Are human dental papilla-derived stem cell and human brain-derived neural stem cell transplantations suitable for treatment of Parkinson’s disease?

Transplantation of neural stem cells has been reported as a possible approach for replacing impaired dopaminergic neurons. In this study, we tested the efficacy of early-stage human dental papilla-derived stem cells and human brain-derived neural stem cells in rat models of 6-hydroxydopamine-induced Parkinson＇s disease. Rats received a unilateral injection of 6-hydroxydopamine into right medial forebrain bundle, followed 3 weeks later by injections of PBS, early-stage human dental papilla-derived stem cells, or human brain-derived neural stem cells into the ipsilateral striatum. All of the rats in the human dental papilla-derived stem cell group died from tumor formation at around 2 weeks following cell transplantation. Postmortem examinations revealed homogeneous malignant tumors in the striatum of the human dental papilla-derived stem cell group. Stepping tests revealed that human brain-derived neural stem cell transplantation did not improve motor dysfunction. In apomorphine-induced rotation tests, neither the human brain-derived neural stem cell group nor the control groups （PBS injection） demonstrated significant changes. Glucose metabolism in the lesioned side of striatum was reduced by human brain-derived neural stem cell transplantation. [18F]-FP-CIT PET scans in the striatum did not demonstrate a significant increase in the human brain-derived neural stem cell group. Tyrosine hydroxylase （dopaminergic neuronal marker） staining and G protein-activated inward rectifier potassium channel 2 （A9 dopaminergic neuronal marker） were positive in the lesioned side of striatum in the human brain-derived neural stem cell group. The use of early-stage human dental papilla-derived stern cells confirmed its tendency to form tumors. Human brain-derived neural stem cells could be partially differentiated into dopaminergic neurons, but they did not secrete dopamine.

人牙乳头细胞内Smad4表达的免疫组化研究

目的 :观察转化生长因子 - β超家族的细胞内信号转导分子Smad4在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程。从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,用转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)和骨形成蛋白 - 2 (recombinanthu manbonemorphogennticprotein ,rhBMP - 2 )刺激培养的细胞 ,免疫组化观察。结果 :TGF - β1和rhBMP - 2实验组胞核内均可见Smad4蛋白强阳性表达 ,但胞浆内未见Smad4蛋白阳性表达 ;对照组胞浆内可见Smad4蛋白阳性表达 ,核内未见阳性表达。结论 :观察到Smad4在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程 ,提示Smad4可能同时参与TGF - βs和BMPs的细胞内信号转导过程。TGF - βs和BMPs在牙齿发育中信号传递可能都是通过Smad4的信号传导途径实现的。

Smad2蛋白在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程

目的 :观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达 ,以及Smad2蛋白在转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)信号转导中的作用。 方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,用TGF -β1和骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein ,BMP2 )刺激培养的细胞 ,免疫组化观察。结果 :TGF - β1和BMP2刺激组均可见Smad2蛋白表达 ,但与对照组相比无明显差异。TGF - β1组可见Smad2从胞浆转位至核内聚集 ,BMP2组未见此作用。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad2蛋白的表达 ,Smad2能特异地转导TGF - β1信号至核内发挥作用 ,提示TGF - β1调控成牙本质细胞分化的作用可能是通过Smad2信号途径实现的。

离体培养人牙乳头细胞的消化法和贴壁法比较

目的：建立体外培养人牙乳头细胞的方法，比较酶消化法和组织块贴壁法对培养结果的影响。方法：分离合法堕胎的８月龄男胎的乳牙牙乳头组织，按Ａ、Ｃ区和Ｂ、Ｄ区将组织分成两组。一组用酶消化法获取细胞，即０．２％胰酶和０．０２％ＥＤＴＡ在３７℃下消化２０ｍｉｎ，另一组采用常规组织块贴壁法。结果：在酶消化法组中原代细胞按形态分为三种：梭形、星形纤维细胞样和内皮样。内皮细胞在贴壁培养组和继代的酶消化法组极少观察到。两种方法获得的细胞在传代和生长特性等方面相似。结论：酶消化法在来源组织丰富时是一种较好的原代培养方法，人牙乳头细胞在体外的成功培养将给人们研究该细胞提供一个重要的工具。

rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化

目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant hu-man bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2％FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激。免疫组化观察。结果:TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smadl蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smadl从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用。结论:首次观察到Smadl基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smadl转位至核内引起基因表达实现的。

Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达及其意义的探讨

目的 :观察转化生长因子 - β超家族特异的细胞内信号转导基因Smad4在人牙乳头细胞内的表达 ,及其在转化生长因子 - β1(TGF - β1)和骨形成蛋白 - 2 (BMP - 2 )作用下的变化 ,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,用TGF - β1和BMP - 2刺激培养的细胞 ,分别从刺激前后的细胞中提取总RNA和总蛋白 ,采用Northern和Western印迹杂交方法 ,从mRNA和蛋白水平观察Smad4基因的表达及变化。结果 :从mRNA和蛋白水平观察到Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达。但在TGF - β1和BMP - 2作用下表达无变化。 结论 :研究证实Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达 ,Smad4基因在信号转导过程中无量的变化 。

