三氧化二砷抗裸鼠人结肠癌移植瘤作用及其机制的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抗人结肠腺癌裸鼠移植瘤作用、作用机制以及药物毒性。方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,即生理盐水组、5-氟脲嘧啶(5-FU)组、低剂量As2O3组和高剂量As2O3组,比较各组的抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,并对标本分别行光镜和电镜观察、原位末端标记(TUNEL)、免疫组化和血常规检测。结果:As2O3能够明显抑制结肠癌裸鼠移植瘤的增长,并能诱导癌细胞凋亡,调控相关基因表达;未见As2O3引起明显肝、肾和造血系统损害。结论:As2O3对人结肠腺癌细胞裸鼠移植瘤具有显著的抗癌作用,此作用可能与诱导癌细胞凋亡密切相关,且受到多种有关基因的调控;但是对裸鼠的肝、肾和造血系统无明显的毒性。

新城疫病毒7793株抑制人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长及其机制

目的:观察新城疫病毒7793株(Newcastle disease virus 7793 strain,NDV 7793)对人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤生长的作用,并探讨其可能机制。方法:建立LoVo细胞裸鼠移植瘤模型,随机分成3组,分别静脉注射PBS、5-FU以及NDV 7793,观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤细胞的坏死率和凋亡率,免疫组织化学法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达,细胞色素C试剂盒检测移植瘤组织中细胞色素C的含量,ELISA法检测移植瘤组织中TNF-α含量。结果:NDV 7793较5-FU更明显抑制LoVo细胞移植瘤的生长(抑制率50.14%vs 37.14%,P<0.05)。NDV 7793组移植瘤LoVo细胞凋亡率显著高于5-FU对照组[(28.7±1.5)%vs(1.46±0.3)%,P<0.01],且NDV 7793组诱导LoVo细胞的凋亡率和坏死率[(28.7±1.5)%vs(27.80±3.32)%]相当。NDV 7793能促进移植瘤组织中Bax蛋白的表达,对Bcl-2蛋白的表达无影响。NDV 7793可提高移植瘤组织中的细胞色素C含量[(2.28±0.68)vs(0.68±0.13)μg/μl]和TNF-α的水平[(489.6±5.2)vs(167.9±3.9)pg/ml]。结论:NDV 7793可抑制人结肠癌LoVo细胞移植瘤的生长,其机制可能与其上调Bax蛋白、细胞色素C和TNF-α的表达,以及促进肿瘤细胞凋亡有关。

芹菜素对人结肠癌细胞SW480增殖抑制作用的实验研究

目的:观察芹菜素对体外培养的人结肠癌SW480细胞的增殖抑制作用。方法:观察不同浓度[(10、30、60、90)μmol/L]的芹菜素在(24、48、72)h对人结肠癌SW480细胞增殖的影响:光学显微镜和电子显微镜观察芹菜素处理后人结肠癌SW480细胞形态结构的变化;运用四唑盐比色法(MTT)检测芹菜素对人结肠癌SW480细胞生长的影响。结果:经芹菜素处理的人结肠癌SW480细胞数量减少,部分细胞体积缩小,细胞膜完整,胞浆浓缩,核染色质固缩,细胞核碎裂,形成凋亡小体;MTT法检测显示芹菜素对人结肠癌SW480细胞的增殖有抑制作用,其抑制作用随着作用浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论:芹菜素对人结肠癌SW480细胞的增殖有抑制作用,是一种高效低毒的药物。

Au改性TiO2纳米复合物对人结肠癌细胞的光催化杀伤作用

提出了通过TiO2表面修饰纳米Au的方法来提高纳米TiO2光催化杀伤癌细胞的效率.采用化学还原法合成了Au改性的TiO2(Au/TiO2)纳米复合物,并研究了不同掺杂量(1wt%,2wt%,4wt%)的Au/TiO2对人结肠癌LoVo细胞的光催化杀伤效应.结果显示,Au的掺杂大大地提高了TiO2纳米粒子光催化杀伤结肠癌LoVo细胞的效率,而且Au掺杂量的高低影响Au/TiO2光催化杀伤癌细胞的效率,掺金量为2%的Au/TiO2对结肠癌LoVo细胞具有最高的光催化杀伤效率.在光强为1.8mW/cm2的紫外灯(λmax=365nm)下光照110min,50μg/mL掺金量为2%的Au/TiO2能够杀死所有的癌细胞,而同样浓度的TiO2只能杀死70%的癌细胞。

