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Angiogenin参与冻融人卵巢组织微循环重建效果分析 被引量:3
1
作者 张龙 康倍佳 +1 位作者 汪燕 李尚为 《西部医学》 2016年第5期601-605,共5页
目的用新型玻璃化冷冻方法冻融人卵巢组织,在体外培养该组织时添加angiogenin,观察其对微血管生成的影响,并将培养后的组织进行异种移植,观察两周后移植物的血循环情况。方法收集人卵巢组织并用NIV法进行冻融,通过免疫组化染色比较冻融... 目的用新型玻璃化冷冻方法冻融人卵巢组织,在体外培养该组织时添加angiogenin,观察其对微血管生成的影响,并将培养后的组织进行异种移植,观察两周后移植物的血循环情况。方法收集人卵巢组织并用NIV法进行冻融,通过免疫组化染色比较冻融前后组织中angiogenin的表达情况,将冻融的卵巢组织放在angiogenin浓度分别为0,100,200及400ng/ml的培养液中培养7天,取出组织进行CD34免疫组化染色,计数并比较不同angiogenin浓度组卵巢组织微血管密度差异,确定较适宜的培养浓度后,在适宜浓度下培养冻融人卵巢组织0,2,5,7天,观察不同培养时间组卵巢组织的微循环重建效果,将体外培养后的卵巢组织移植到SCID小鼠皮下,一周后取出移植物,观察微血管密度变化及细胞凋亡情况。结果冻融后卵巢组织间质中的angiogenin表达量下降,卵巢组织在angiogenin浓度为200ng/ml的培养液中生长的卵巢组织微血管密度最高。添加angiogenin后培养5天的卵巢组织微血管密度较培养2天及培养7天组高。卵巢组织短期培养后移植至SCID小鼠皮下一周,与对照组比较,添加angiogenin 200ng/ml培养后的卵巢移植物微血管密度增高,间质细胞凋亡减少。结论 angiogenin可促进冻融人卵巢组织微循环重建,可为女性的生育能力保存提供有力的支持。 展开更多
关键词 angiogenin 玻璃化冷冻 人类 卵巢组织 微循环重建 生育能力保存
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重组人血管生长素的纯化 被引量:6
2
作者 吴锦银 江悦华 +2 位作者 王捷 张宏斌 李明 《广东医学》 CAS CSCD 1999年第2期85-87,共3页
目的 建立表达重组人血管生长素 (recombinanthumanangiogenin ,rhANG)的简便纯化工艺 ,为扩大生产及临床应用打下基础。方法 工程菌经超声破碎 ,离心洗涤后 ,变性萃取rhANG的包涵体 ,通过SephacrylS - 2 0 0柱层析分离 ,再经CuCl2 复... 目的 建立表达重组人血管生长素 (recombinanthumanangiogenin ,rhANG)的简便纯化工艺 ,为扩大生产及临床应用打下基础。方法 工程菌经超声破碎 ,离心洗涤后 ,变性萃取rhANG的包涵体 ,通过SephacrylS - 2 0 0柱层析分离 ,再经CuCl2 复性 ,得到rhANG纯品。结果 所获取rhANG的纯度达 96%以上 ,蛋白回收率为 80 % ,活性测定经鸡胚绒毛尿囊膜 (chorioallantoicmembrane,CAM)测试法显示 ,该rhANG具有明显的促血管生长作用。结论 建立了一套较为简捷的rhANG纯化技术。 展开更多
关键词 血管生长素 纯化 rhNAG CAM
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重组人血管生长素基因工程菌发酵条件的初步研究 被引量:5
3
作者 林白雪 王捷 +3 位作者 张宏斌 武婕 郭勇 郑文岭 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2003年第3期123-126,共4页
目的研究表达重组人血管生长素 (rhANG)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵 ,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响 ,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用E .coliCDH为宿主菌 ,在SOB培养... 目的研究表达重组人血管生长素 (rhANG)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵 ,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响 ,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用E .coliCDH为宿主菌 ,在SOB培养基中培养至A6 0 0nm 为 0 .5~ 0 .6时 ,诱导表达 5h ,rhANG表达量最高达 30 %。重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。结论此发酵条件可以较好地提高rhANG的表达量 。 展开更多
关键词 重组人血管生长素 基因工程菌 发酵 质粒稳定性
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人血管生长素重组大肠杆菌发酵条件优化 被引量:2
4
作者 林白雪 王捷 +2 位作者 张宏斌 武婕 郭勇 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期380-382,共3页
