膀胱癌T-24细胞系中细胞角蛋白20的分离纯化及鉴定

目的 分离纯化细胞角蛋白 2 0 (Cytokeratin2 0 ,CK2 0 )并加以鉴定 ,为进一步研制抗CK2 0单克隆抗体奠定基础。方法 培养人膀胱肿瘤T 2 4细胞系并用免疫组化检测CK2 0表达 ,然后大量培养并收集细胞 ,超声波细胞粉碎后 ,先用萃取、高速离心、透析等方式进行蛋白初分离 ,然后利用以DE5 2为介质的阴离子交换层析分离纯化CK2 0蛋白 ,以电泳示踪 ,最后采用SDS PAGE、HLPC和Western blotting加以鉴定。结果 在阴离子交换层析时出现 3组洗脱峰 ,CK2 0主要存在第二组峰中 ,该峰在SDS PAGE和Western blotting上均呈现单一条带 ,HLPC分析显示CK2 0蛋白主峰呈正态分布 ,仅见一个较低峰度的蛋白质杂峰。结论 该纯化方法简便、可行、效果好、获得的蛋白纯度高 ,提取的蛋白可确认为CK2 0并且具有较高的免疫生物活性。

腺病毒重组人白细胞介素24对肾癌细胞株786-O细胞生长和凋亡的影响

目的探讨腺病毒重组人白细胞介素24(IL-24)对肾癌细胞株786-O细胞的生长和凋亡的影响。方法将培养的肾癌细胞株786-O细胞随机分为空白对照组、阴性对照组(转染腺病毒重组人IL-24对照组)及实验组(转染腺病毒重组人IL-24组)。取对数生长期肾癌细胞株786-O,构建腺病毒重组人IL-24及对照并转染至肾癌细胞株786-O实验组细胞及阴性对照组细胞。使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测肾癌细胞株786-O生长能力;采用流式细胞术检测肾癌细胞株786-O凋亡情况;应用Western Blot检测肾癌细胞株786-O中MMP-9蛋白的表达水平。结果实验组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞表面磷脂酰丝氨酸表达水平高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞中MMP-9蛋白表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力、细胞膜表面磷脂酰丝氨酸表达水平、MMP-9蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染腺病毒重组人IL-24可抑制肾癌细胞株786-O细胞的生长并诱导细胞凋亡,腺病毒重组人IL-24可能通过下调MMP-9诱导肾癌细胞株786-O细胞的凋亡。