人结肠癌LoVo/Adr细胞耐药性与细胞内Ca^(2+)浓度的关系

背景及目的:基于在耐药细胞中Ca2+增高,且钙通道拮抗剂维拉帕米可逆转多药耐药性,推测Ca2+可能在耐药性中起一定的作用。本文的目的是探讨人结肠癌LoVo/Adr细胞耐药性与细胞内Ca2+浓度之间的关系。方法:以Fluo-3/AM标记LoVo和LoVo/Adr细胞内Ca2+,用共聚焦显微镜观察其浓度变化;采用MTT法检测维拉帕米逆转细胞耐药性的作用;用流式细胞仪检测细胞内阿霉素的浓度。结果:LoVo细胞和LoVo/Adr细胞Fluo-3/AM的荧光强度分别为850.45和1495.88;加用5mg/L维拉帕米后,LoVo细胞和LoVo/Adr细胞荧光强度分别为813.25和1284.14。说明耐药株LoVo/Adr细胞内Ca2+浓度显著高于敏感株LoVo细胞,维拉帕米不能明显影响LoVo/Adr细胞内Ca2+浓度;但5mg/L维拉帕米可显著增加LoVo/Adr细胞内阿霉素的浓度,对阿霉素和长春新碱的增敏倍数分别是8.85倍和5.31倍。结论:细胞内Ca2+浓度增高可能是耐药株LoVo/Adr的表型特征之一,但与该细胞株耐药性无直接关系。

大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖影响及作用机制研究

目的:探讨大蒜素对体外培养结肠癌HT29细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对HT29细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达。结果:MTT显示大蒜素能抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示10μg/ml大蒜素可明显诱导HT29细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期;可降低癌基因蛋白Bcl表达,而促进Bax表达。结论:大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖具有抑制作用,可能与细胞周期阻滞和凋亡相关蛋白表达有关。

Caco-2单层细胞模型及其在药学中的应用

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钙通道活性与胃泌素促人结肠癌细胞增殖间关系的研究

目的 探讨钙通道活性在胃泌素促人结肠癌细胞增殖中的作用。方法 运用流式细胞仪检测细胞内游离钙离子水平 ,MTT比色法测定细胞增殖情况。结果 2 5× 10 -6M的五肽胃泌素 (PG)可以引起HT2 9细胞内游离钙离子水平明显升高 (P <0 0 1) ,钙通道阻滞剂nifedipine(10 -5M)可以使PG引起的钙离子水平升高幅度明显下降 (P <0 0 1)。同时可以部分抑制PG促增殖作用 (P <0 0 5 )。钙通道激动剂Bayk86 4 4 (10 -6M)可以明显升高细胞内钙离子水平 (P <0 0 1)。并能促进HT2 9细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,与PG的促增殖作用相比无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 钙通道作为调节细胞内钙离子变化的主要途径 ,在调控PG促HT2

PI_3K-Akt信号通路阻抑对结肠癌细胞LS-174T顺铂耐药逆转机制的研究

目的:观察抑制磷脂酰肌醇3激酶和(或)蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路对顺铂耐药结肠癌细胞株LS-174T细胞核中Y-Box结合蛋白1(Y-Box binding protein-1,YB-1)的活性的影响及肿瘤细胞顺铂耐药性的改变.方法:采用顺铂(cisplatin,DDP)药物浓度递增法、间歇性作用的体外诱导法建立人结肠癌的顺铂耐药细胞系LS-174T/DDP,药物Ly294002阻断PI3K-Akt信号通路传导后,采用Western Blot方法检测耐药肿瘤细胞磷酸化Akt表达水平,电泳迁移改变分析(EMSA)方法检测其核中转录因子YB-1活性的改变,MTT法检测DDP对细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:阻断PI3K-Akt信号通路后,顺铂耐药细胞株中磷酸化Akt蛋白表达水平显著下降,同时其细胞核中YB-1的活性明显降低,且细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P<0.01).结论:阻断PI3K-Akt信号通路能够提高顺铂耐药细胞株对顺铂的敏感性,PI3K-Akt信号通路可能通过激活YB-1在肿瘤顺铂耐药机制中发挥重要作用.

