宫颈脱落细胞中HCCR的表达及意义

目的研究人宫颈癌基因(HCCR)在宫颈脱落细胞中的表达情况,探讨其对宫颈癌及癌前病变诊断的意义。方法采用Western blot及免疫组化SP法对79例宫颈脱落细胞中HCCR蛋白进行检测,其中正常宫颈上皮脱落细胞11例、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)53例、宫颈癌(CCa)15例。所有标本均来自中国医科大学附属第一医院。结果HCCR基因在正常宫颈脱落细胞中不表达或阳性率较低,在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中表达阳性率随病变加重而逐级升高。结论HCCR与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生密切相关,检测宫颈脱落细胞中HCCR蛋白的水平对宫颈癌的筛查和诊断可能具有重要意义。

人子宫颈癌基因HCCR-2反义真核表达载体的构建及鉴定

目的克隆人子宫癌基因HCCR-2并构建其反义真核表达载体。方法从人肝癌细胞株HepG2提取RNA,利用RT-PCR方法,克隆出一包括HCCR-2编码区的长约1kb的片段,并将其与T载体连接,测序证实无误后,用SalⅠ、SacⅡ双酶切重组T载体,然后将该片段反向插入真核表达载体pIRES2-EGFP的多克隆位点,最后对重组真核表达载体进行双酶切鉴定。结果RT-PCR扩增出一长约1kb的HCCR-2片段,琼脂糖凝胶电泳显示目的片段成功反向连接到pIRES2-EGFP载体上。结论成功克隆了HCCR-2基因并构建了其反义真核表达载体pIRES2-EGFP/HCCR-2(-)。

HCCR和HPV16/18在宫颈脱落细胞中的表达及意义

研究HCCR在宫颈脱落细胞(来自宫颈液基细胞学残液)中的表达及其与HPV16/18感染的关系,探讨其对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌诊断的意义。选取570例宫颈上皮内瘤变和宫颈癌液基细胞学残液标本中具有相应组织学标本者31例,并随机选取10例正常标本作对照,采用免疫组化法和原位杂交法检测HCCR和HPV16/18。结果可见,HCCR在正常宫颈细胞及组织中呈现低表达,在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌细胞和组织中阳性率随着病变的升级而升高;HPV16/18 DNA的检出率随着宫颈病变的升级而升高;HCCR和HPV16/18在宫颈病变中的表达呈正相关(rs=1,P<0.005);无论是HCCR还是HPV16/18,在宫颈液基细胞学残液和相应宫颈组织中的检出率都是一致的。结论利用宫颈液基细胞学残液检测HCCR和HPV16/18对认识二者之间的关系及对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的筛查诊断具有重要意义。

人宫颈癌基因表达载体的构建及其在肝癌相关研究中的价值

目的为人宫颈癌基因(HCCR)在肝癌发生、发展中的生物学效应及机制研究提供理想工具。方法培养人HepG2细胞,RT-PCR扩增出HCCR基因片段,将其连接到pCR T7 TOPO TA/NT克隆载体中,命名为pCRT7 TOPO TA/NT-HCCR。运用交叉引物PCR筛选正确连接的克隆。再用EcoR I和BamHI限制性内切酶酶切鉴定和测序验证。将其转化BL21细菌,用IPTG诱导其表达相应的蛋白质,并用Western blotting验证。结果pCR T7TOPO TA/NT-HCCR原核表达载体构建成功。酶切鉴定和测序均与预期一致。用IPTG诱导转化此质粒后的BL21细菌,得到相应大小的蛋白质。结论pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR原核表达载体构建成功;其可作为HCCR基因功能研究及其与肝癌相关性研究的理想工具。