西安市采暖季与非采暖季PM2.5染毒的人胚肺细胞基因差异表达研究

目的寻找与大气污染致病相关的相关基因,为阐明大气污染致病的生物学机制提供科学依据。方法采用mRNA斑点杂交鉴定技术,克隆经采暖季≥75μg/m3 PM2.5与非采暖季<75μg/m3 PM2.5染毒的WI-38人胚肺细胞,分析其间的基因表达差异。放免法测定炎性因子TNF-α、IL-2、IL-6和IL-8。结果与对照组比较,PM2.5>100μg/mL染毒24h后,WI-38人胚肺细胞细胞因子TNF-α、IL-6和IL-8明显升高,IL-2明显减低(P<0.05)。不同浓度PM2.5处理的WI-38人胚肺细胞间差异表达的基因片段,可见48份基因样本在350bp处出现清晰条带;该48份基因样本经斑点杂交后,Tester cDNA杂交的48个斑点中,41份可见黑褐色斑点,而同样样本与Driver cDNA杂交的该48份样本均未见明显显色。结论 PM2.5能诱导WI-38人胚肺细胞产生炎性损伤,≥75μg/m3 PM2.5染毒的WI-38人胚肺细胞存在明显的基因损伤。

烹调油烟冷凝物诱导人胚肺细胞恶性转化研究

为探讨和评价烹调油烟对人体潜在的致癌危险性 ,运用人胚肺二倍体细胞转化系统 ,检测烹调油烟冷凝物对细胞的转化作用以及转化细胞的生物学特性。结果 :各剂量的烹调油烟冷凝物均可诱导细胞产生典型转化灶 ,剂量反应关系明显 (r= 0 973 9) ,表现出恶性细胞特征。提示烹调油烟对人体具有潜在致癌危险性。

石棉表面改性对石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度改变的抑制作用

为了探讨研究温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠预处理的温石棉对人胚肺(HEL)细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响。用Flou3/AM标记体外培养的HEL细胞内Ca2+后,将不同浓度的温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡过的温石棉与HEL细胞作用1h,荧光分光光度计测定细胞内[Ca2+]i。结果显示,20、40、80μg/ml温石棉单独作用于HEL细胞1h,可使HEL细胞内[Ca2+]i浓度分别升高3.0%、53.1%和116.7%,且具有明显的剂量-效应关系(r=0·976,P=0·024)。经三种化合物预处理的温石棉组HEL细胞内[Ca2+]i浓度均明显低于未处理温石棉组。得出结论,温石棉可致人胚肺细胞内游离钙离子浓度升高,但用三种化合物预处理温石棉,均可抑制温石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度的升高。

几种化合物对石棉诱导人胚肺细胞产生超氧阴离子的抑制作用

用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或硒酸钠溶液浸泡温石棉１ 小时后，再将其与人胚肺（ＨＥＬ） 细胞共同孵育，测定培养液中超氧阴离子（Ｏ－２ ） 含量。结果显示，温石棉可诱导ＨＥＬ细胞产生Ｏ－２ 。但与未处理温石棉组相比，经３ 种化合物预处理的温石棉所致ＨＥＬ细胞产生的Ｏ－２ 量明显降低，其抑制率随化合物浓度的增加而增高，呈一定的剂量依赖性。表明用上述３ 种化合物预处理温石棉，均可抑制其诱导ＨＥＬ细胞产生Ｏ－２ 。

红景天素抗老化作用的实验研究

本实验以体内、外相结合的研究方法,探讨了药用植物红景天提取物—红景天素对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)和大鼠肝脏的影响,观察了红景天素对2BS细胞生长和增殖的影响,以及对大鼠肝脏细胞形态和组化改变和肝组织中过氧化脂质(LPO)与肝血清超氧化物歧化酶(SOD)的变化。实验结果是红景天素能促进2BS细胞生长和增殖,降低大鼠肝组织LPO及肝细胞内脂褐素含量及酸性磷酸酶活性(ACPase)。结果证明红景天素有延缓细胞老化抗退变作用。

温石棉的遗传毒性及三种化合物的阻断作用

为了寻求一种理想的石棉表面改性剂，本研究观察了柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠对温石棉诱导人胚肺（ＨＥＬ）细胞染色体改变的影响。结果显示，温石棉可致ＨＥＬ细胞染色体畸变率和姊妹染色单体交换率升高。经三种化合物预处理的温石棉，其所诱导的ＨＥＬ细胞的染色体畸变率和姊妹染色单体交换率均低于未处理温石棉组。提示，用三种化合物预处理温石棉，均可降低温石棉对细胞染色体的损伤作用。