人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11的构建及其生物学特性探讨

目的:建立耐伊立替康(CPT-11)的人结直肠癌细胞株(HT-29/CPT-11),并研究其生物学特性。方法:采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/CPT-11;CCK-8法检测CPT-11对亲本细胞HT-29和耐药细胞株HT-29/CPT-11细胞的半数抑制率(IC50);绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞术分析细胞周期分布;RT-PCR检测HT-29/CPT-11和HT-29细胞MDR-1 mRNA的表达。结果:(1)成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,耐药指数为6.51。(2)HT-29/CPT-11耐药细胞株倍增时间较原代细胞HT-29延长[分别为(41.29±1.69)h和(27.12±2.73)h,P<0.05]。(3)流式细胞术检测细胞周期结果显示,耐药细胞株HT-29/CPT-11 G1期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05)。(4)耐药细胞HT-29/CPT-11的MDR-1 mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为1.086±0.054和0.416±0.02(P<0.05)。结论:成功构建了人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,为下一步研究耐药机制奠定实验基础。

钙通道阻滞剂对胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响

目的 观察硝苯地平 ( Nif)对五肽胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法 采用流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度水平 (〔 Ca2 +〕i) ,结合 MTT比色法测定细胞增殖情况。结果 2 .5× 10 - 6mol/ L的五肽胃泌素 ( PG)作用于 HT2 9细胞后 ,可引起〔 Ca2 +〕i 水平迅速升高 ( P<0 .0 1)。 10 - 5 mol/ L的 Nif可使 PG引起的〔 Ca2 +〕i 水平升高幅度明显降低 ( P<0 .0 1) ,同时 10 - 5～ 10 - 6mol/ L 的 Nif可以抑制 PG促 HT2 9细胞增殖的作用 ( P<0 .0 5 )。结论 Nif通过抑制胞外 Ca2 +内流 ,阻止〔 Ca2 +〕i 水平升高 ,是其抑制 PG促 HT2

粉防己碱对人结肠癌细胞增殖的影响

目的 :观察粉防己碱对人结肠癌细胞 H T2 9增殖的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法 :采用流式细胞仪分析细胞周期变化 ,并测定细胞内游离钙离子浓度水平 ;MTT比色法测定细胞增殖情况。结果 :2～ 10 μg/m L 的粉防己碱 (Tet)能明显抑制 HT2 9细胞的增殖 (P<0 .0 5 ) ,其半数抑制浓度 (IC5 0 )约为 8μg/m L。 8μg/m L 的 Tet可以使细胞内游离钙离子浓度 (〔Ca2 +〕i)水平明显降低 (P<0 .0 1)。不同浓度的 Tet可使 HT2 9细胞 C1 期或 G2 + M期明显增加 ,S期细胞明显减少 (P<0 .0 1)。结论 :粉防己碱通过抑制钙离子信号传递途径 ,使细胞周期进行受阻 ,可能是其抑制 HT2 9细胞增殖的一个主要机制。

黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的:研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法:CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果:与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05或P<0.01),抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高(P<0.05或P<0.01),Caspase-3和Caspase-8活性增强(P<0.05或P<0.01),并呈量效依赖关系。结论:黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。

塞来昔布抑制人结肠癌细胞COLO205增殖及对COX-2、MMP-9mRNA表达影响的体外实验研究

目的研究塞来昔布在体外对人结肠癌细胞COLO205生长增殖及对环氧化酶2(COX-2)、金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达的影响。方法体外培养人结肠癌细胞COLO205,分组为正常对照组和塞来昔布干预组,MTT法检测正常对照组和塞来昔布组抑制率,塞来昔布在不同时间且相同浓度的条件下,不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,测得抑制率并算得半抑制浓度(IC50)值;RT-PCR检测COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同浓度的塞来昔布干预结肠癌COLO205细胞,分别在24 h,48 h,72 h测算IC50结果为:96.620±9.044μmol/L、71.561±5.706μmol/L、58.982±11.069μmol/L,塞来昔布浓度提高和干预时间延长,结肠癌COLO205细胞活力下降。RT-PCR结果显示:正常对照组与塞来昔布干预组COX-2 mRNA灰度值分别为:0.832±0.012,0.113±0.001,干预组塞来昔布干预细胞的COX-2mRNA表达降低,所应显示的条带消失,无表达率,两组比较差异有显著性(t=18.051,P=0.000);正常对照组与塞来昔布干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.756±0.050,0.171±0.001,干预组MMP-9 mRNA表达明显降低,条带消失,无mRNA表达,两组比较差异有显著性(t=17.286,P=0.001)。结论体外实验表明:塞来昔布抑制结肠癌COLO205细胞增殖,通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现抗肿瘤作用。

