白藜芦醇抑制HeLa细胞肿瘤活性的自由基机理

白藜芦醇是一种植物抗毒素 ,属多元酚类。虽然迄今的研究表明 ,白藜芦醇能有效抑制许多癌细胞的肿瘤活性 ,但均未从自由基生物学角度来阐明其抑制肿瘤活性的机理。该研究以离体HeLa细胞为材料 ,利用细胞培养法研究了白藜芦醇抗肿瘤活性的功效 ,以及产生这种功效的自由基途径 ,旨在从自由基生物学的角度进一步揭示白藜芦醇抗肿瘤活性的机理。噻唑蓝法及流式细胞仪分析结果表明 ,白藜芦醇能强烈抑制HeLa细胞增殖并阻断HeLa细胞由S期向G2期转变。HeLa细胞内源性活性氧 (ROS)及HeLa细胞内部氧化还原态的实验结果表明 ,白藜芦醇对细胞自分泌的总ROS有一定的抑制作用 ,它抑制HeLa细胞自分泌的O- 2 浓度与抑制HeLa细胞增殖之间有明显的相关关系 ;同时 ,白藜芦醇可明显增高HeLa细胞内源SOD的活性以及GSH的含量 ,但可使CAT的活性显著下降 ,提示白藜芦醇能显著改变细胞内部的氧化还原态。以上结果为白藜芦醇抗癌机制提供了自由基生物学方面的实验依据。

不同HPV亚型的多重感染和年龄因素与宫颈病变的关系

目的:探讨不同亚型人乳头状瘤病毒(human papillomavious,HPV)多重感染及年龄等因素与宫颈不同程度病变的关系。方法:采用核酸分子快速导流杂交基因微阵列分型检测技术对418例女性HPV感染者进行HPV分型检测,同时检测宫颈病变程度。结果:仅感染高危型HPV病毒(包括混合感染多种高危HPV病毒)的女性患者其宫颈癌、尖锐湿疣构成比与仅感染低危型HPV病毒(包括混合感染多种低危HPV病毒)组的相应构成比存在较大差异(χ2=41.81,P<0.001);感染多种高危(低危)HPV与感染单一高危(低危)HPV相比,不同宫颈疾病的构成比并无差别;在不同的年龄段,高危型、低危型以及高低危HPV混合感染类型的构成比有显著性差异(χ2=17.25,P<0.05)。多元logitic回归分析年龄因素及不同类型高危型HPV感染与宫颈癌的关系显示年龄超过40岁(OR=1.63,P<0.05),16型HPV感染(OR=2.78,P<0.01),58型HPV感染(OR=1.69,P<0.05)宫颈癌患病风险大大增加。结论:感染高危型HPV引起宫颈癌的患病风险增加,而低危型HPV则更易引起尖锐湿疣的发生;多重感染并不会促进宫颈疾病的进展;年龄、16型和58型HPV的感染是影响宫颈癌发生的重要因素。

HPV多重感染与宫颈癌患者临床病理学特征分析

目的:对宫颈癌患者中HPV感染率及型别分布进行研究,探讨宫颈癌患者HPV多重感染与临床病理特征的关系。方法:选取2008年9月至2009年4月浙江省肿瘤医院因宫颈癌就诊且有临床病理确诊的患者171例,采用导流杂交基因芯片技术对HPV感染进行基因诊断和分型,并进一步比较HPV多重感染、单一感染、无感染者在年龄、临床分期、病理类型和淋巴结转移上的差异。结果:171例宫颈癌患者中HPV感染者为122例(71.35%),其中单一感染者103例(60.2%)、多重感染者19例(11.1%);HPV多重感染中以二重感染最常见(15例)、三重感染及四重感染各2例。单一感染主要是HPV16、18、58,多重感染主要是HPV16+58/52。无论是单一感染还是多重感染,均以含HPV16为主要的感染型别。年龄≥52岁宫颈癌患者中HPV多重感染的比例明显高于.<52岁患者,且两者存在显著性差异(P<0.05)。在临床分期、病理分型及淋巴结转移上,HPV多重感染与单一感染或无感染者之间均无差异。结论:HPV多重感染与宫颈癌患者年龄有关,但与临床分期、病理类型、淋巴结转移等预后因子均无关系,可能是独立的预后预测因子。导流杂交基因芯片技术适合临床筛查HPV感染及对HPV进行基因分型。

两组浓度的蛋白酶体抑制剂MG132诱导人宫颈癌细胞Hela凋亡

为了探讨不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中作用,分别以两组浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人宫颈癌细胞Hela,通过MTT法检测Hela细胞活力,应用AnnexinⅤ和PI双染的细胞流式法检测Hela细胞凋亡率,应用Western blotting和酶标仪法检测Hela细胞内Caspase-3活性变化的情况.结果表明:低浓度MG132诱导Hela细胞凋亡不明显,高浓度MG132诱导Hela细胞凋亡明显;不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的程度存在明显差异.