考察了 Mg2 + 、Ca2 + 、NH+4、PO3-4等无机离子、初始 p H、装液量以及诱导前添加葡萄糖对重组大肠杆菌表达rh ANG和菌体生长的影响。经过优化 ,rh ANG表达量提高约 39% ,菌体干重达 1.5 9g/ L ,为工程菌发酵的扩试提供了参考。
关键词 人血管生长素 重组大肠杆菌 发酵条件
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重组人血管生长素包涵体复性条件研究 被引量:1
5
作者 王捷 李烈军 +1 位作者 张宏斌 林白雪 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2007年第4期257-259,共3页
目的 摸索重组人血管生长素(rhANG)复性影响条件,以提高rhANG的复性效率.方法 超声波破碎菌体,变性萃取rhANG包涵体.分析rhANG包涵体起始浓度、氧化型、还原型谷胱甘肽比例、盐酸胍和添加精氨酸对复性的影响.结果 在0.1 mol/L Tris-HC... 目的 摸索重组人血管生长素(rhANG)复性影响条件,以提高rhANG的复性效率.方法 超声波破碎菌体,变性萃取rhANG包涵体.分析rhANG包涵体起始浓度、氧化型、还原型谷胱甘肽比例、盐酸胍和添加精氨酸对复性的影响.结果 在0.1 mol/L Tris-HCl pH 7~8,还原型、氧化型谷胱甘肽比率为5,盐酸胍为0.2~0.5 mol/L,起始蛋白质浓度0.1~0.2 mg/mL时,rhANG蛋白复性率为60%;0.5 mol/L L-精氨酸有助于复性.结论 初步优化rhANG包涵体复性参数,为rhANG的放大制备创造了条件. 展开更多
关键词 重组 人血管生长素 包涵体 复性
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RI基因真核表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞的影响 被引量:2
6
作者 李红彦 潘湘阳 +2 位作者 姚雪 熊东梅 陈俊霞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第16期1591-1595,共5页
目的构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及迁移能力的影响。方法用R... 目的构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及迁移能力的影响。方法用RT-PCR方法扩增RI基因,酶切后将其插入pcDNA3.1,构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,在脂质体介导下转染HUVECs,RT-PCR检测RI、ANG基因的mRNA表达水平;Western blot检测RI、ANG、MMP-2、MMP-9的表达水平;CO-IP法检测ANG和RI的相互作用,MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果真核表达质粒构建成功;转染pcDNA3.1-RI组细胞RI基因的mRNA及蛋白的表达较2个对照组(转染pcDNA3.1空载体组和未转染质粒组)均呈显著性增加(P<0.05),而ANG基因的mRNA及蛋白的表达均降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9蛋白表达水平亦降低(P<0.05);CO-IP法检测到ANG和RI在细胞内能结合;转染pcDNA3.1-RI质粒到HUVECs细胞后细胞的增殖活力明显降低(P<0.05),G0~G1期比例明显增加,S期减少。结论成功构建的真核表达质粒能显著增加RI基因及其蛋白水平的表达,RI可以直接在转录水平上降低ANG的表达,在细胞内与ANG结合,从而影响内皮细胞的增殖、迁移能力。 展开更多
关键词 核糖核酸酶抑制因子 人脐静脉内皮细胞 血管生成素 真核表达
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人血管生成素cDNA克隆及其在组织细胞中表达分布研究
7
作者 徐东刚 王利红 +2 位作者 马百坤 彭善云 王嘉玺 《医学研究通讯》 2001年第8期40-42,共3页
血管生成素是一种具有明显促血管新生的蛋白因子,属于有特殊生物学功能的RNA酶家族。我们从人外周血白细胞中克隆了血管生成素cNNA,进行了DNA序列对比分析。同时对其在不同组织和细胞系中的表达情况进行了检测,并首次利用RT-PCR法在 KG-... 血管生成素是一种具有明显促血管新生的蛋白因子,属于有特殊生物学功能的RNA酶家族。我们从人外周血白细胞中克隆了血管生成素cNNA,进行了DNA序列对比分析。同时对其在不同组织和细胞系中的表达情况进行了检测,并首次利用RT-PCR法在 KG-1、Jurkat、HepG2、Tf-1、HL60、HEL和神经胶质细胞中检出血管生成素mRNA,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 血管生成素 CDNA 克隆 组织细胞 基因表达分布
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一种简便、特异地获取目的基因片段并克隆的好方法 被引量:1
8
作者 李丹宁 郭善一 +2 位作者 李兰戈 崔让庄 毛用敏 《天津医科大学学报》 2000年第3期271-273,共3页