石棉表面改性对石棉所致人胚肺细胞毒性及超微结构改变的影响

目的研究温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠预处理的温石棉对人胚肺(HEL)细胞存活率及超微结构的影响。方法用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉1 h后,再将其与HEL细胞共同孵育,测定细胞存活率及观察细胞超微结构。结果不同浓度的温石棉染毒4 h或24 h,均可使人胚肺细胞的存活率降低,而且其降低程度随石棉浓度的增加而增大,呈一定的剂量—效应关系。经三种化合物预处理的温石棉组HEL细胞存活率高于未处理温石棉组,怛差异无统计学意义。从细胞超微结构的改变看,经三种化合物处理的石棉组均轻于单纯的石棉染毒组。结论温石棉染毒可使人胚肺细胞的存活率降低,致使细胞超微结构发生改变,怛用三种化合物预处理温石棉,均可减轻温石棉的细胞毒性。

三种化合物对石棉诱导人胚肺细胞产生过氧化氢抑制作用的比较研究

用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土及亚硒酸钠溶液浸泡温石棉１小时后，再将其与人胚肺（ＨＥＬ）细胞共同孵育，测定培养液中的过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）含量。结果显示，未经处理的温石棉可诱导ＨＥＬ细胞产生Ｈ２Ｏ２，并呈明显的剂量反应关系。与未处理温石棉组相比，经３种化合物预处理的温石棉所致ＨＥＬ细胞产生的Ｈ２Ｏ２量明显降低，其抑制率随化合物浓度的增加而增高，呈一定的剂量依赖性。结果表明，用３种化合物预处理温石棉，均可抑制其诱导ＨＥＬ细胞产生Ｈ２Ｏ２。

三种化合物对温石棉促人胚肺细胞增殖作用的影响

为了探讨几种化合物对温石棉促人胚肺（ＨＥＬ）细胞增殖作用的影响，用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉１小时后，再将其与人胚肺细胞共同孵育，通过测定［３Ｈ］ＴｄＲ掺入量，来了解人胚肺细胞的增殖状况。结果显示，２．５～１０μｇ／ｍｌ的温石棉、时间作用在２４小时之内，或２０～８０μｇ／ｍｌ温石棉、时间作用在６小时之内均可促使人胚肺细胞增殖。与未处理温石棉组相比，经三种化合物处理的温石棉其促细胞增殖作用明显下降。提示，采用三种化合物溶液浸泡温石棉。

三种化合物对石棉致HEL细胞增殖周期及c-fos癌基因转录活性改变的影响

目的寻求一种适宜的石棉表面改性剂。方法利用流式细胞技术测定细胞周期以及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术测定ｃｆｏｓ癌基因转录活性，观察几种化合物对温石棉促人胚肺（ＨＥＬ）细胞增殖作用的影响。结果将ＨＥＬ细胞与温石棉共同孵育后，其Ｓ期细胞所占比例增加，ｃｆｏｓ癌基因的转录活性也明显增强。用３种化合物预处理的石棉组，其Ｓ期细胞所占比例以及ｃｆｏｓ癌基因的转录活性均低于未处理石棉组。结论用上述３种化合物预处理石棉，均可不同程度地抑制石棉的促细胞增殖作用。

甲醛与苯系物对人胚肺细胞联合毒性的作用

目的探讨甲醛及苯系物对人胚肺细胞的联合毒性及联合毒作用类型。方法以不同浓度毒物及其混合物对人胚肺二倍体细胞染毒,采用MTT法测各浓度组人胚肺细胞存活率,根据线性回归法求出各毒物及其混合物半数致死浓度(OLC50),以Finney法求出各毒物及其混合物预计半数致死浓度(PLC50),根据预计半数致死浓度与实际半数致死浓度的比值Q判断各毒物联合毒作用类型。结果4种化合物对人胚肺细胞的LC50分别为甲醛0.267×10-3mmol/mL、苯0.086 mmol/mL、甲苯0.081 mmol/mL、二甲苯0.090 mmol/mL。甲醛与苯系物混合染毒Q值在0.5到2.6之间,苯与甲苯、二甲苯混合染毒Q值<0.5,甲苯、二甲苯混合染毒Q值>2.6。结论4种化合物毒性大小顺序是甲醛>苯>甲苯>二甲苯,与其体外毒性大小顺序基本一致;甲醛与苯系物之间联合毒性呈相加作用,苯可以拮抗甲苯、二甲苯的毒性作用,甲苯、二甲苯之间为协同作用。