活化Notch1信号下调Wnt信号抑制结肠癌细胞增生

目的构建重组反转录病毒载体pCLNRX-ICN,研究过度活化Notch1信号对人结肠癌细胞HT-29细胞增生的影响作用及机制。方法将人Notch1基因胞内区(ICN)克隆至反转录病毒载体pCLNRX中,与包装载体pCL-10A1共转染293细胞,制备重组病毒上清,检测病毒效价。MTT法检测稳定表达外源性ICN对细胞生长的影响,RT-PCR及Western Blot检测c-Myc、β-catenin表达水平。结果成功构建重组反转录病毒载体pCLNRX-ICN,通过共转染获得了具有较高效价的重组反转录病毒。通过表达外源性ICN而过度活化Notch1抑制HT-29的生长,并下调Wnt信号途径关键调控分子β-catenin的蛋白表达水平,但对β-catenin的mRNA水平未见明显影响。而且过度活化Notch1对c-Myc的蛋白及mRNA表达水平均无明显影响。结论过度活化Notch1信号部分通过下调Wnt信号而抑制HT-29的生长,且该作用不依赖c-Myc的抑制。

姜黄素体外抑制人结肠癌癌细胞Caco-2增殖

目的研究姜黄素在体外对人结肠癌细胞Caco-2生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测姜黄素在相同浓度下、不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制量(IC50)值;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA的表达影响。结果 MTT:相同干预浓度姜黄素抑制人结肠癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为:205.737±14.929μmol/L、102.023±6.809μmol/L、86.627±9.005μmol/L;RT-PCR:人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及姜黄素干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.786±0.101、0.310±0.046,P<0.05;COX-2 mRNA灰度值分别为0.830±0.173、0.063±0.035,(P<0.05)。结论姜黄素可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来抑制结肠癌细胞Caco-2增殖。

γ-生育三烯酚对体外培养的人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用

为了探讨γ-生育三烯酚对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,采用MTT、分裂指数、集落形成、形态学观察法测定细胞活力,Hoechst 33258荧光染色法和DNA ladder法检测检测细胞凋亡。结果表明:γ-生育三烯酚能够显著抑制HT-29细胞的增殖(P<0.05),且存在剂量-效应关系,其48 h半数抑制浓度(IC 50)为35.45μmol/L;形态学观察和DNA ladder结果显示受试物能够诱导HT-29细胞凋亡。γ-生育三烯酚对人结肠癌HT-29细胞具有生长抑制作用,此作用可能与其凋亡诱导效应有关。

熊果酸抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导凋亡的研究

目的探讨熊果酸对人结肠癌HT-29细胞的抗增殖和凋亡诱导作用。方法采用MTT法观察熊果酸对HT-29细胞增殖作用的影响;Hoechst 33258染色观察不同浓度熊果酸诱导的凋亡情况;流式细胞术检测熊果酸对细胞周期的影响。结果熊果酸对HT-29细胞具有明显的增殖抑制作用;20 mol/L、40 mol/L的熊果酸分别作用于HT-29细胞24 h后,较多细胞呈凋亡特征性改变;熊果酸可将HT-29细胞阻滞于G1期,随着熊果酸浓度的增加,细胞凋亡率也相应增加。结论熊果酸对HT-29细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导凋亡的机制与熊果酸阻滞HT-29细胞的细胞周期有关。

异鼠李素诱导HCT116细胞自噬

目的研究中华补血草[Limonium sinense(Girard)Kuntz]中主要抗癌活性成分之一异鼠李素诱导人结直肠癌(HCT116)细胞自噬的机理。方法采用四唑盐比色法(MTT)检测异鼠李素对HCT116细胞的抑制作用,单丹尸磺酰胺(MDC)染色法检测自噬小泡的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3的表达情况。结果异鼠李素明显抑制HCT116细胞的增殖,且呈剂量依赖性效应。异鼠李素处理24 h后,自噬小泡形成增多,LC3蛋白表达增强。3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理能够明显降低异鼠李素对肿瘤细胞的抑制作用。结论实验结果显示中华补血草中的异鼠李素可以诱导HCT116细胞发生自噬,导致细胞死亡。