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Unravelling Antimicrobial Resistance Phenotypes and Carriage of Extended-Spectrum β-Lactamase Genes in Escherichia coli Isolated from Dairy Farms in Kiambu County, Kenya
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作者 Dan Waithiru John Mwaniki Njeru +4 位作者 John M. Maingi Erastus Mulinge Benjamin Ngugi John Maina John Kiiru 《Advances in Microbiology》 2022年第5期295-315,共21页
The use of antibiotics for prophylaxis and growth enhancement in livestock farming is on the increase globally. This practice has led to the emergence and spread of antimicrobial-resistant bacteria in livestock. Only ... The use of antibiotics for prophylaxis and growth enhancement in livestock farming is on the increase globally. This practice has led to the emergence and spread of antimicrobial-resistant bacteria in livestock. Only limited research has been done to establish the role of cattle farming in antimicrobial resistance. The current study sought to establish the carriage of multi-drug resistance and extended-spectrum beta-lactamase genes in Escherichia coli from farmers, their cattle, and cattle slurry within Kiambu County. A total of 286 (81%) E. coli isolates were recovered from 352 samples analysed. Antibiotic resistance profiles showed 114 (40%) isolates were resistant to ≥3 antimicrobial classes and were considered multidrug-resistant. Among multidrug-resistant (MDR) E. coli strains, 40 (14%) were resistant to 3 different antimicrobial classes, while 71 (25%) were resistant to between 4 and 7 antibiotic classes. Extended-spectrum β-lactamase resistance was found in 18 isolates: human (n = 14), cattle (n = 2), and environmental (n = 2). Both the bla<sub>CTX-M</sub> and bla<sub>TEM</sub> genes were detected in 10 and 15 strains, respectively. Sequence analysis showed that the isolates carried the bla<sub>TEM-116</sub> (n = 7), bla<sub>TEM-1</sub> (n = 5), and bla<sub>CTX-M-15</sub> (n = 8) genes. Genotyping MDR isolates using (GTG) <sub>5</sub> PCR demonstrated that the isolates were not clonal. This data shows antimicrobial resistance profiles and different types of resistance genes in the E. coli population on dairy farms. As a result, more effective, targeted public health policies and measures need to be put in place to control and prevent the emergence and spread of resistant bacteria. 展开更多
关键词 humans Cattle Slurry escherichia coli Multidrug Resistance Extended-Spectrum β-Lactamase (ESBL) TEM 116 CTX-M-15 Kenya