几种化合物对温石棉诱导人胚肺细胞蛋白激酶C活性的影响

为了探讨几种化合物对温石棉诱导人胚肺(HEL)细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响,该研究用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉1小时后,再将其与HEL细胞共同孵育24小时,测定了HEL细胞胞浆和胞膜中PKC的活性。其结果显示:随着石棉剂量的增加,HEL细胞胞浆和胞膜中的PKC活性逐渐升高,均呈明显的剂量依赖性;经3种化合物预处理的石棉,其所诱导的HEL细胞胞浆和胞膜中的PKC活性均明显低于未处理温石棉组。笔者提示:温石棉可能通过改变细胞内PKC的活性进一步促进肿瘤的发生;用3种化合物预处理温石棉,均可抑制温石棉对HEL细胞PKC活性的诱导作用。

香烟烟雾对2种肺细胞的DNA损伤与修复

目的探讨经香烟烟雾溶液染毒的人正常肺间质细胞和人肺腺癌细胞的DNA损伤及其修复效应。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF)和人肺腺癌A549细胞,以二甲基亚砜(DMSO)和磷酸缓冲液(PBS)作为吸收液,采集香烟主流烟雾。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定香烟烟雾-DMSO吸收液和香烟烟雾-PBS吸收液(分别简称DMSO烟液和PBS烟液)的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的毒性(分别以DMSO和PBS为阴性对照),以无明显细胞毒性的浓度进行彗星实验(分别以DMSO和PBS为阴性对照,以重铬酸钾为阳性对照),测定细胞的DNA损伤及修复情况。结果DMSO烟液原液及其1/2稀释液染毒的细胞存活率低于80%,而PBS烟液染毒的细胞存活率均高于80%。DMSO烟液的1/4、1/8、1/16倍稀释液以及PBS烟液的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤与阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系。DNA损伤在两种细胞间差异无统计学意义(P>0.05),但DMSO烟液所致的DNA损伤高于PBS烟液(P<0.01)。细胞在去除受试物后培养30min时开始修复,随着修复时间的延长,拖尾细胞数减少,DNA迁移长度缩短(P<0.05),且A549细胞修复得更快(P<0.05)。结论DMSO烟液的细胞毒性和遗传毒性均高于PBS烟液。香烟烟雾对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤差异不明显,A549细胞的DNA损伤修复能力较HLF细胞强。

人巨细胞病毒对细胞周期调控靶点-P^(53)的影响

目的了解HCMV对细胞周期调控靶点P53的影响。方法建立体外HCMV感染人胚肺成纤维细胞(HEL)模型,(1)倒置显微镜观察不同时间下各组HEL的病变效应。(2)S-P免疫组化法检测P53蛋白的表达。(3)FQ-PCR法检测HEL细胞内HCMVDNA拷贝数。结果(1)HCMV感染使HEL细胞发生病变,细胞内HCMVDNA拷贝数随时间的延长逐渐增加。(2)S-P免疫组化结果提示HCMV感染使HEL细胞P53蛋白的水平升高。结论HCMV的感染改变了细胞内P53的水平,可能影响其在细胞周期中的正常功能,营造有利于病毒复制的环境。

胡麻油烟凝聚物诱导人胚肺二倍体细胞恶性转化作用

背景与目的：研究胡麻油烟对人体潜在的致癌危险性。材料与方法：以胡麻油烟凝聚物（SOFA）作为受试物染毒人胚肺二倍体细胞，建立体外恶性转化实验系统，对转化细胞进行ConA凝集实验、软琼脂培养实验以及裸鼠体内致瘤实验，观察并检测细胞是否发生恶性变。结果：实验剂量范围内的SOFA（25～400μg／ml）能够诱导人胚肺二倍体细胞形成细胞恶性转化灶，转化灶细胞生长失去接触抑制性、饱和密度增大、ConA凝集能力增强、锚着依赖性丧失及裸鼠体内具有成瘤性等多种细胞发生恶性变的生物学特性改变。结论：SOFA具有诱导人胚肺二倍体细胞恶性转化的作用，对人体具有潜在致癌作用。

混合稀土和柠檬酸铝对温石棉致人胚肺细胞谷胱甘肽含量改变的影响

目的寻求一种适宜的石棉表面改性剂。方法用不同浓度的混合稀土或柠檬酸铝溶液浸泡温石棉１小时后，再将其与人胚肺（ＨＥＬ）细胞共同孵育，测定ＨＥＬ细胞的谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量。结果随着石棉剂量的增加或染毒时间的延长，ＨＥＬ细胞的ＧＳＨ含量明显降低。经混合稀土或柠檬酸铝预处理的石棉，其所诱导的ＨＥＬ细胞ＧＳＨ下降的程度明显减弱。结论用混合稀土或柠檬酸铝预处理温石棉，均可降低温石棉对ＨＥＬ细胞的毒性作用。

