种饲养层的变化．方法：分离、培养3—4mohELF，观察经丝裂酶素C处理STO细胞和hELF后形态学变化，以STO细胞和hELF作为饲养层培养人EG细胞，计数EG细胞集落的形成率以及免疫组化检测EG细胞表面标志物抗阶段特异性胚胎抗原-1（SSEA-1）和抗阶段特异性胚胎抗原-4（SSEA-4）．结果：经丝裂霉素c处理后hELF较STO细胞生存时间明显长，形态维持更好；以hELF和STO细胞作为饲养层培养人EG细胞，集落形成率没有明显差异；两种饲养层上形成的集落免疫学特征无明显差异．结论：在培养人EG细胞时，hELF饲养层较STO细胞饲养层更有优势．

枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻2BS融合细胞DNA合成的影响

目的 :研究枸杞子、淫羊藿水提液对衰老 -年轻 2BS融合细胞DNA合成的影响。方法 :以人胚肺二倍体成纤维细胞国内标准株 2BS为衰老模型 ,用细胞脱核和细胞融合技术 ,观察枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻 2BS融合细胞的DNA合成的影响。结果 :2BS细胞分别在含 0 0 2 5 (V/V)枸杞子、淫羊藿水提液的DMEM培养液中 ,可连续培养至 6 1 0± 2 9、5 6 0± 2 6代 ,对照组为 4 9 0± 2 6代 (P <0 0 1) ;衰老的 2BS细胞分别用枸杞子、淫羊藿水提液处理 2h后 ,进行细胞脱核并与年轻 2BS细胞融合 ,其〔3H〕TdR掺入百分率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 :枸杞子、淫羊藿均能促进衰老 -年轻 2BS融合细胞的DNA的合成速率 ,延长 2BS细胞寿命。

大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fasmRNA表达的影响。方法用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2.5、0.25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96h凋亡细胞比率;大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg/mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2.5)后上述各时间点凋亡细胞比率。用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0.25)72h后bcl-2和fasmRNA表达强度变化,并与正常细胞和感染细胞对比分析。结果正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2.68%);低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多,凋亡率峰值分别达8.85%(96h)和25.63%(72h);各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加,呈剂量依赖性,峰值分别为4.88%、6.47%和8.35%;但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降,大剂量药物处理72h时效应最为明显,凋亡细胞比率由25.63%降至16.24%。正常细胞高表达bcl-2,低表达fas基因;感染HCMV后,bcl-2表达显著下调,fas表达明显增强;大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞,fas表达水平明显低于感染细胞,但仍未恢复到正常细胞水平。结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂;

小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性。方法原代培养MEF并经细胞免疫组化法鉴定α-SMA的表达情况;收集培养48h无血清高糖DMEM培养基上清并制备条件培养基MEF-CM,根据实验中Lewis肺癌细胞(LLC)细胞培养基不同,分为MEF条件培养基组、DMEM组,应用MTT法检测不同培养基对LLC增殖率的影响;再根据5-Fu作用与否,进一步应用流式细胞仪检测不同培养基对LLC凋亡的影响。结果成功获得原代培养的MEF,表达α-SMA;MEF-CM较DMEM能够明显促进LLC细胞增殖(P<0.05);MEF-CM较DMEM能够明显抑制LLC细胞凋亡,并能够明显拮抗5-Fu的肿瘤杀伤作用(P<0.05)。结论 MEF是一种活化的成纤维细胞,具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性,有促进LLC增殖及抑制凋亡的作用,可以作为肿瘤相关成纤维细胞用于肿瘤微环境的研究。