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A Compendium of Shigatoxigenic <i>Escherichia coli</i>: Origins, Bacteriological and Clinical Data on the Serogroups, Serotypes and Untypeable Strains of <i>E. coli</i>Reported between 1980 and 2017, Excluding O157:H7
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作者 Karl A.Bettelheim Paul N.Goldwater 《Advances in Microbiology》 2019年第11期905-909,共5页
The purpose of this paper was to create a compendium of serogroups, serotypes and untypeable strains of Shigatoxigenic/verotoxigenic (STEC/VTEC) Escherichia coli. The compendium includes the origins, bacteriological a... The purpose of this paper was to create a compendium of serogroups, serotypes and untypeable strains of Shigatoxigenic/verotoxigenic (STEC/VTEC) Escherichia coli. The compendium includes the origins, bacteriological and clinical data on this important group of microbes. The collection of STEC/VTEC data extends from 1980 to 2017, and excludes STEC/VTEC O157:H7. A total of 499 papers were discovered and documented to create the compendium which includes all the serogroups and serotypes beginning with serogroup O1 through to serogroup O211 and includes O non-typeable strains and ill-defined strains including serotype O"54071":H7. The paper summarises the findings of 8010 E. coli isolates and includes all details including source (human or animal), and clinical condition/disease, serogroup and serotypes, country of origin, year reported, and the author(s) with cited references. Some twenty clinical conditions were shown in association with 4320 serotypes/and untypeable strains. The compendium is a record of an important group of STEC/ VTEC and should provide a useful resource for both researchers and clinicians. 展开更多
关键词 Shigatoxigenic escherichia coli Verotoxigenic escherichia coli STEC VTEC human DISEASE Animal DISEASE
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重组人肿瘤坏死因子(hTNF-α)在大肠埃希菌[E.coli BL21(DE3)]中表达条件的优化
3
作者 靳占奎 王曦 +2 位作者 杨乐 徐翠香 张丽洁 《现代检验医学杂志》 CAS 2017年第5期100-103,107,共5页
目的构建人肿瘤坏死因子(hTNF-α)表达质粒,并对其进行鉴定,优化hTNF-α蛋白表达条件使之在大肠埃希菌中实现高效表达。方法应用PCR扩增技术获得hTNF-α基因片段并进行相应的鉴定,将鉴定后的hTNF-α基因克隆到pET24a载体中,获得pET24a-h... 目的构建人肿瘤坏死因子(hTNF-α)表达质粒,并对其进行鉴定,优化hTNF-α蛋白表达条件使之在大肠埃希菌中实现高效表达。方法应用PCR扩增技术获得hTNF-α基因片段并进行相应的鉴定,将鉴定后的hTNF-α基因克隆到pET24a载体中,获得pET24a-hTNF-α表达质粒。将此质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,并对其表达条件进行优化。结果成功构建了pET24a-hTNF-α质粒,PCR和酶切技术进行鉴定,结果显示与目的片段一致。将此质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,得到最佳表达条件为:M9+LB培养基,37℃,0.5 mmol/L IPTG,pH值=7.5,诱导时间为5 h。优化后的菌体干重增高了2.56倍,hTNF-α产率增加3.68倍,hTNF-α表达率从9.38%增加到32.74%,增高了3.49倍。结论优化了pET24a-hTNF-α质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达条件,使hTNF-α蛋白得到高效表达。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子Α 质粒 大肠埃希菌 基因克隆