TGF-β对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响

目的： 探讨ＴＧＦ－ β对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响。方法：采用ＭＴＴ法和流式细胞仪观察ＴＧＦ－β对人牙乳头细胞增殖和细胞周期的影响。结果：５０μｇ／Ｌ 组显著刺激人牙乳头细胞增殖（Ｐ＜ ０．０５），Ｇ１ ％ 显著降低，Ｓ％ 明显升高（Ｐ＜ ０ ．０１），反映细胞增殖活力的增殖指数ＰｒⅠ值（Ｓ＋ Ｇ２ Ｍ） 也明显增高（ Ｐ＜０ ．０１）。结论：ＴＧＦ－β可能通过促进人牙乳头细胞增殖参与牙胚发育和牙髓损伤修复。

BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达的变化

目的 :观察人牙乳头细胞内Smad1mRNA的表达及在BMP2作用下 ,细胞内Smad1mRNA的表达变化 ,探讨人牙乳头细胞内Smad1信号途径在BMP2调控牙乳头细胞分化中的作用。方法 :原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理后 ,提取总RNA ,采用Northernblot法 ,从mRNA水平观察Smad1基因的表达及含量变化。结果 :从mRNA水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达 ,但在BMP2作用 6、12、2 4h后 ,Smad1mRNA表达量无显著变化。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径 ,牙乳头细胞内Smad1mRNA表达量不受BMP2调控。

1,25(OH)_2D_3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K表达和矿化能力的影响

目的 :研究 1,2 5 (OH) 2 D3 对培养人牙乳头细胞Calbindin -D2 8K(CaB)表达和矿化能力的影响。方法 :用 10 -8mol/L 1,2 5 (OH) 2 D3 矿化液处理长期培养的第 2 8天细胞 2 4h ,用放射免疫和免疫组化方法 ,观察CaB表达和碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙蛋白 (OC)的变化。同位素示踪方法观察 1,2 5 (OH) 2 D3 对胞外基质4 5Ca2 + 的影响。结果 :加入1,2 5 (OH) 2 D3 后ALP活性约为对照组的 4倍 ;OC含量约为对照组的 1.5倍。CaB在培养 2 8d牙乳头细胞及其胞外基质中表达 ,而在培养 14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。 1,2 5 (OH) 2 D3 可加强CaB表达 ,并使胞外基质对4 5Ca2 + 摄取量增加 1.5倍。结论 :1,2 5 (OH) 2 D3 有促进人牙乳头细胞矿化作用 ,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性 ,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成 ,增加基质对Ca2 + 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一 ,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca2 + 聚集和直接贮存的作用。

激素和生长因子对人牙乳头细胞增殖的影响

目的：探讨激素和生长因子对体外培养人牙乳头细胞增殖的影响。方法：用ＭＴＴ法观察不同浓度的１，２５－二羟基维生素Ｄ３、胰岛素和表皮生长因子对离体培养的人牙乳头细胞生长的影响。结果：在１０－９～１０－７ｍｏｌ／Ｌ浓度范围时，１，２５－二羟基维生素Ｄ３对细胞增殖具有抑制作用，浓度越高，作用时间越长，抑制作用越强。胰岛素和生长因子对细胞增殖有一定促进作用，与浓度成正相关，分别在加药后第３天、４天作用最强。结论：在一定浓度和作用时间内。

人牙乳头细胞内Smad5蛋白表达的免疫组化研究

目的 :观察Smad5蛋白在体外原代培养的人牙乳头细胞内的表达及其在转化生长因子 - β超家族信号转导中的作用。方法 :原代培养的人牙乳头细胞 ,分别以骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein -2 ,BMP - 2 )和转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)刺激 ,免疫组化检测Smad5的表达 ,图像分析仪半定量。结果 :人牙乳头细胞 (空白对照组 )胞浆内可见Smad5阳性表达 ,胞核内未见阳性表达 ;BMP- 2实验组胞核内Smad5强阳性表达 ,胞浆内为弱阳性表达 ;TGF - β1实验组细胞胞浆Smad5阳性 ,胞核未见表达。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad5的表达 ,Smad5能转导BMP - 2信号至核内发挥作用 ,但不能转导TGF -β1信号 ,提示BMP - 2在牙齿发育过程中信号传递可能是通过Smad5的信号转导途径实现的。

人牙乳头细胞Smad1基因MH2结构域的cDNA的分子克隆

目的 :从人牙乳头细胞内克隆骨形成蛋白 (BMP)细胞内信号转导基因 Smad1的功能性结构域— MH2结构域。方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,从培养的细胞中提取总 RNA,逆转录合成 c DNA第 1条链 ;设计上下游引物 ,进行 RT- PCR,扩增 Smad1基因 MH2结构域的基因片段 ;将所获得的基因片段定向插入 PUC19载体 ;转化大肠杆菌 JM10 9,挑选阳性克隆 ,鉴定后进行序列测定。结果 :获得的 Smad1MH2 结构域的 c DNA片段大小为 44 4bp,并且成功构建 PU C19/ MH2重组质粒。结论 :人牙乳头细胞内存在 Smad1信号转导途径 ,BMP调控人牙乳头细胞分化可能是通过