^(99)Tc^m-N(NOEt)_2在KMB17人胚肺二倍体细胞与不同种类肺癌细胞中的摄取动力学比较

背景与目的PET/CT显像价格昂贵,因此研究适合SPECT/CT的肿瘤显像剂显得尤为重要。99Tcm-N(NOEt)2[99Tcm-氮-二(N-乙基-N-乙氧基二硫代氨基甲酸盐)]可被肺肿瘤细胞等摄取。本文旨在细胞水平对比研究其在KMB17人胚肺二倍体成纤维细胞与多种肺癌细胞中的摄取动力学差异,探讨99Tcm-N(NOEt)2显像对肺肿瘤的鉴别诊断价值。方法在等体积且细胞浓度为1×106/mL的YTMLC个旧人肺鳞癌细胞、SPC-A1人肺腺癌细胞、AGZY低转移人肺腺癌细胞、973人高转移肺腺癌细胞、GLC-82个旧人肺腺癌细胞以及KMB17人胚肺二倍体成纤维细胞的混悬培养液中分别加入等量99Tcm-N(NOEt)2,按300μL精确取样分装于试管中,37oC恒温培养,均分别于5min、15min、30min、45min、60min、75min、90min离心沉淀,测定细胞内放射性计数,计算各时间点各种细胞对99Tcm-N(NOEt)2的摄取百分率。结果6种细胞除SPC-A1细胞与973细胞之间的差异无统计学意义外(LSD-t检验,P=0.838),其余两两之间的差异均有统计学意义(P<0.001);细胞的摄取率大小关系为:973与SPC-A1>YTMLC>GLC-8->AGZY>KMB17;30min-45min时摄取率逐渐趋于平稳,45min摄取率均大于其摄取峰值的96.6%。结论99Tcm-N(NOEt)2显像在肺肿瘤的鉴别诊断中有一定的临床应用价值,且早期显像在30min左右是适合的。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGFβ1、PDGFBB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGFβ1、PDGFBB含量均明显增多(P<0.01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGFβ1、PDGFBB含量显著降低(P<0.01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGFβ1、PDGFBB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGFβ1、PDGFBB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

人巨细胞病毒感染对人胚肺成纤维细胞复制允许因子Cdt1表达的影响

目的研究人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染对人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblast，HELF）复制允许因子Cdt1表达的影响，探讨HCMV感染的发病机制。方法以HCMV感染同步化的HELF作为感染组，同时设模拟感染组为对照组。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Cdt1 mRNA的表达水平。结果模拟感染组在感染后12h时Cdt1 mRNA表达水平最高，后逐渐下降，至72h时达最低水平，96h时又稍回升。感染组在感染后12h时Cdt1 mRNA表达水平较低，24h时稍升高，48h达最高峰，48h后至72h急剧下降，96h时大致维持72h时水平。两组相比，12h、24h和48h时Cdt1 mRNA表达水平差异有显著性（P为0．001～0．030），12h和24h时感染组较模拟感染组明显降低，48h时感染组较模拟感染组明显升高。模拟感染组Cdt1 mRNA表达水平的高峰出现在感染后12h，而感染组的高峰则出现在感染后48h，较之明显滞后。结论HCMV感染使HELF复制允许因子Cdt1 mRNA的表达水平迟滞。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞;另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用ELISA法检测不同组细胞上清液中TNF-α的含量,并进行比较。结果病毒对照组较正常细胞组之TNF-α含量明显增多(P<0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的浓度(P<0.01,P<0.05)。结论腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达增高;清肺口服液可降低TNF-α的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

人参皂甙对不同代龄人胚肺成纤维细胞的增殖及Cyclin D1基因表达的影响

目的 :探讨人参皂甙对衰老的人胚肺成纤维细胞增殖及CyclinD1基因表达的调节作用 ,以进一步研究人参皂甙抗细胞衰老的机制。方法 :用体外培养的人胚肺成纤维细胞为细胞衰老模型 ,通过细胞流式分析、免疫组化及RT PCR方法 ,观察了人参皂甙对成纤维细胞的增殖周期、DNA合成 ,CyclinD1mRNA和蛋白质表达情况。结果 :衰老的成纤维细胞用人参皂甙连续处理 4代后 ,处于G1期的细胞数明显减少 ,进入S期的细胞由 16 7%增加到 33% (P <0 0 5 ) ;CyclinD1mR NA表达比对照组下降 ,CyclinD1蛋白质表达由原来的 77 1± 2 9明显下降为 5 2± 6 3(P <0 0 0 1) ,DNA合成增加 17% (P <0 0 5 )。人参皂甙对低代龄细胞的CyclinD1RNA合成有所增加 ,对CyclinD1蛋白质、DNA的作用影响不大。结论 :人参皂甙对人胚肺成纤维细胞具有双向作用 ,对高代龄细胞具有促进细胞增殖 。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P <0．01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P<0．01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

