hTPO和hNIS共转染肺癌细胞系H460介导放射性碘摄取的研究

背景与目的肺癌严重危害人类生命和健康,目前国内外肺癌的发病率和死亡率仍在不断上升。尤其是非小细胞肺癌(non-small cell lungcacer,NSCLC)治疗效果多年来一直没有显著提高。本研究旨在将人甲状腺过氧化物酶(hTPO)基因及人钠碘转运体(hNIS)基因共转入肺癌细胞系后研究其摄碘能力的变化。方法克隆,重组,包装并扩增纯化得到重组腺病毒(AdTPO),测定病毒滴度,Western blot检测重组腺病毒的表达。使用脂质体转染法将hNIS基因转染入人肺癌细胞系H460中,经G418抗生素筛选获得稳定表达hNIS的细胞系hNIS-H460,为hNIS-H460组;使用重组腺病毒将hTPO基因转导入hNIS-H460中,使肺癌细胞系获得hTPO基因,为AdTPO-hNIS-H460组;未转入hTPO和hNIS的细胞为对照组(H460)。然后进行三组稳定表达细胞系的体外摄125I实验。三组间两两比较用q检验(Newman-Keuls法)。结果AdTPO-hNIS-H460细胞、hNIS-H460细胞和H460细胞所摄取125I分别为(59637.67±1281.13)、(48622.17±2242.28.)和(1440.17±372.86)计数·min-1。三组间总体具有统计学差异(P<0.01)。AdTPO-hNIS-H460组较对照组(H460)摄125I能力增高约41倍(P<0.01),hNIS-H460组较对照组(H460)摄碘能力增高约34倍(P<0.01)。AdTPO-hNIS-H460组较hNIS-H460组高约1.2倍(P<0.01)。结论将hTPO和hNIS基因共转染至肺癌细胞系H460后,可有效提高H460的摄碘能力。

hTPO和hNIS共转染胶质瘤细胞碘摄取和^131I治疗的实验研究

目的构建含有人甲状腺过氧化物酶基因（hTPO）的重组腺病毒，并与人钠-碘转运体基因（hNIS）共转染至神经胶质瘤细胞中，研究其摄碘能力及对肿瘤细胞的杀伤能力，探讨131I治疗胶质瘤的可能性。方法应用AdEasy系统构建重组腺病毒AdTPO，利用重组质粒将hNIS基因转染入神经胶质瘤细胞系U251中获得hNIS—U251细胞系作为阴性对照组，再利用重组腺病毒AdTPO将TPO基因转染入hNIS—U251细胞系中获得AdTPO—hNIS—U251作为实验组，未转入hTPO和hNIS的细胞U251作为空白对照组。研究三组细胞的摄碘实验、过氯酸盐抑制实验、有机化测定实验检测其摄碘功能，细胞克隆形成实验评价131I对转染肿瘤的杀伤作用。结果成功构建出重组腺病毒AdTPO，并在稳定表达hNIS的U251细胞中实现了hTPO的共转染。hNIS—U251组（每分钟放射性计数55769．96±4353．26）比空白对照组（每分钟放射性计数507．67±57．69）摄碘能力增高约110倍，有效半衰期7分钟，有机化程度约为0．1％，细胞克隆形成率（9．08±2．86）％，较对照组减低约10倍。AdTPO—hNIS—U251组（每分钟放射性计数74647．53±3605．88）比空白对照组摄碘能力增高约147倍，有效半衰期延长至13分钟，有机化程度增高至10％，细胞克隆形成率（6．80±2．09）％，较对照组减低约13倍。结论将hTPO和hNIS共转染至神经胶质瘤细胞后，可有效提高细胞的摄碘能力，hTPO延长了放射性碘在细胞中的停留时间，131I对瘤细胞有较强的杀伤作用。