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人工蛋白XXA促进人源肿瘤抑素Tumstatin可溶性表达
4
作者 敖龙 朱玲玉 +7 位作者 庞欣 辛瑜 郭忠鹏 朱瑞 李默影 顾正华 郭自涛 张梁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1-8,共8页
为实现人源肿瘤抑素Tumstatin在大肠杆菌中的可溶性表达,构建了5种不同促溶性融合标签与tumstatin基因融合表达的重组大肠杆菌BL21(DE3),利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组菌进行摇瓶发... 为实现人源肿瘤抑素Tumstatin在大肠杆菌中的可溶性表达,构建了5种不同促溶性融合标签与tumstatin基因融合表达的重组大肠杆菌BL21(DE3),利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组菌进行摇瓶发酵,利用SDS-PAGE和Western-Blot分析并筛选出能可溶性表达Tumstatin蛋白的重组菌。构建的重组菌中BL21/pGEX-6p-1-Tum(含谷胱甘肽巯基转移酶标签—GST标签)、BL21/pET28a-MBP-Tum(含麦芽糖结合蛋白标签—MBP标签)、BL21/pET28a-Tum(无标签)都是以包涵体的形式表达融合蛋白Tumstatin,只有重组菌BL21/pET28a-XXA-Tum(含抗冻蛋白的反向蛋白—XXA标签)能以可溶性的形式表达融合蛋白且目的蛋白占菌体总蛋白45%以上。利用亲和层析对目的蛋白进行纯化并进行Western-Blot分析,得到分子质量为50.9 kDa的目的条带,与理论分子质量一致。进一步对重组菌BL21/pET28a-XXA-Tum的诱导剂添加浓度、诱导剂添加时间、诱导温度、诱导时间诱导条件进行优化。最终选择Tumstatin融合蛋白诱导条件为:诱导剂浓度0.1 mmol/L、2 h添加诱导剂、诱导温度16℃、诱导时间36 h。人源肿瘤抑素在大肠杆菌中可溶性表达为大量制备可溶性人源肿瘤抑素奠定了基础,可为功能性多肽在大肠杆菌中的可溶性表达提供借鉴。 展开更多
关键词 人源肿瘤抑素 大肠杆菌 可溶性表达 融合标签 抗冻蛋白的反向蛋白
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Expression and purification of bioactive high-purity human midkine in Escherichia coli 被引量:2
5
作者 Zhong-hui ZHANG Li-juan DU +5 位作者 Di XIANG Shun-ying ZHU Ming-yuan WU Hui-li LU Yan YU Wei HAN 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2009年第2期79-86,共8页
Midkine is a heparin-binding growth factor, which plays important roles in the regulation of cell growth and differentiation. The non-tagged recombinant human midkine (rhMK) is therefore required to facilitate its f... Midkine is a heparin-binding growth factor, which plays important roles in the regulation of cell growth and differentiation. The non-tagged recombinant human midkine (rhMK) is therefore required to facilitate its functional studies of this important growth factor. In the present work, rhMK was expressed in Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3). The expression of midkine was efficiently induced by isopropyl-13-D-thiogalactopyranoside (IPTG). After sonication, midkine was recovered in an insoluble form, and was dissolved in guanidine hydrochloride buffer. Renaturation of the denatured protein was carried out in the defined protein refolding buffer, and the refolded protein was purified using S-Sepharose ion-exchange chromatography. The final preparation of the rhMK was greater than 98% pure as measured by sodium dodecylsulfate-polyacrylamid gel electrophoresis (SDS-PAGE) and reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC). The purified rhMK enhanced the proliferation of NIH3T3 cells. 展开更多