亚砷酸钠对人胚肺成纤维细胞氧化应激与细胞增殖的影响

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对人胚肺成纤维细胞(HELF)氧化应激与细胞增殖的影响。方法分别将含0.0、10.0、20.0、30.0μmol/L的NaAsO_2染毒HELF细胞24、48、72 h,观察细胞形态学变化,检测NaAsO_2对HELF细胞增殖活力和超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。其中0.0μmol/L的NaAsO_2组为对照组,10.0、20.0、30.0μmol/L的NaAsO_2组为实验组。结果与对照组相比,各浓度NaAsO_2染毒24、48、72 h后细胞抑制率均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HELF细胞抑制率与NaAsO_2浓度和作用时间均呈正相关(P<0.05)。SOD和GSH-PX活性均随NaAsO_2染毒剂量升高而降低,随染毒时间延长而降低,各剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),且都存在剂量时间交互作用(P<0.01)。与对照组相比,各剂量组MDA含量随NaAsO_2染毒剂量升高而升高,随染毒时间延长而升高,差异有统计学意义(P<0.01),存在剂量-时间交互作用(P<0.01)。结论 NaAsO_2可降低HELF细胞增殖活力,降低HELF细胞SOD和GSH-PX活性,抗氧化作用减弱,使氧化代谢产物MDA含量升高。

麻杏石甘汤对3型腺病毒感染HELF部分细胞因子mRNA基因表达的影响

目的:探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA基因表达的影响。方法:以3型腺病毒分别攻击体外培养的HELF,制备麻杏石甘汤含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的mRNA基因表达,进行各组间比较。结果:病毒对照组较正常细胞组之TGF-β1、PDGF-BB、TNF-αmRNA的表达均明显升高(P<0.01),含药血清组对腺病毒攻击后的TGF-β1、PDGF-BB、TNF-αmRNA表达均有显著降低作用(P<0.01)。结论:麻杏石甘汤可下调TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的mRNA表达,这可能是其治疗病毒性肺炎的作用机制之一。

3I、7b型腺病毒感染对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的探讨3I、7b型腺病毒型感染对体外培养的人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA及其蛋白表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,另设正常细胞组。采用酶联免疫吸附试验及原位杂交法检测各组细胞TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA表达。结果3I、7b型病毒感染组较正常细胞组TGF-β1蛋白及mRNA表达均明显增强(Pa<0.01),而3I、7b型病毒感染组间比较无显著性差异(Pa>0.05)。结论肺成纤维细胞和TGF-β1可能参与腺病毒肺炎的发病过程。

富硒麦芽粉水提取物抗人胚肺成纤维细胞衰老的机制

目的研究富硒麦芽粉水提取物是否具有抗人胚肺成纤维细胞衰老的作用。方法过氧化氢处理体外培养的人胚肺成纤维细胞1h，然后加水提取物或预先处理，然后进行检测。CCK8法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及活性氧自由基，衰老相关的β-半乳糖甘酶染色检测细胞衰老，免疫印迹法检测细胞衰老相关的蛋白表达。结果本研究以过氧化氢处理作为细胞衰老的模型，使用富硒麦芽粉水提取物对细胞增殖没有影响的浓度处理后，可明显促进其增殖。进一步研究发现，其作用是降低细胞内活性氧自由基水平，减少衰老阳性细胞，减轻过氧化氢引起的G。期阻滞作用，降低衰老相关蛋白p21的表达。结论富硒麦芽粉水提取物具有较明显的抗人成纤维细胞衰老的作用。

人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞对其细胞周期的影响

目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(human embryoniclung fibroblast,HELF)后对其细胞周期的影响,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的HELF作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后7d。于感染后12h、24h、48h、72h和96h收获细胞,用免疫细胞化学法检测两组细胞核内HCMVIE172蛋白,流式细胞术检测细胞周期。结果模拟感染组未见细胞形态学改变,亦未出现HCMVIE172蛋白阳性产物。感染组感染后72h时即可见局部细胞变圆,膨胀,胞体及胞核巨大化,7d时可见所有细胞均发生病变;免疫细胞化学检测显示,其各时间点的细胞均在核内出现呈棕黄色颗粒的HCMVIE172蛋白。模拟感染组在感染后12h时有65.7%的细胞处于G1期,24h时有43.8%的细胞处于G1期;感染组在感染后12h时有70.4%的细胞处于G1期,24h时有69.9%的细胞处于G1期;两两比较,差异均有显著性(均P<0.01)。结论HCMV感染HELF后在细胞核内进行复制、增殖,其影响了HELF周期,使大部分细胞停滞在G期。