TGF-β对人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶的影响

目的： 探讨ＴＧＦ－ β对人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ） 的影响。方法：采用酶动力学方法，测定不同浓度的ＴＧＦ－ β在不同时间内对体外培养的人牙乳头间充质细胞ＡＬＰａｓｅ 的影响。结果：５μｇ／Ｌ 组促进细胞内ＡＬＰａｓｅ 活性；５０μｇ／Ｌ组抑制细胞内ＡＬＰａｓｅ 活性；ＴＧＦ－ β不影响细胞外ＡＬＰａｓｅ 活性。结论：ＴＧＦ－ β可调节人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性，在牙乳头间充质细胞分化和矿化过程中可能具有重要意义。

骨形成蛋白-2对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量的影响

目的 观察人牙乳头细胞内Smad1蛋白的表达及骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein - 2 ,BMP2 )对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量影响。方法 原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理 6h、12h、2 4h、48h后 ,提取总蛋白质 ,采用WesternBolt法 ,从翻译水平观察Smad1基因的表达变化。结果 从翻译水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达 ,但在BMP2作用 48h内 ,Smad1蛋白表达量无显著变化。结论 人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径 ,牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量不受BMP2影响。

人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :观察人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法 :分对照组和实验组 ,对照组是转染不含目的基因的空白质粒 pcDNA3的培养上清 ,实验组是转染pcDNA3 -hDSP重组质粒的培养上清。取第 5代人牙乳头间充质细胞 ,接种于 96孔板 ,对照组 6孔 ,实验组 10孔 ,用MTT法检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖的影响 ,用碱性磷酸酶检测试剂盒检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果 :hDSP能明显抑制体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖 (P <0 .0 1) ,但能促进细胞内和培养上清中碱性磷酸酶的分泌 (P <0 .0 1)。结论

激素和生长因子对人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨激素和生长因子对人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：采用改良酶动力学的方法，测定不同浓度的１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、胰岛素、ＥＧＦ及ＴＧＦ－β在不同时间内对体外培养人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对酶活性有增强作用，并与其浓度及作用时间呈正相关关系；胰岛素、ＥＧＦ和ＴＧＦ－β对酶有抑制作用，随作用时间延长，抑制越明显。结论：激素和生长因子对人牙乳头细胞的碱性磷酸酶作用不同。

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

目的 :观察甲状旁腺激素 (parathyroidhormone ,PTH)对体外培养的人牙乳头细胞 (humandentalpapillacells,HDPC)牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)合成分泌的影响。方法 :原代方法培养出人牙乳头细胞 ,用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第 5代人牙乳头细胞 ,免疫组化观察结果 ,并采用图像分析的方法 ,进行半定量分析。结果 :PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达 ,诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内 ,呈一定的浓度依赖性 ,0 .3μg/mL为刺激最佳浓度。 结论 :PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1,对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用 ,可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一。

hOP-1全长基因克隆及真核表达载体的构建

目的 证实人牙乳头细胞中OP 1的表达 ,获得hOP 1全长基因及其高效真核表达载体。方法 提取人牙乳头细胞总RNA ,反转录合成cDNA ,以特异性引物扩增hOP 1全长基因并克隆入T载体 ,筛选阳性克隆进行序列测定后。构建高效真核表达载体pCI OP 1并筛选鉴定。结果 PCR扩增得到一特异性的约 13 0 0bp的片段 ,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致。构建的pCI OP 1质粒 ,用于基因转染纯度较好。结论 人牙乳头细胞中首次克隆到hOP 1全长基因 。

BMP2对人牙乳头细胞c-fos和c-jun诱导作用的研究

目的:探讨生长因子BMP2对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的诱导作用。方法:采用免疫组织化学和图像分析的方法,观察特定浓度的BMP2在不同时间点对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的影响。结果:不加刺激时人牙乳头细胞c-fos、c-jun在胞浆阴性表达,胞核不表达或弱阳性表达。200ng/mLBMP2刺激30min后,c-fos和c-jun在胞浆胞核均出现表达,但较稀疏;刺激1h胞核胞浆内表达明显增强,浆内表达较核内弱;2hc-fos和c-jun在细胞核内表达最强,12h胞核着色明显变浅,24h基本已无阳性着色。结论:生长因子BMP2可诱导体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达,整个过程约持续24h;c-fos和c-jun的表达存在核转位现象,提示c-fos和c-jun参与了BMP2的信号转导过程。

激素和生长因子对人牙乳头细胞骨钙素合成分泌的影响

目的：探讨激素和生长因子对人牙乳头细胞骨钙素合成分泌的影响；方法：采用放射免疫的方法进行测定。结果：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对骨钙素的合成分泌具有明显增强作用，胰岛素、ＥＧＦ对其合成有促进作用，但较弱。而ＴＧＦ－β抑制骨钙素的合成分泌。结论：人牙乳头细胞合成分泌骨钙素受这些因子不同程度的影响。