还原型谷胱甘肽对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶表达的影响

目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(r OGG1)表达的影响,探讨其对高糖所致腹膜间皮细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法将60只健康雄性SD大鼠按随机数字法分成3组:对照组(n=20,A组):每天1次腹腔注射生理盐水25 ml;模型组(n=20,B组):每天1次腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液25 ml+每周1次腹腔注射乳酸红霉素6.25万IU;治疗组(n=20,C组):每天1次腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液25 ml+GSH溶液150 mg/(kg·d)+每周1次腹腔注射乳酸红霉素6.25万IU。8周后分别处死每组各20只大鼠,取腹膜组织分别行HE及Masson染色病理学检查、酶联免疫吸附法(ELISA)测定壁层腹膜间皮细胞8-OHd G水平、实时荧光定量PCR检测壁层腹膜间皮细胞r OGG1的表达。结果 1与A组比较,B组腹膜间皮细胞8-OHd G表达上调(0.8843±0.0068,5.0733±2.0068,P<0.05),C组8-OHd G表达低于B组(5.0733±2.0068,1.6867±0.4867,P<0.05);2与A组比较,B组腹膜间皮细胞r OGG1表达减少(0.7576±0.0701,0.2226±0.0565,P<0.05),C组r OGG1表达增高(0.7576±0.0701,1.4793±0.3895,P<0.05);3与A组比较,HE染色时B组和C组可见腹膜间皮细胞变为圆形、柱形,间皮细胞肥大脱落,间皮下结缔组织明显增厚,可见血管生成以及纤维素样物质沉积,还可见成纤维细胞及单核巨噬细胞浸润,在B组表现尤为明显;4与A组比较,Masson染色显示腹膜组织有胶原沉积,B组比C组改变更明显。结论高糖致大鼠腹膜间皮细胞DNA氧化性损伤标记物8-OHd G表达增高,GSH可能通过上调DNA修复酶OGG1m RNA表达,对大鼠腹膜间皮细胞DNA具有保护和修复作用。

基于分子信标对hOGG1活性的定量分析

设计了一种含有8-oxoG碱基的新型分子信标,结合酶促反应发展了一种非同位素标记的人8-oxoG-鸟嘌呤糖苷酶1(hOGG1)的活性分析新方法,检出限可达0.0125 U/mL.此外,该方法还可用于快速考察金属离子对酶促反应的影响和肿瘤细胞中hOGG1活性水平的定量检测.实验结果表明,该方法简单、灵敏,有望用于肿瘤样品中hOGG1活性的高通量分析和hOGG1抑制剂的筛选.

hOGG1在小细胞肺癌中的表达特点及其与预后的关系

目的探讨人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human 8-hydroxyguanine deoxyribonucleic acid glycosidase,hOGG1)在小细胞肺癌中的表达特点及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化检测71例小细胞肺癌组织和30例正常肺组织中hOGG1的表达,按细胞阳性百分数及染色强度将其分为低表达组和高表达组,并分析hOGG1在小细胞肺癌表达与临床病理及患者预后的关系。结果正常肺组织与小细胞肺癌组织中均有hOGG1表达,但正常肺组织以细胞质表达为主(60.0%),而小细胞肺癌组织以核质共表达为主(49.3%),两者亚细胞定位有明显差异(P<0.01);在hOGG1表达高低方面,正常肺组织100%为低表达,而小细胞肺癌组织78.9%为高表达,两者间也存在明显差异(P<0.01);hOGG1的表达与患者的性别、肿瘤分期、吸烟指数、有无淋巴结转移及有无胸水无明显关系(P>0.05);Kaplan-Meier分析显示hOGG1的表达强弱与患者的预后明显相关(P<0.05),hOGG1低表达组中位生存时间为23个月,hOGG1高表达组中位生存时间为13个月。COX比例风险模型分析结果提示hOGG1是影响患者生存的独立预后因素(P=0.004)。结论 hOGG1蛋白核质共表达为主的高表达与小细胞肺癌的发生及发展有关,hOGG1蛋白表达增强可能是小细胞肺癌患者预后不良的指标之一。

2,2',4,4'-四溴联苯醚对视黄醛受体和雌激素受体的影响

目的:探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(BDE-47)对视黄醛受体(RXRα)和雌激素受体(ERα,ERβ)的影响,为阐明多溴联苯醚化合物神经内分泌干扰效应提供科学依据。方法:采用CCK-8法测定BDE-47对慢病毒转染技术构建的稳定高表达和低表达RXRα的MCF-7细胞系及正常细胞系的细胞毒性;并以BDE-47分别处理3种细胞,采用TBA法、XOD法及RT-PCR法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量及人类8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(hOGG1)mRNA表达量,采用RT-PCR和Western blot分析其对3种细胞系RXRα、ERα和ERβ的mRNα及蛋白表达的影响。结果:BDE-47对MCF-7细胞系具有明显的细胞毒性作用,作用24 h时,对RXRα正常表达、高表达和低表达的MCF-7细胞的半数抑制浓度(IC_(50)分别为23.15、82.78、30.16μmol/L;BDE-47可造成3种细胞的氧化损伤,RXRα受体高表达细胞对BDE-47的细胞毒性耐受性明显高于另外两种细胞,可一定程度提高细胞抗氧化损伤能力。BDE-47对3种细胞RXRα的表达有明显的抑制作用,可诱导RXRα正常表达与低表达细胞中ERα受体的表达增强、ERβ受体的表达降低;而在RXRα高表达细胞中ERα受体的表达降低、ERβ受体的表达增强,两种雌激素受体表达变化相反。结论:BDE-47可能抑制RXRα受体表达,继而干扰ERα、ERβ两种受体的表达和二者间的平衡,从而发挥其神经内分泌毒性效应。

食管鳞癌XRCC3和HOGG1表达与放疗预后相关性分析

目的探讨食管鳞状细胞癌（ESCC）癌组织中x射线修复交叉互补基因3（XRCC，）和人类8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1（HOGG，）的蛋白表达与ESCC放疗预后相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测治疗前171例ESCC组织标本中XRCC1、HOGG，蛋白表达。Kaplan-Meier法生存分析并Logrank法检验表达阴、阳性间生存差异，Cox模型多因素预后分析。结果随访率为87．2％，其中随访时间满1、2、3年者分别为140、136、129例。XRCC，主要表达于细胞核，HOGG．主要表达于细胞核与线粒体，两者符合程度达72．5％（妒=23．94，P=0．000）。XRCC，表达阳、阴性的近期疗效相似（X2=0．98，P=0．614），生存率也相似，中位生存期均为54个月（X2=0．17，P=0．683），HOGG，表达阳、阴性近期疗效相似（X2=0．26，P=0．880），生存率也相似，中位生存期均为49个月（X2=0．08，P=0．780）。多因素分析结果显示疗效评价、病变长度与ESCC预后相关（妒=7．99、3．76，P=0．005、0．045）。结论XRCC3、HOGG1的蛋白表达与ESCC放疗预后可能无关。