丹参注射液对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡及羟脯氨酸表达的影响

目的:探讨丹参注射液对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡及羟脯氨酸表达的影响。方法:转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞增殖;四甲基偶氮唑蓝法检测丹参注射液对人胚肺成纤维细胞数的影响;免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;比色法观察羟脯氨酸表达。结果:(1)TGF-β1(0、2.5、5、10、20、40μg/L)可剂量依赖性地上调人胚肺成纤维细胞的细胞数。丹参注射液可剂量依赖性下调人胚肺成纤维细胞光密度值。(2)TGF-β1(10μg/L)干预人胚肺成纤维细胞24、48 h时,增殖细胞核抗原表达明显上调,与同时间点对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。但丹参注射液预处理后,未发现增殖细胞核抗原表达下调。(3)流式细胞仪检测结果显示,丹参注射液预处理后,与TGF-β1组相比,细胞凋亡率增加(P<0.05)。(4)丹参注射液可下调人胚肺成纤维细胞羟脯氨酸表达,与TGF-β1组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:丹参注射液可靶向人胚肺成纤维细胞,通过促进其凋亡、下调羟脯氨酸表达影响气道重塑。

甲基丙烯酸环氧丙酯体外诱导的人胚肺成纤维细胞DNA链断裂

甲基丙烯酸环氧丙酯 (GMA)导致人胚肺成纤维细胞 (HELFs)恶性转化及其潜在致癌机理尚未阐明 .本研究用 0 .5- 5.0 mg· L-1的 GMA给体外培养的 HELFs染毒 2 h和 1 2 h,或用 5.0 mg· L-1的 GMA染毒 1 5min- 2 4 h,应用单细胞凝胶电泳技术 (彗星试验 )对 GMA引起的 HELFs DNA断裂作用进行了初步探讨 .琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测等方法观察了 GMA对细胞凋亡的诱导作用 .结果表明 ,GMA可导致染毒细胞 DNA发生剂量和时间依赖性链断裂 .用 5.0 mg· L-1的 GMA染毒后仅 1 h断裂作用即已显著 ,并随染毒时间延长而递增 ,至 2 4 h时损伤最为严重 .但在同样条件下未观察到 GMA对细胞凋亡的诱导作用 .结果提示 GMA导致的非凋亡性 DNA链断裂可能是其诱导

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1、PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的观察清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)mRNA基因表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测TGF-β1、PDGF-BBmRNA基因的表达,进行各组间比较。结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达均明显升高(P<0.01),含药血清组对3I、7b型攻击后的TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达均有显著降低作用(P<0.01)。结论清肺口服液可下调TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

过表达环状RNA泛素连接酶E3(circHERC4/hsa_circ_0007113)抑制细胞衰老的研究

目的研究泛素连接酶E3的环状RNA(circHERC4/hsa_circ_0007113)与人胚肺成纤维细胞(IMR-90)的衰老的关系。方法从circBase数据库上获得环状RNA circHERC4的全基因序列,将其克隆到环状RNA表达载体pLC5-ciR中,体外构建重组体pLC5-ciR(+)hsa_circ_0007113,经PCR、酶切、测序等对重组质粒进行鉴定。利用脂质体2000转染试剂将重组质粒转染到HEK293T和IMR90细胞中,并利用RT-PCR检测正常细胞组、空载体组及重组载体组中环状RNA circHERC4的表达情况;SA-β-gal染色检测各组细胞衰老情况;CCK-8法检测各组细胞增殖情况。结果测序正确,成功构建了环状RNA circHERC4的过表达载体,circHERC4可在HEK293T细胞中高效表达。与对照组相比,重组载体组的SA-β-gal染色阳性率降低(P<0.05),细胞增殖率升高(P<0.05)。过表达circHERC4后能提高IMR90细胞的增殖,抑制细胞的衰老。结论circHERC4具有潜在的抗衰老作用,为深入研究circHERC4的功能奠定了基础。