生长抑素类似物诱导人胆管癌SK-ChA-1细胞调亡及调亡相关基因表达的研究

目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)抑制人胆管癌生长时对SK ChA 1细胞调亡调控基因bcl 2和bax的作用。方法 用DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测AnnexinV标记凋亡细胞技术研究SMS诱导细胞凋亡的情况 ;用免疫组化和原位杂交分析SMS凋亡调控基因bcl 2和bax的影响。结果 SMS处理SK ChA 1细胞后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞增多 ,DNA凝胶电泳显示典型的凋亡梯状图谱 ,同时SMS可使细胞bcl 2蛋白表达下降 ,使bax蛋白和mRNA表达升高。结论 SMS能诱导SK ChA 1细胞发生凋亡 ,bax和bcl 2凋亡基因介导了SMS对SK ChA

生长抑素类似物对胆管癌SK-ChA-1细胞株及其相关基因表达的影响

目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995抑制人胆管癌增殖时对SK ChA 1细胞细胞周期及cyclinD1 和p16蛋白的影响。方法 采用血清饥饿法将SK ChA 1细胞同步化 ,同步化释放后SMS2 0 1 995处理 48h收取不同时相细胞 ,以流式细胞仪 (flowcytometer)分析细胞周期相分布 ;并同时用免疫组化和原位杂交检测cyclinD1 和p16基因表达水平。结果 SMS处理SK ChA 1细胞后 6、12h可抑制SK ChA 1细胞经血刺激由G0 G1 进入S期。CyclinD1 蛋白表达在SMS处理SK ChA 1细胞后 6h明显减弱。p16蛋白在细胞周期各时相呈稳定性低表达。SK ChA 1细胞cyclinD1 和p16mRNA各时相表达无明显变化。结论 SMS诱导的cyclinD1 蛋白量降低可能与SMS干扰细胞G1 S期转换 ,阻遏SK ChA

回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响

目的探讨回药爱康方(AKF)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响。方法雄性SD大鼠80只,按体重随机分为8组:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKFL、AKFM、AKFH)组,环磷酰胺(CTX)组,AKFL、AKFM、AKFH联合CTX组。分别给予相应AKFL、AKFM、AKFH浓缩水煎剂灌胃,连续5d;CTX组和联合组再按20mg·kg-1给予环磷酰胺于第1、3、5天腹腔注射。NS组给予等量生理盐水。上述各组动物取血制备含药血清,体外培养人肺鳞癌SK-MES-1细胞。应用MTT法检测各组含药血清对SK细胞增殖的影响,流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果 AKF含药血清作用不同时间对SKMES-1细胞生长有抑制作用(P<0.05)。AKF联合CTX含药血清能够抑制SK细胞增殖,其中AKFH联合CTX组的抑制率明显高于其他组,48h之内抑制程度呈时间和浓度依赖性。5%、10%、20%浓度组的含药血清作用SK-MES-1细胞24、48、72h后,与NS比较,除AKFL外,其余各组抑制率均有升高(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,AKF含药血清及联合CTX含药血清能使SK细胞阻滞于G1期,随着药物浓度的增加,G1期细胞增多、S期细胞减少,和NS组比较,高剂量以及联合组尤为明显(P<0.05)。10%、20%浓度含药血清组与NS组比较,各组的G0/G1期细胞增多、S期细胞逐渐减少(P<0.05);而与CTX组比较,G0/G1期细胞少于CTX组,S期细胞多于CTX组(P<0.05),各联合组G0/G1期细胞多于CTX组,S期细胞少于CTX组(P<0.05)。结论 AKF含药血清可抑制SK细胞增殖,并与CTX有协同作用,其机制可能与其阻滞细胞于G1期有关。

lncRNA MALAT1调控人肝胆管癌细胞侵袭及凋亡影响胆管癌发生发展临床研究

目的:探究肺腺癌转移相关转录物1(metastasis associated in lung denocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)体外细胞侵袭、迁移及凋亡和体内细胞增殖,并参与ICC的发生发展的机制。方法:利用GeneCards和LncExpDB数据库发现MALAT1基本信息;qRT-PCR和原位杂交FISH检测MALAT1在27例ICC患者组织中的表达情况;Tranwell、细胞划痕及Tunel细胞凋亡检测MALAT1对人肝胆管癌细胞系(RBE细胞系)侵袭、迁移及凋亡情况;原位杂交FISH和PCNA免疫组织化学及Ki67免疫荧光实验检测MALAT1在皮下肿瘤组织中荧光探针信号与体内细胞增殖情况。结果:MALAT1定位于11p13.1,转录本长8708bp,在各类肿瘤和疾病中有不同程度的表达差异;MALAT1在27例ICC患者组织中均上调;MALAT1促进RBE侵袭、迁移及抑制凋亡,而敲低MALAT1则促进凋亡;MALAT1在皮下肿瘤组织中的阳性表达显著增加;过表达MALAT1促进体内细胞增殖,敲低MALAT1则抑制体内细胞增殖。结论:MALAT1作为ICC一种潜在标志物,通过调控干扰MALAT1的表达可能为ICC的诊断和治疗提供新的研究方向。