关键词 Exnression. Purification. human midkine. escherichia coli
原文传递
(His)_6-Arg-Arg-人胰岛素原在大肠杆菌中的高效表达(英文) 被引量:4
6
作者 李晓红 余蓉 +2 位作者 曾蓉 彭先凤 杨继虞 《药物生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期144-148,共5页
为了提高胰岛素原的表达量 ,用pQE 40质粒构建了 (His) 6 Arg Arg 人胰岛素原 [(His) 6 Arg Arg humanProinsulin ,RRhPI]的大肠杆菌表达系统。通过培养条件的优化 ,在摇瓶培养的条件下 ,目标产物RRhPI以包涵体形式获得了高效表达 ,每... 为了提高胰岛素原的表达量 ,用pQE 40质粒构建了 (His) 6 Arg Arg 人胰岛素原 [(His) 6 Arg Arg humanProinsulin ,RRhPI]的大肠杆菌表达系统。通过培养条件的优化 ,在摇瓶培养的条件下 ,目标产物RRhPI以包涵体形式获得了高效表达 ,每升培养基收获湿菌体约 2 7g ,包涵体 6g(干重 1 .8g) ,RRhPI约5 4 0mg。该水平已超过现有文献报道的摇瓶培养的最高水平。 展开更多
关键词 人胰岛素原 大肠杆菌 表达
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重组人血管生长素基因工程菌发酵条件的初步研究 被引量:5
7
作者 林白雪 王捷 +3 位作者 张宏斌 武婕 郭勇 郑文岭 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2003年第3期123-126,共4页
目的研究表达重组人血管生长素 (rhANG)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵 ,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响 ,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用E .coliCDH为宿主菌 ,在SOB培养... 目的研究表达重组人血管生长素 (rhANG)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵 ,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响 ,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用E .coliCDH为宿主菌 ,在SOB培养基中培养至A6 0 0nm 为 0 .5~ 0 .6时 ,诱导表达 5h ,rhANG表达量最高达 30 %。重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。结论此发酵条件可以较好地提高rhANG的表达量 。 展开更多
关键词 重组人血管生长素 基因工程菌 发酵 质粒稳定性
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人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的表达及鉴定 被引量:4
8
作者 方宏清 戴红梅 +5 位作者 李彦英 赵洪亮 刘志敏 朱厚础 马清钧 陈惠鹏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期102-106,共5页
化学合成人甲状旁腺激素 (hPTH)全长基因 ,克隆到大肠杆菌表达载体pBV2 2 0和pET2 2b中 ,获得了高表达。经破菌、阳离子交换层析、反相层析纯化获得了纯度大于 95 %的纯品。N端测序、质谱分析结果表明重组hPTH结果完整 ,N端无Met或fMet... 化学合成人甲状旁腺激素 (hPTH)全长基因 ,克隆到大肠杆菌表达载体pBV2 2 0和pET2 2b中 ,获得了高表达。经破菌、阳离子交换层析、反相层析纯化获得了纯度大于 95 %的纯品。N端测序、质谱分析结果表明重组hPTH结果完整 ,N端无Met或fMet。生物活性试验证明重组hPTH具有激活腺苷酸环化酶、增加骨质量和骨密度等作用。 展开更多
关键词 人甲状旁腺激素 大肠杆菌 表达 鉴定
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重组人骨形成蛋白-2在大肠杆菌中的表达、纯化和复性(英文) 被引量:9
9
作者 孙奋勇 汪炬 +3 位作者 孙晋华 戴云 邱垂源 洪岸 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1480-1485,共6页