hTPO和hNIS共转染提高人胶质瘤、肺癌及甲状腺癌细胞摄放射性碘能力

目的研究共转染人甲状腺过氧化物酶基因(hTPO)及人钠碘转运体基因(hNIS)后胶质瘤、肺癌及甲状腺癌细胞的摄碘能力变化。方法克隆、重组、包装并扩增纯化得到重组腺病毒(AdTPO),测定病毒滴度。使用脂质体转染法将hNIS基因转染入人胶质瘤、肺癌及甲状腺癌细胞系中,经过G418抗生素筛选获得稳定表达hNIS的细胞系,只转染hNIS基因的细胞系为对照组;应用重组腺病毒将hTPO基因传导入对照组中,共转染hNIS及hTPO基因的细胞系为实验组;未转入hTPO和hNIS基因的原始肿瘤细胞系为空白对照组。然后进行3组细胞系的体外摄125I率及各细胞系的125I外流实验。结果在各肿瘤细胞系中,实验组细胞的摄碘率和有效半衰期较对照组细胞及空白对照组细胞均有所提高,实验组细胞的摄碘率:H460组为59 628±1 281,U251组为7 968±1 261,ARO组为52 971±2 162,FRO组为49 638±1 281,3组间总体具有统计学差异(P<0.01)。结论将hTPO和hNIS基因共转染至肿瘤后能有效提高肿瘤的摄碘能力并延长细胞内碘滞留时间。

甲状腺微粒体抗体和甲状腺过氧化物酶抗体相关性研究

研究了105例自身免疫性甲状腺病（AITD）患者血清甲状腺微粒体抗体（TMAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）测定值的相关性，其中TMAb和TPOAb的阳性率分别为56．2％（59／105）和73．3％（77／105），呈正相关（r＝0．55，P＜0．001）;另外，TMAb阳性血清稀释度和其对甲状腺过氧化物酶单克隆抗体（TPOmAb）结合125I－hTPO的抑制性呈显著的量效关系（r＝0．98，P＜0．001），提示制备TPO单抗和AITD患者的TPOAb存在共同的hTPO的B细胞表位，以上实验结果支持TPOAb即为TMAb的观点。

人血小板生成素氨基端功能区cDNA的克隆及其定点突变

以Nested－PCR方法从人肝cDNA基因文库中扩增出编码人血小板生成素（hTPO）前153个氨基酸的氨基端功能区cDNA；在扩增中，采用非连续多核甘酸定点突变的方法．将翻译起始的七个氨基酸的原核中不常用的密码子同又突变成使用频率较高的密码子，以便于其在大肠杆菌中表达。序列测定证实了预期的结果。

脂质体介导的人甲状腺过氧化物酶基因转染肺癌A549细胞及其蛋白表达

目的:利用基因转染技术,研究以脂质体Lipofectamine2000为载体介导的人甲状腺过氧化物酶(TPO)基因体外转染肺癌细胞,检测感染细胞内TPO蛋白的表达,为放射性碘治疗肺癌提供理论和实验依据。方法:将获得的含TPO基因的质粒pcDAN3.1-hTPO进行扩增、纯化,并经酶切鉴定和DNA测序。将肺癌A549细胞在体外复苏与培养并分为两组:转染质粒pcDAN3.1-hTPO的为实验组,转染空质粒pcDAN3.1的为对照组。以脂质体Lipofectamine2000为载体,介导TPO基因转染肺癌细胞。采用WesternBlot免疫印迹法和免疫组化法分别检测肺癌细胞中TPO蛋白的表达。结果:①酶切鉴定和DNA测序结果表明质粒pc-DAN3.1-hTPO中插入的基因为hTPO基因,其片段大小和方向正确。②体外培养的肺癌细胞活力及数量正常,细胞活力为96%,细胞生长密度为1×106/ml,满足实验要求。③质粒转染A549细胞后,WesternBlot免疫印迹法显示:在实验组中,肺癌A549细胞有TPO蛋白的表达,而在对照组中无表达。④免疫组化染色结果显示:在实验组的肺癌A549细胞中,TPO蛋白表达阳性且主要分布于细胞膜上,阳性表达率可达75%,而在对照组中TPO蛋白表达阴性,两组比较差异有显著性(P=0.000)。结论:①获得的hTPO基因片段的核苷酸序列与GeneBank报道完全一致。②在脂质体Lipofectamine2000的介导下,TPO基因能够有效地转染肺癌细胞。③转染人甲状腺过氧化物酶基因的肺癌细胞能够在体外成功地表达TPO蛋白。