槐耳清膏通过激活自噬抑制人肝癌细胞SK-HEP-1增殖

该研究探讨槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1自噬的影响及此影响在细胞增殖中发挥的作用。采用CCK-8法检测了槐耳清膏不同作用浓度以及不同作用时间下对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的影响。采用吖啶橙染色法检测了槐耳清膏给药对SK-HEP-1细胞中自噬溶酶体形成的作用。采用免疫荧光法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中自噬标志物LC3的表达及分布情况。此外,还借助免疫印迹法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中LC3的表达情况。最后,该研究采用CCK-8法分析了槐耳清膏与自噬抑制剂bafilomycin A1联合给药以及槐耳清膏单独给药对SK-HEP-1细胞增殖的作用。结果显示,槐耳清膏能够显著抑制人肝癌细胞SK-HEP-1的增殖,并且具有明显的时间与浓度依赖性。吖啶橙染色实验结果表明槐耳清膏能够明显促进细胞中自噬溶酶体的生成。免疫荧光及免疫印迹实验结果显示,槐耳清膏给药作用后细胞内LC3绿色荧光颗粒数量和亮度明显增高,而且自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达量也明显上升,这部分结果提示槐耳清膏能够明显激活SK-HEP-1细胞自噬的发生。此外,笔者还发现自噬被抑制后SK-HEP-1细胞对槐耳清膏给药的敏感性显著下调。因此,自噬活化参与了槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的抑制作用。

奥曲肽诱导人胆管癌细胞凋亡过程中细胞内游离钙的变化

目的 探讨奥曲肽是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长 ,以及与细胞内游离钙的关系。方法 采用人胆管癌细胞系SK ChA 1,应用生长曲线 ,片段DNA琼脂糖凝胶电泳 ,AnnexinV FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等方法进行检测和观察。结果 在奥曲肽作用下SK ChA 1细胞生长受抑制。奥曲肽处理SK ChA 1细胞后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞增多 ,DNA凝胶电泳显示典型的凋亡梯状图谱。细胞凋亡的同时细胞内游离钙浓度升高。结论 奥曲肽通过细胞内游离钙的变化 ,诱导人胆管癌细胞凋亡 ,是奥曲肽抑制胆管癌生长的机理之一。

槐耳蛋白聚糖TPG-1抑制人肝癌SK-HEP-1细胞生长的机制

目的:蛋白聚糖TPG-1具有良好的抗肝癌活性,本研究进一步探究蛋白聚糖TPG-1抗肝癌的分子作用机制。方法:用槐耳蛋白聚糖TPG-1(0,0.05,0.1,0.25,0.5,1 g·L^(-1))处理人肝癌SK-HEP-1细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测槐耳蛋白聚糖TPG-1对SK-HEP-1细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测TPG-1对SK-HEP-1细胞凋亡的影响。对经TPG-1处理过的人肝癌SK-HEP-1细胞进行基因芯片检测分析,探讨TPG-1抗肝癌的分子作用机制。结果:与空白组比较,槐耳蛋白聚糖TPG-1能够显著抑制人肝癌SK-HEP-1细胞的增殖能力(P<0.01)。TPG-1(1 g·L^(-1))作用于SK-HEP-1细胞48 h,SK-HEP-1细胞凋亡率显著增加(P<0.01),且TPG-1给药能够显著促进细胞凋亡重要执行者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3和Caspase-7的剪切水平(P<0.01)。与空白组比较,TPG-1(0.1 g·L^(-1))能够抑制SK-HEP-1细胞的迁移能力(P<0.05)。基因芯片检测分析结果显示,TPG-1处理后,SK-HEP-1细胞中差异表达基因有971个,其中表达上调基因486个,表达下调基因485个。基因本体(GO)和通路(Pathway)分析结果显示表达差异基因的功能主要涉及白细胞介素-6(IL-6)生物合成、抗原加工与呈递、超氧化物歧化酶活性、丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)级联反应的正调控、自然杀伤(NK)细胞趋化、趋化因子生物合成等。此外,表达差异基因所涉及的信号通路主要包括核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体信号通路,凋亡,Toll样受体信号通路,维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体信号通路,T细胞受体信号通路及趋化因子信号通路等。蛋白免疫印迹法结果显示,TPG-1(1 g·L^(-1))能够显著激活SK-HEP-1细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路(P<0.01)。结论:槐耳蛋白聚糖TPG-1能够抑制人肝癌SK-HEP-1细胞增殖及迁移能力并促进其发生凋亡,MAPK信号通路的激活可能与TPG-1发挥抑制人肝癌SK-HEP-1细胞生长作用有关。