目的:通过对大肠杆菌表达重组人骨形成蛋白-2的复性研究,得到高活性的重组人骨形成蛋白-2。方法:在大肠杆菌中通过温度诱导表达重组人骨形成蛋白-2经过Triton X-100清洗之后,又通过DEAE离子交换层析纯化包涵体,包涵体在8 mol/L尿素变性... 目的:通过对大肠杆菌表达重组人骨形成蛋白-2的复性研究,得到高活性的重组人骨形成蛋白-2。方法:在大肠杆菌中通过温度诱导表达重组人骨形成蛋白-2经过Triton X-100清洗之后,又通过DEAE离子交换层析纯化包涵体,包涵体在8 mol/L尿素变性溶解,在氧化-还原(还原型和氧化型谷胱甘肽)复性系统中,通过简单的稀释复性,通过肝素亲和层析一步纯化法纯化重组人骨形成蛋白-2 ,最后通过诱导C2C12细胞产生碱性磷酸酶检测重组人骨形成蛋白-2活性。结果:温度诱导表达重组人骨形成蛋白-2是以包涵体单体的形式存在,经过几步纯化后,得到高纯度的包涵体。重组人骨形成蛋白-2在不同氧化-还原剂比例,和不同小分子化学辅助剂浓度中复性,得到复性的效率也不同。亲和层析纯化后,本实验得到重组人骨形成蛋白-2的生物学活性比商业化的重组人骨形成蛋白-2更高。结论:重组人骨形成蛋白-2属于转化因子-β家族,此复性方法可能应用于此家族的其他成员同时得到成本低、产量高的重组人骨形成蛋白-2 ,可能为临床应用创造了良好的条件。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白质类 大肠杆菌 人类
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人血管生长素重组大肠杆菌发酵条件优化 被引量:2
10
作者 林白雪 王捷 +2 位作者 张宏斌 武婕 郭勇 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期380-382,共3页
考察了 Mg2 + 、Ca2 + 、NH+4、PO3-4等无机离子、初始 p H、装液量以及诱导前添加葡萄糖对重组大肠杆菌表达rh ANG和菌体生长的影响。经过优化 ,rh ANG表达量提高约 39% ,菌体干重达 1.5 9g/ L ,为工程菌发酵的扩试提供了参考。
关键词 人血管生长素 重组大肠杆菌 发酵条件
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重组人血小板生成素在大肠杆菌中表达的研究 被引量:3
11
作者 赵东 卢柏松 +2 位作者 陈琳 柳晓兰 黄培堂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期19-23,共5页
采用化学法全合成了编码人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)成熟肽N端153氨基酸的基因序列,构建基于该合成基因的表达质粒,结果以谷胱甘肽转硫酶-TPO153(GST-TPO153)融合蛋白的方式获得... 采用化学法全合成了编码人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)成熟肽N端153氨基酸的基因序列,构建基于该合成基因的表达质粒,结果以谷胱甘肽转硫酶-TPO153(GST-TPO153)融合蛋白的方式获得了占全菌蛋白40%的高效表达.进一步采用PCR方法分别对TPO合成基因及TPOcDNA的翻译起始区(TIR)序列进行定点突变,以降低这一区域的G-C含量.将突变序列分别插入到pBV220表达载体中,重组质粒在转化大肠杆菌JM109后,均获得了表达,其中TIR区突变后的合成基因表达产物约占全菌蛋白的15%.为研究基因下游结构对表达的影响,在不改变氨基酸组成的基础上,构建了TPO合成基因与TPOcDNA的杂合序列表达质粒.研究结果表明翻译起始效率是影响rh-TPO在大肠杆菌中表达的重要因素之一,同时基因下游序列的组成对表达水平也会产生影响. 展开更多
关键词 人血小板生成素 大肠杆菌 基因表达
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健康人大肠埃希菌中Ⅰ类整合酶基因IntI1定位分析 被引量:3
12
作者 张弘 刘衡川 +2 位作者 贺雄 陈丽娟 张铁钢 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第6期1004-1006,共3页
目的:了解健康人大肠埃希菌中Ⅰ类整合子基因定位情况,探讨其在细菌耐药性获得与传递中的作用。方法:采用质粒接合实验和斑点杂交实验。结果:64.3%的整合子位于接合性质粒上,35.7%位于染色体或其他非接合性质粒中。结论:本文研究的整合... 目的:了解健康人大肠埃希菌中Ⅰ类整合子基因定位情况,探讨其在细菌耐药性获得与传递中的作用。方法:采用质粒接合实验和斑点杂交实验。结果:64.3%的整合子位于接合性质粒上,35.7%位于染色体或其他非接合性质粒中。结论:本文研究的整合子阳性菌株对耐药基因的捕获主要是通过接合性质粒介导的,造成耐药基因的水平播散。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 整合酶 质粒接合 斑点杂交
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重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析 被引量:8
13
作者 阳菊华 赵丽 +3 位作者 杨爽 吴双庆 张杰 朱天慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期556-560,共5页