目的:以简便、特异的方法获取目的基因片段用于体外构建重组体。方法:以引物互为模板的聚合酶链反应合成目的基因片段。该目的基因片段经限制性内切核酸酶水解后被连接至克隆载体 ,克隆后经筛选并电泳鉴定。结果:以聚合酶链反应合成了... 目的:以简便、特异的方法获取目的基因片段用于体外构建重组体。方法:以引物互为模板的聚合酶链反应合成目的基因片段。该目的基因片段经限制性内切核酸酶水解后被连接至克隆载体 ,克隆后经筛选并电泳鉴定。结果:以聚合酶链反应合成了目的基因片段 ,并获得相应重组体。经鉴定,该重组体确含目的基因片段序列。结论:成功利用聚合酶链反应获得目的基因片段并获得相应重组体 ,以作为进一步研究的基础。 展开更多
关键词 人血管生长因子 PCR 引物互为模板 基因重组
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Effects of basic fibroblast growth factor on angiogenin expression and cell proliferation in H7402 human hepatoma cells 被引量:4
9
作者 Ji Wang Jianli Yang +3 位作者 Dawei Yuan Jun Wang Jia Zhao Li Wang 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2009年第7期399-407,共9页
Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common cancers worldwide. Basic fibroblast growth factor (bFGF), which is highly expressed in developing tissues and malignant cells, regulates cell growth, differenti... Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common cancers worldwide. Basic fibroblast growth factor (bFGF), which is highly expressed in developing tissues and malignant cells, regulates cell growth, differentiation, and migration. Its expression is essential for the progression and metastasis of HCC. This study aims to investigate the effects of bFGF on the expression of angiogenin, another growth factor, which plays an important role in tumor angiogenesis, and on cell proliferation in H7402 human hepatoma cells. The bFGF sense cDNA or antisense cDNA was stably transfected into H7402 cells. Genomic DNA PCR analysis demonstrated that human bFGF sense cDNA or antisense cDNA was inserted into the genome. Furthermore, the expression of bFGF and angiogenin was examined by RT-PCR and Western blot assays. MTT and colony formation assays were employed to determine cell proliferation. Stable bFGF over-expressing and under-expressing transfectants were successfully established. Expression of angiogenin was decreased in the over-expressing bFGF cells (sense transfectants) and was increased in the under-expressing bFGF cells (antisense transfectants). Cell proliferation increased in the bFGF sense transfectants and decreased in the bFGF antisense transfectants. These results demonstrated that the endogenous bFGF may not only negatively regulate the angiogenin expression but also contribute to the overall cell proliferation in H7402 human hepatoma cells. This study may be helpful in finding a potential therapeutic approach to HCC. 展开更多
关键词 H7402 human hepatoma cells basic fibroblast growth factor (bFGF) angiogenin cell proliferation
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