HIF-1对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在缺氧条件下对宫颈癌SiHa细胞的增殖、生长和凋亡的影响,探讨HIF-1α在宫颈癌的发展过程中所起的作用。方法将表达全长HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α和空质粒pcDNA3.1转染入SiHa细胞中,分别命名为fLHIF-1α组和pcDNA3.1组,未转染细胞组命名为未转染组。应用Western Blotting和免疫细胞化学法对细胞内的HIF-1α和VEGF表达量进行检测。应用MTT方法检测不同浓度的CoCl2处理后细胞的增殖情况;采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡情况。结果免疫细胞化学和Western Blotting结果显示重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α转染成功,转染细胞内HIF-1α及VEGF表达较未转染细胞和质粒pcDNA3.1转染细胞增高(P<0.05),显示在正常或缺氧条件下,fLHIF-1α组细胞的增殖能力均高于pcDNA3.1组和未转染组(P<0.05),凋亡率小于pcDNA3.1组和未转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α在CoCl2诱导的缺氧条件下可以抑制SiHa细胞的凋亡,减少缺氧对细胞的损伤以及促进细胞的增殖,提示HIF-1α在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。

无锡市113207名妇女宫颈人乳头瘤病毒感染状况分析

目的了解无锡市妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染状况及基因分型特点,为宫颈癌的筛查和防治工作提供依据。方法研究对象为2013年1月1日~6月30日参加无锡市免费宫颈癌筛查的113 207名妇女,年龄35~64岁,根据常住地址分为城区和农村。113 207名妇女接受妇科、阴道分泌物检查和HPV检测,再选择性进行宫颈液基薄层细胞学检查（TCT）、阴道镜检查及组织病理学诊断。结果 113 207名妇女中,HPV检出率为12.98%,高危型HPV检出率为12.60%。不同地区（城区、农村）妇女HPV检出率、高危型HPV检出率差异均有高度统计学意义（P〈0.01）,均为农村高于城区。≥55岁年龄组HPV检出率为13.92%,位居第1位,且该年龄组妇女HPV检出率、高危型HPV检出率和HPV多重感染率与其他年龄组之间差异有高度统计学意义（P〈0.01）。单一感染占77.52%,多重感染占22.48%。农村地区妇女单一感染、多重感染率均高于城区（P〈0.01）。感染HPV型别前5位分别是HPV52、HPV16、HPV58、HPV68、HPV18。结论高危型HPV感染是宫颈癌前病变和宫颈癌的主要原因,采用HPV检测作为初筛方法,再选择性进行宫颈TCT、阴道镜检查及宫颈组织病理学诊断的宫颈癌筛查方案,是切实可行的。农村和绝经后妇女HPV感染问题需引起关注。HPV亚型分布存在地域性差异。

TCT联合HC-Ⅱ HPV筛查宫颈病变及药物干预的方法

目的探讨应用液基薄层宫颈刷片细胞学检测（Thinprep cytologicaltest，TCT）及杂交捕获二代（Hybridcapture Ⅱ，HC-Ⅱ）人乳头瘤病毒（Humanpapilloma virus，HPV）分型检测筛查宫颈病变的意义和对高危病例进行药物干预的方法。方法2004年4月～2005年8月，采用TCT和HPVDNA分型检测对17320例患者进行宫颈病变的筛查，并以病理组织学活捡为标准来验证筛查结果，同时应用氟尿嘧啶（5-Fu）可吸收缓释药膜对适宜病例进行局部干预治疗。结果TCT结果异常者1754例，其中高危型HPV-DNA阳性450例；431例TCT提示无HPV感染病例中有172例高危型HPV-DNA阳性；TCT或TCT联合HC-ⅡHPV筛查宫颈上皮内瘤样病变（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅱ级及以上病变的敏感性和特异性分别为81．12％、89、65％和72．08％、97．99％；采用5Fu可吸收缓释药膜治疗25例CINI级HPV高危型感染患者后，其病毒负荷量下降幅度、转阴率和病理逆转率均明显高于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论TCT和HPV分型检测联合应用于宫颈病变筛查可提高CINⅡ级及以上病变的特异性检出；5-Fu可吸收缓释药膜治疗CINI级HPV高危型感染患者可降低其病毒负荷量，甚至清除。