利用RT_PCR从人胎盘组织中获取BMP_6成熟肽的cDNA片段 ,并克隆到表达载体pET_15b中 ,构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET_BMP6 ,转化E .coliBL2 1(DE3)。IPTG诱导 4h后 ,工程菌高表达rhBMP_6成熟肽 ,在SDS_PAGE上出现预期的新蛋白... 利用RT_PCR从人胎盘组织中获取BMP_6成熟肽的cDNA片段 ,并克隆到表达载体pET_15b中 ,构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET_BMP6 ,转化E .coliBL2 1(DE3)。IPTG诱导 4h后 ,工程菌高表达rhBMP_6成熟肽 ,在SDS_PAGE上出现预期的新蛋白带 (≈ 15kD) ,约占菌体总蛋白的 10 % ,表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于 8mol L尿素 ,在变性溶解状态下经阳离子交换层析 ,得到目的蛋白纯度达 95 %以上。再经稀释复性后 ,约 80 %的rhBMP_6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示 :rhBMP_6可以提高C3H10T1 2细胞碱性磷酸酶活性及促进I型胶原、Osterix(Osx)和骨钙素 (Osteocalcin)等成骨细胞表型转化标记基因mRNA的表达 。 展开更多
关键词 重组 人骨形态发生蛋白-6 表达 纯化 活性
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人血小板因子4在大肠杆菌中的高效表达及活性研究 被引量:3
14
作者 张俊芳 韩兵社 +3 位作者 解军 胡晓年 牛勃 程牛亮 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第5期73-77,共5页
为了提高人血小板因子 4(humanplateletfactor 4,hPF4)的表达 ,在PT7 7 hPF4表达质粒的基础上 ,采用PCR定位突变技术 ,改造人血小板因子 4(hPF4)cDNA基因片段 ,去除cDNA 3′端非翻译区AT富含序列 ,改用大肠杆菌强串联终止密码子TAATAA ... 为了提高人血小板因子 4(humanplateletfactor 4,hPF4)的表达 ,在PT7 7 hPF4表达质粒的基础上 ,采用PCR定位突变技术 ,改造人血小板因子 4(hPF4)cDNA基因片段 ,去除cDNA 3′端非翻译区AT富含序列 ,改用大肠杆菌强串联终止密码子TAATAA ,成功构建了高效表达质粒pBV2 2 0 hPF4。摇瓶发酵重组人血小板因子 4的产量达 1 60mg L较原表达质粒PT7 7 hPF4表达量提高了近 80倍。经包涵体的洗涤、变性、复性后 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制实验测定复性后rhPF4的生物学活性 ,结果显示 :rhPF4具有抑制血管生成活性。 展开更多
关键词 人血小板因子4 大肠杆菌 表达 活性 质粒 血管生成抑制
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HPV16L1E7的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:2
15
作者 卢翌 卞继峰 +6 位作者 于修平 耿昭 胡海燕 刘师莲 刘传华 王晓明 王伟 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2003年第2期112-115,共4页
目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)的主要衣壳蛋白L1和主要的转化蛋白E7的融合基因在原核细胞中的表达,为研制HPV16L1E7疫苗和诊断试剂盒提供依据。方法:采用聚合酶链反应(PCR)以重组质粒pUC19L1E7为模板扩增HPV16L1E7基因片段,克隆至载体pMD1... 目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)的主要衣壳蛋白L1和主要的转化蛋白E7的融合基因在原核细胞中的表达,为研制HPV16L1E7疫苗和诊断试剂盒提供依据。方法:采用聚合酶链反应(PCR)以重组质粒pUC19L1E7为模板扩增HPV16L1E7基因片段,克隆至载体pMD18-T中,并用限制性内切酶将HPV16L1E7基因切下,克隆至原核表达质粒pQE30中,经IPTG诱导表达,再使用SDS-PAGE和蛋白印迹检测其抗原性和表达水平。结果:HPV16L1E7融合蛋白能被抗HPV16L1抗体识别,分子量为66KD,经IPTG诱导4h后,表达的HPV16L1E7融合蛋白占菌体总蛋白量的25%以上。结论:成功构建的表达载体pOE30-L1E7可在原核表达细胞中高效表达,且表达出的HPV16L1E7融合蛋白具有反应活性,可与HPV16抗体发生反应。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 克隆 分子 大肠杆菌 基因表达
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重组人甲状旁腺激素肽(1-34)在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化 被引量:2
16
作者 李健峰 肖红剑 +5 位作者 姬秋彦 李智华 龙海亭 阎玲梅 罗娜 徐维明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期26-30,共5页
人工合成人甲状旁腺激素1~34肽段(PTH134)的cDNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pThioHis中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、金属螯合层析、反相层析和凝胶层析后获得了纯度大于95%的hPTH134,hPTH134肽N端测序和质谱分子量测定结果... 人工合成人甲状旁腺激素1~34肽段(PTH134)的cDNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pThioHis中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、金属螯合层析、反相层析和凝胶层析后获得了纯度大于95%的hPTH134,hPTH134肽N端测序和质谱分子量测定结果与天然PTH134一致。生物学活性研究表明,hPTH134在体外具有刺激腺苷酸环化酶的作用。 展开更多
