应用RNAi技术沉默大转录本基因LRP1B

低密度脂蛋白受体相关蛋白1B(Lipoprotein receptor-related protein 1 B,LRP1B)是脂蛋白受体家族庞大受体亚群的成员之一,LRP1B基因编码一个长达16.5 kb的大转录本。由于LRP1B的转录产物过大限制了其功能研究。为研究LRP1B基因与肿瘤转移的相关性,文章应用RNAi技术特异地封闭了LRP1B基因的表达。在设计siRNA过程中,根据高效siRNA序列特征和靶序列处的mRNA二级结构特点,对LRP1B基因多达1100个的siRNA候选靶序列进行双重评价,最终在基因转录本的不同位置选取了6个siRNA靶位点。针对这些靶位点,文章构建了6个表达shRNA的pSilencer4.1重组体,稳定转染HEK 293细胞并采用半定量RT-PCR检测各表达载体的沉默效果。结果表明,所构建的6个shRNA-pSilencer4.1重组体中有5个对LRP1B基因形成了有效沉默(>50%),并得到了多个完全封闭LRP1B基因表达的HEK 293细胞单克隆。