人巨细胞病毒对细胞周期调控靶点—p53的影响

目的 了解HCMV对细胞周期调控靶点p5 3的影响。 方法 建立体外HCMV感染HEL模型 ,用倒置显微镜观察不同时间下各组HEL的病变效应和用S -P免组化法检测p5 3蛋白的表达并以FQ -PCR法检测HEL细胞内HCMVDNA拷贝数。 结果 ( 1)HCMV感染使HEL细胞发生病变 ,细胞内HCMVDNA拷贝数随时间的延长逐渐增加。 ( 2 )S -P免疫组化结果提示HCMV感染使HEL细胞p5 3蛋白的水平升高。 结论 HCMV的感染改变了细胞内p5 3的水平 ,可能影响其在细胞周期中的正常功能 。

伊氏锥虫在人胚肺成纤维细胞和在新生鼠肾成纤维细胞型细胞中的体外培养

在HEPES缓冲,含15—20％胎牛血清,100单位青霉素/ml,100微克链霉素/ml的RPMI-1640培养基中,用人胚肺成纤维细胞(KMB)和新生鼠肾成纤维细胞型细胞(ZUKF)作支持细胞,成功地使伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)正常动基体株(kinetoplastic strain)和异常动基体株(dyskinetoplastic strain)在37℃含5％ CO_2的二氧化碳培养箱中连续培养达60天以上,并保持其对小鼠的高度感染力和致病力。这是迄今为止首次利用来源于人的细胞作支持细胞连续培养家畜非洲锥虫血液型成功的报告。实验结果表明伊氏锥虫体外培养成功与否对提供支持细胞的宿主是否有感染性无必然的联系。此外,利用Baltz氏等建立的无支持细胞培养系统,我们亦成功地使上述两伊氏锥虫株在体外连续繁殖,并保持对小鼠的高度感染力和致病力。

胡麻油烟凝聚物对人胚肺二倍体细胞增殖和DNA含量的影响

目的观察胡麻油烟凝聚物(SOFA)对人胚肺二倍体细胞增殖及DNA含量的影响,为研究胡麻油烟潜在致癌作用提供实验依据。方法用不同浓度(终浓度为25、501、00、200、400μg/mL)的SOFA染毒人胚肺二倍体细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察SOFA对人胚肺二倍体细胞的毒性作用,流式细胞术DNA含量分析法检测细胞周期及DNA倍体指数(DI值)的变化,并计算细胞增殖指数PI值。结果在受试剂量范围内,SOFA对人胚肺二倍体细胞生长有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系(r24h=-0.685,r48h=-0.734,r72h=-0.722,P<0.01;r=-0.430,P<0.01);流式细胞仪检测结果显示,SOFA对人胚肺二倍体细胞S期有促进作用,反映细胞增殖活力的细胞增殖指数增高,并表现出一定的剂量依赖性(r=0.914,P<0.01),DI值呈现异倍化趋势。结论SOFA能够抑制人胚肺二倍体细胞生长,对人胚肺二倍体细胞具有毒性作用;SOFA可诱发人胚肺二倍体细胞细胞周期紊乱,细胞异常增生,DNA含量异倍体化,具有潜在的致癌作用。

Cyclin D1和CDK4正性调节苯并(a)芘所致人胚肺成纤维细胞周期改变

目的研究苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期分布及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达的影响,并探讨两种蛋白含量改变与细胞周期效应之间的关系。方法将反义cyclin D1质粒和反义CDK4质粒导入HELF细胞内,建立两种质粒稳定转染的细胞模型。用0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h,用蛋白印迹方法检测cyclin D1和CDK4蛋白表达水平;利用流式细胞技术检测B(a)P处理对HELF细胞及两种稳定转染细胞系细胞周期的影响。结果成功建立了反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的细胞系。不同剂量B(a)P处理可引起cyclin D1蛋白表达的显著增加,但对CDK4蛋白表达无明显影响;2.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h后,引起其细胞周期G1期显著下降,S期显著增加;2.5μmol/L的B(a)P处理反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的HELF细胞24h后,对其细胞周期的分布无显著影响。结论Cyclin D1和CDK4基因均参与了B(a)P所致细胞周期改变过程,并发挥正性调节作用。