生长抑素类似物对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)对人胆管癌细胞体外增殖和凋亡的调控作用。方法 采用人胆管癌细胞系SK ChA 1,应用生长曲线、流式细胞仪、片段DNA琼脂糖凝胶电泳、AnnexinV FITC技术及流式细胞仪间接免疫荧光技术等方法进行检测和观察。结果 在SMS作用下 ,SK ChA 1细胞生长受到抑制 ,短时使细胞阻滞于G0 /G1期。SMS处理SK ChA 1细胞后 ,AnnexinV FITC标记的凋亡细胞增多 ,DNA凝胶电泳显示典型的凋亡梯状图谱 ,同时SMS可使细胞bcl 2蛋白表达下降 ,使bax蛋白表达升高。结论 SMS可明显抑制SK ChA 1细胞生长 ,并能诱导该细胞凋亡。该细胞凋亡机理可能与凋亡调控基因bax和bcl

携带凋亡素基因的重组腺病毒对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299凋亡的影响

目的:研究携带凋亡素基因VP3的重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299的凋亡的影响。方法:取对数生长期SK-MES-1、NCI-H1299细胞,各分为重组腺病毒(Adxsi-GFP-VP3)组、空病毒(Adxsi-GFP)组和细胞对照(磷酸盐缓冲液)组,依次记为A、B、C组。采用逆转录-聚合酶链反应和Western blot法检测A、B组细胞转染48、72 h的VP3 mRNA和Apoptin表达情况,透射电镜观察A组细胞转染72 h的超微结构变化。采用MTT法检测3组细胞转染24、48、72、96 h的细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞转染后24、48、72 h的凋亡率及细胞周期变化。结果:与B组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞转染48 h后有VP3 mRNA表达,转染72 h后有Apoptin表达。A组转染72 h后SK-MES-1、NCI-H1299细胞均出现细胞凋亡的超微结构改变。与B、C组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加,且与转染时间呈正相关;转染72 h S期的SK-MES-1、NCI-H1299细胞比例降低、G2/M期细胞比例增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Adxsi-GFP-VP3能有效诱导SK-MES-1、NCI-H1299细胞凋亡。

CIT siRNA最佳干扰序列的筛选及其在SK-Hep-1肝癌细胞中对CIT表达的抑制

目的筛选并合成CIT基因的最佳siRNA干扰序列,并检测其对人肝癌细胞株SK-Hep-1中CIT基因表达的干扰效率及其对SK-Hep-1人肝癌细胞增殖的影响。方法根据CIT基因序列设计并合成3个siRNA靶点,通过脂质体转染法转染入SK-Hep-1人肝癌细胞,用Real-timePCR和蛋白质印迹法检测其对目的基因CIT的敲减效率。采用细胞免疫化学、共聚焦显微镜观察siRNA干扰后48h,SK-Hep-1细胞中CIT表达的变化情况。用EdU细胞增殖实验检测siRNA干扰后48h对SK-Hep-1细胞增殖的影响。两样本均数间比较采用t检验,多样本均数间比较采用单因素方差分析。结果3条针对不同靶点的干扰序列,蛋白质印迹法检测结果显示,相较于对照组,敲低1、2、3组CIT蛋白的表达水平均降低(P<0.01),而敲低1组蛋白表达量最低。Real-timePCR检测结果显示,相较于对照组,敲低1、2、3组CITmRNA表达水平均降低(P<0.01),而敲低1组mRNA表达量最低。激光共聚焦显微镜从形态学上也证实转染siRNA之后,CIT的表达明显减弱。EdU增殖实验结果显示,转染CIT的siRNA将明显减弱SK-Hep-1肝癌细胞的增殖(P<0.05)。结论成功筛选并合成能有效抑制SK-Hep-1肝癌细胞中CIT基因表达的siRNA片段,且能明显抑制SK-Hep-1细胞的增殖。

鞘氨醇激酶1参与依托泊苷抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的研究

目的利用抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞中SK-1基因表达，结合依托泊苷对细胞增殖的影响，研究乳腺癌的治疗新方法。方法将依托泊苷分别处理野生型及SK-1敲除型MDA-MB-231细胞，^3H-TdR掺入法分析细胞增殖，Transwell法分析细胞迁移，Western印迹检测SK-1蛋白表达及细胞周期检验点相关信号因子的蛋白表达，RT-PCR检测细胞内SK-1的mRNA表达量。结果依托泊苷在较高剂量时，MDA-MB-231细胞存活率明显下降，但依托泊苷却呈浓度依赖性促进乳腺癌细胞SK-1 mRNA及蛋白水平表达，将SK-1敲除，细胞迁移率下降，而且可以增强G1期各抑癌基因的激活或高表达，使细胞周期阻滞。结论SK-1基因敲除有效增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。