关键词 人甲状旁腺激素 大肠杆菌 融合表达
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用重组大肠杆菌发酵生产人生长激素研究 被引量:6
17
作者 杨少民 陈方 +2 位作者 付永标 张志红 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期13-15,共3页
通过不同培养基、不同糖浓度对重组菌E.coliDH10B/pINⅢA3HGH的菌体生长与外源蛋白表达量的影响的比较,确定较为合适的培养条件,并对发酵过程中调节pH的氨水用量与外源蛋白的表达量之间的相关性作探索,得... 通过不同培养基、不同糖浓度对重组菌E.coliDH10B/pINⅢA3HGH的菌体生长与外源蛋白表达量的影响的比较,确定较为合适的培养条件,并对发酵过程中调节pH的氨水用量与外源蛋白的表达量之间的相关性作探索,得到相关性曲线,从而根据氨水用量了解细菌的生长状况。 展开更多
关键词 大肠杆菌 发酵 人生长激素
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重组大肠杆菌分批-补料培养生产类人胶原蛋白的过程控制 被引量:5
18
作者 骆艳娥 范代娣 +2 位作者 花秀夫 张兮 王小刚 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期180-183,共4页
目的优化重组大肠杆菌高密度发酵的调控工艺。方法通过考察比生长速率、3种控氧方式以及诱导强度对细胞和类人胶原蛋白产量的影响,确定最佳的发酵工艺。结果比生长速率显著影响类人胶原蛋白的产量,且最适比生长速率为0.15~0.20h-1;在... 目的优化重组大肠杆菌高密度发酵的调控工艺。方法通过考察比生长速率、3种控氧方式以及诱导强度对细胞和类人胶原蛋白产量的影响,确定最佳的发酵工艺。结果比生长速率显著影响类人胶原蛋白的产量,且最适比生长速率为0.15~0.20h-1;在提高罐压的条件下,细胞和类人胶原蛋白的浓度均显著高于其他两种控氧方式,充入富氧空气的细胞和类人胶原蛋白的浓度均最低;诱导强度对细胞生长和蛋白质表达的影响非常大,当细胞浓度达47±2g/L(DCW)时,开始升温至42℃进行诱导,最佳条件为42℃保温2~3h,然后降温至39℃继续培养5~6h。结论通过优化重组大肠杆菌分批补料培养生产类人胶原蛋白的工艺,使得细胞和类人胶原蛋白浓度分别达68.94g/L(DCW)和13.02g/L。 展开更多
关键词 类人胶原蛋白 重组大肠杆菌 半分批.补料培养 比生长速率 控氧方式 温度诱导
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人胰岛素原在基因工程菌中的高效表达 被引量:1
19
作者 李红霞 余蓉 李晓红 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期14-17,共4页
目的 构建RRhPI-pQE4. 0E .coliM15表达系统 ,以高效表达 (His) 6 -Arg -Arg -人胰岛素原。方法 正交法优化发酵条件 ,通过湿菌体收率、包涵体收率及发酵液A60. 0 的测定对优化结果进行评估 ,并进一步分析发酵过程中主要因素对高密度... 目的 构建RRhPI-pQE4. 0E .coliM15表达系统 ,以高效表达 (His) 6 -Arg -Arg -人胰岛素原。方法 正交法优化发酵条件 ,通过湿菌体收率、包涵体收率及发酵液A60. 0 的测定对优化结果进行评估 ,并进一步分析发酵过程中主要因素对高密度发酵和高效表达的影响。结果 发酵条件优化后 ,每升发酵培养基可得湿菌体约 4 3g ,包涵体约 14g(湿重 )。结论 优化发酵条件可使湿菌体及包涵体的收率提高。 展开更多
关键词 收率 发酵条件 基因工程菌 菌体 发酵培养基 发酵液 人胰岛素 包涵体 高效表达 E.coli
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重组人碱性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的高效表达 被引量:1
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作者 汪炬 孙奋勇 +2 位作者 陈小佳 张玲 洪岸 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期48-51,共4页
利用基因改造的方法可以优化外源基因在大肠杆菌中的表达。利用逆转录PCR技术从原代培养的人成纤维细胞中克隆出人碱性成纤维细胞生长因子基因 ,在不改变氨基酸序列的前提下对该基因的上游部分序列进行改造 ,并将其插入表达载体pET 3c ... 利用基因改造的方法可以优化外源基因在大肠杆菌中的表达。利用逆转录PCR技术从原代培养的人成纤维细胞中克隆出人碱性成纤维细胞生长因子基因 ,在不改变氨基酸序列的前提下对该基因的上游部分序列进行改造 ,并将其插入表达载体pET 3c ,转入大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 %以上 。 展开更多
关键词 人碱性成纤维细胞生长因子 大肠杆菌 表达 基因
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