郑州地区门诊和体检患者感染人乳头瘤病毒的对比分析

目的:对比分析门诊和体检患者感染人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的差异,探讨检测HPV的重要性。方法:采用PCR-反向点杂交法对门诊14426例患者和体检9081例妇女进行HPV检测并分型。结果:患者年龄15~85(36.0±9.9)岁。总HPV检出率16.7%(3939/23507),其中高危型16.1%(3790/23507),低危型1.2%(273/23507);单一亚型感染占83.1%(3272/3939),多亚型混合感染占16.9%(667/3939);30岁以下、40~49岁以及60岁以上患者以感染高危型HPV52亚型为主,30~39岁和50~59岁患者以感染高危型HPV16亚型为主。门诊患者与体检患者在检出率、感染类型和年龄相关性方面均存在差异。两组患者高危型HPV检出率存在显著性差异(P<0.001),门诊患者中高危型HPV51亚型感染低于体检患者(χ^2=9.055,P=0.003);而低危型HPV检出率也存在显著性差异(P<0.001)。低危型HPV6亚型和HPV11亚型感染均明显高于体检患者(χ^2=53.306,P<0.001和χ^2=10.539,P=0.001)。结论:门诊患者检测HPV重要,体检患者HPV的检测也要重视。

HSV-TK和IL-12联合基因对宫颈癌的杀伤作用

目的观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统联合IL-12基因对人宫颈癌hela细胞系体外杀伤作用。方法采用脂质体转染法将HSV-TK及IL-12联合基因转染hela细胞,并将其用于体外实验,观察GCV对转染联合基因的Hela的杀伤作用及旁观者效应等。结果加入GCV后体外培养联合基因转染的Hela细胞,24 h后细胞明显发生形态上改变,正常对照组细胞生长旺盛;随着GCV剂量的加大,转染联合基因的Hela细胞的存活率呈逐渐下降的趋势,GCV对转染细胞的杀伤作用较对正常细胞的杀伤作用明显增强。并观察到自杀基因系统具有明显的旁观者效应。结论脂质体可介导HSV-TK及IL-12联合基因转入人宫颈癌hela细胞并获得稳定表达,GCV对HSV-TK及IL-12联合基因转染的hela细胞具有明显的杀伤作用。

宫颈永生化细胞和癌细胞的胞质蛋白双向电泳图谱的建立及初步分析

目的:建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞(CaSKi细胞株)胞质蛋白双向电泳图谱,并初步分析找出特征性的差异蛋白点。方法:分别培养H8和CaSki细胞,用亚细胞结构蛋白质提取试剂盒提取胞质蛋白进行双向电泳,用ImageMaster 2D V2002.1图像分析软件分析电泳图谱,筛选差异蛋白点。结果:获得了分辨率和重复性均较好的宫颈永生化细胞和癌细胞胞质蛋白2-DE图谱,并分析找出了显著的差异蛋白点8个,其中3种蛋白质在宫颈癌细胞株表达上调,1种蛋白质表达明显下调,2种蛋白质在宫颈癌细胞株表达缺失,2种蛋白质在永生化细胞株表达缺失。结论:应用亚细胞蛋白双向凝胶电泳技术对HPV-16阳性的宫颈癌前和癌变的胞质蛋白分析,能有效找出蛋白质表达差异点,为进一步确定宫颈癌前病变和癌细胞的关键性差异蛋白质的结构和功能奠定了基础。

液基涂片细胞学检查联合高危型HPV检测在宫颈病变诊断中的价值

目的探讨液基涂片细胞学(TCT)检查联合高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测在宫颈病变诊断中的价值。方法收集500例宫颈脱落细胞标本,采用宫颈细胞学检查、HPV DNA检测或2种方法联合检查后,选择所有的HPV阳性和TCT报告为意义不明确的不典型鳞状细胞(ASC-US)以上者,均通过阴道镜取活检,以组织学诊断为金标准,比较宫颈细胞学检查、HPV DNA检测及以上2种方法联合检查与组织病理学诊断的符合率、灵敏度和特异度。结果 313名TCT报告为ASC-US以上者,与组织病理学诊断的符合率为82.4%。268名检测结果为HPV DNA阳性的女性与组织病理学诊断的符合率为77.2%。2种方法联合检查251名女性,与组织病理学诊断的符合率为92.0%。TCT联合HPV DNA检测与单纯HPV DNA检测比较,差异有统计学意义(P<0.01)。TCT联合HPV DNA检测与单纯TCT比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HPV DNA检测诊断宫颈癌的灵敏度为83.8%,特异度为75.9%,TCT检测诊断宫颈癌的灵敏度为93.5%,特异度为75.4%,TCT检查联合HPV DNA检测诊断宫颈癌的灵敏度为96.3%,特异度为87.5%。结论 TCT联合HPV DNA检测在宫颈病变筛查中比单纯TCT或单纯HPV DNA检测更具有实用价值。

HPV亚型多重感染与宫颈病变的关系

目的：探讨人乳头状瘤病毒（human papillomavious，HPV）不同亚型多重感染与宫颈病变的关系。方法：采用核酸分子快速导流杂交低密度基因芯片分型检测技术对238例女性HPV感染者进行HPV分型检测，同时检测宫颈病变程度。结果：仅感染高危型HPV病毒（包括混合感染多种高危HPV病毒）的女性患者其宫颈癌、尖锐湿疣构成比与仅感染低危型HPV病毒（包括混合感染多种低危HPv病毒）组的相应构成比存在较大差异（X^2=50．62，P〈0．01）；感染多种高危（低危）HPV与感染单一高危（低危）HPv相比。不同宫颈疾病的构成比并无差别（X^2=0．64，P〉0．05；X^2=0．46，P〉0．05）。结论：感染多重高危型HPV引起宫颈癌的患病风险增加，而多重低危型HPV则更易引起尖锐湿疣的发生；高危或低危多重感染并不会促进宫颈疾病的进展。

傅里叶红外光谱研究光敏剂5-氨基酮戊酸的光动力作用机制

本文测定了光敏剂5-氨基酮戊酸对人宫颈癌细胞HeLa光敏作用后的傅里叶红外光谱。结果显示:光敏作用后,HeLa细胞磷酸二酯基团的对称伸缩振动峰1085cm-1和不对称伸缩振动峰1246cm-1蓝移,强度下降;蛋白质酰胺I带1656cm-1发生蓝移,酰胺Ⅱ带1546cm-1出现红移;CH2对称伸缩振动峰2858cm-1,峰位蓝移2cm-1,峰值明显减弱。结果表明:DNA、蛋白质和磷脂是5-氨墓酮戊酸光敏作用的主要靶分子。

宫颈癌与HPV疫苗

宫颈癌(CaCx)是国内外危及女性生命的高发肿瘤之一,仅次于乳腺癌,人乳头瘤病毒(HPV)是由核酸和衣壳蛋白组成的DNA病毒,高危型HPV的感染是CaCx发生发展的重要因素,防止HPV16持续性感染的疫苗可从根本上减少CaCx的发病率。但因HPV不能经细胞培养增殖,故HPV基因工程疫苗的研制成为近年来研究热点。就HPV疫苗种类、研制等方面进行综述。

高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈癌前病变及宫颈癌的相关性分析

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌前病变以及宫颈癌的相关性。方法 120例宫颈癌或是癌前病变患者,其中60例为宫颈癌前病变患者(癌前病变组),60例为宫颈癌患者(宫颈癌组),将其归为观察组,同时期60例阴道炎宫颈无细胞学改变的患者设为对照组。采用宫颈液基细胞学检查法与宫颈刮片、免疫组化予以筛查分析,同时还采用达安PCR-反向点杂交法检测,对比分析各组检测结果。结果高危型HPV总阳性率为56.67%,癌前病变组、宫颈癌组以及对照组患者的高危型HPV阳性率分别为65%、95%、10%,三组患者的阳性率对比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论高危型HPV感染与宫颈癌前病变以及宫颈癌具有非常密切的关系,而在高危型HPV感染中以HPV16感染为主。

栅列藻蛋白质提取液促进人子宫颈癌细胞的生长研究

本文采用ＭＴＴ［３（４，５ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２ｙｌ）－２，５ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ］快速微量比色技术发现斜生栅列藻（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓ）蛋白质提取液可促进动物细胞的生长．在０．５％胎牛血清（ＦＢＳ）的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，加入９５μｇ／ｍｌ栅列藻提取液可使人子宫颈癌细胞（ＨｅＬａｃｅｌ）比对照组细胞增殖３倍左右．这种刺激动物细胞生长的活性物质分子量在３５００－８０００道尔顿（ｄａｌｔｏｎｓ）之间。

HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗宫颈癌的研究

目的探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对人宫颈癌细胞系Hela体外及体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染人宫颈癌细胞Hela,得到带有HSV-TK基因的Hela/TK细胞,并将其分别用于体外和体内实验。结果载体HSV-TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示,当Hela/TK细胞数占混合细胞10%时,低浓度(10μg/ml)的GCV就可将50%左右的肿瘤细胞杀死。体内实验结果显示GCV可明显抑制Hela/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成。经GCV治疗后,肿瘤体积分别较对照组肿瘤体积缩小约11.1%、30.6%和47.2%(均P<0.001);RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中有表达;实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变。结论逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入人宫颈癌细胞Hela并获稳定表达,HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内外对宫颈癌细胞均有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应。

氟尿嘧啶用于人乳头状瘤病毒高危型感染早期干预治疗

目的探讨应用氟尿嘧啶(5-FU)进行宫颈乳头状瘤病毒(HPV)高危型感染早期干预治疗的疗效。方法采用液基薄层细胞学检测(TCT)和HPV DNA分型检测进行宫颈HPV高危型感染的筛查,选取细胞学异常和HPV高危型阳性6个月未自然转阴的宫颈上皮内瘤变(C IN)Ⅰ级患者50例,随机分为治疗组和对照组各25例。治疗组给予氟尿嘧啶可吸收缓释药膜的局部干预治疗。对照组未进行任何干预治疗。治疗过程中定期复查TCT及HPV DNA水平。结果治疗组HPV病毒负荷量呈明显的下降趋势,并于治疗第3个月时病毒转阴5例(20.0%),第6个月时C INⅠ级患者出现病理逆转13例(52.0%),对照组仅出现逆转2例(8.0%),两组缓解率比较差异有显著性(P<0.05)。结论对于C INⅠ级的HPV高危型感染患者,采用氟尿嘧啶可吸收缓释药膜治疗,可促使HPV病毒负荷量的降低,甚至清除。

杂交捕获二代法检测在宫颈癌筛查中的应用价值

目的探讨杂交捕获二代(HCⅡ)法检测高危型人乳头瘤患者(HPV)DNA的临床应用价值。方法对1 189例患者进行HCⅡ法HPV检测和液基细胞学(TCT)检测,对高度怀疑病变的患者进行阴道镜多点活检。结合病理结果进行分析。结果1 189例样本中,经TCT检测ASC-US 32例(2.69%),ASCUS-H35例(2.94%),LSIL76例(6.39%),HSIL17例(1.43%)。病理证实炎症70例(49.65%),CINⅠ19例(13.48%),CINⅡ22例(15.60%),CINⅢ17例(12.06%),浸润癌5例(3.55%),湿疣8例(5.67%)。HPV阳性组年龄明显小于阴性组(P<0.01)。各病理组HPV感染率分别为炎症59%、CINⅠ68%、CINⅡ77%、CINⅢ100%、浸润癌100%、湿疣62%。141例阴道镜下多点活检结果:TCT和HPV均(-)者无高度病变发生;TCT(-)和HPV(+)者中≥CINⅡ的检出率为17%,在TCT异常和HPV阳性同时存在的病例中最高(41%);仅TCT异常的HPV(-)者为13%,且5例均为CINⅡ,无原位癌和浸润癌的发生。结论持续的HR-HPV感染与宫颈病变的演进有关,HC-Ⅱ法HPV检测是宫颈癌有价值的辅助诊断技术,与细胞学联合检测,为最佳宫颈癌筛查方案。

HPV感染与宫颈癌前病变的相关性研究

目的:探讨HPV感染与宫颈癌前病变两者之间的相关性。方法:选取2007年2月～2009年1月来我院就诊的180例宫颈病变患者为研究对象,采用杂交捕获2代(HCⅡ)方法定量对宫颈HPV DNA的含量进行检测,用RLU/CO表示病毒负荷,根据HPV DNA含量大小将患者分成5组。结果:在正常组、CIN组和宫颈鳞癌组3组中,高危型HPVDNA的检出率分别为29.35%、62.54%和93.02%,且3个组之间比较,差异有高度统计学意义(P<0.001)。结论:宫颈病变的严重程度和HPV DNA检出率呈正相关,HPV DNA检出率越高,宫颈病变的程度可能越严重。