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Mitofusion 2 Overexpression Decreased Proliferation of Human Embryonic Lung Fibroblasts in Acute Respiratory Distress Syndrome through Inhibiting RAS-RAF-1-ERK1/2 Pathway 被引量:6
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作者 Juan LI Mei-xia XU +1 位作者 Zhong DAI Tao XU 《Current Medical Science》 SCIE CAS 2020年第6期1092-1098,共7页
Acute respiratory distress syndrome(ARDS)is one of the most fatal diseases worldwide.Pulmonary fibrosis occurs early in ARDS,and its severity plays a crucial role in ARDS mortality rate.Some studies suggested that fib... Acute respiratory distress syndrome(ARDS)is one of the most fatal diseases worldwide.Pulmonary fibrosis occurs early in ARDS,and its severity plays a crucial role in ARDS mortality rate.Some studies suggested that fibroproliferation is an essential mechanism in ARDS.Mitofusion2(Mfn2)overexpression plays a role in inhibiting cell proliferation.However,the role and potential mechanism of Mfn2 on the proliferation of fibroblasts is still unknown.In this study,we aimed at exploring the effect of Mfn2 on the human embryonic lung fibroblasts(HELF)and discussed its related mechanism.The HELF were treated with the Mfn2 overexpressing lentivirus(adv-Mfn2).The cell cycle was detected by flow cytometry.MTT,PCR and Western blotting were used to investigate the effect of Mfn2 on the proliferation of the HELF,collagen expression,the RAS-RAF-1-ERK1/2 pathway and the expression of cycle-related proteins(p21,p27,Rb,Raf-1,p-Raf-1,Erk1/2 and p-Erk1/2).The co-immunoprecipitation assay was used to explore the interaction between Mfn2 and Ras.The results showed that the overexpression of Mfn2 inhibited the proliferation of the HELF and induced the cell cycle arrest at the G0/G1 phase.Meanwhile,Mfn2 also inhibited the expression of collagen I,p-Erk and p-Raf-1.In addition,an interaction between Mfn2 and Ras existed in the HELF.This study suggests that the overexpression of Mfn2 can decrease the proliferation of HELF in ARDS,which was associated with the inhibition of the RAS-RAF-1-ERK1/2 pathway.The results may offer a potential therapeutic intervention for patients with ARDS. 展开更多
关键词 Mitofusion2 human embryonic lung fibroblasts acute respiratory distress syndrome RAS-RAF-1-ERK1/2 pathway
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以STO细胞和hELF作为胚胎生殖细胞培养饲养层的比较 被引量:7
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作者 刘永刚 李芳菲 +2 位作者 陈地龙 王莎莉 王亚平 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第18期1704-1707,共4页
目的:比较以STO细胞和人胚胎肺成纤维细胞(hELF)作为饲养层对人胚胎生殖嵴细胞(EG)生长的影响以及经丝裂酶素C处理后的两种饲养层的变化.方法:分离、培养3—4mohELF,观察经丝裂酶素C处理STO细胞和hELF后形态学变化,以STO细胞和... 目的:比较以STO细胞和人胚胎肺成纤维细胞(hELF)作为饲养层对人胚胎生殖嵴细胞(EG)生长的影响以及经丝裂酶素C处理后的两种饲养层的变化.方法:分离、培养3—4mohELF,观察经丝裂酶素C处理STO细胞和hELF后形态学变化,以STO细胞和hELF作为饲养层培养人EG细胞,计数EG细胞集落的形成率以及免疫组化检测EG细胞表面标志物抗阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)和抗阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4).结果:经丝裂霉素c处理后hELF较STO细胞生存时间明显长,形态维持更好;以hELF和STO细胞作为饲养层培养人EG细胞,集落形成率没有明显差异;两种饲养层上形成的集落免疫学特征无明显差异.结论:在培养人EG细胞时,hELF饲养层较STO细胞饲养层更有优势. 展开更多
关键词 STO细胞 胚胎肺成纤维细胞 胚胎生殖细胞 人类
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沙利度胺抑制TGF-β_1诱导的HELF细胞中结缔组织生长因子基因启动子的激活 被引量:4
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作者 王达安 林逸心 +8 位作者 王峥 桑朝磊 陆大祥 王华东 胡巢凤 魏伟 蒋建伟 付咏梅 李红梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期693-697,共5页
目的:探讨沙利度胺(thalidomide,THD)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因启动子激... 目的:探讨沙利度胺(thalidomide,THD)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因启动子激活的影响。方法:构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因载体pGL3-CTGFP,将其瞬时转染HELF细胞,通过检测萤光素酶的活性,观察TGF-β1和THD对CTGF基因启动子活性的影响。结果:TGF-β1能以剂量依赖方式和时间依赖方式显著增加HELF细胞中报告基因的活性(P<0.05),最佳剌激浓度是5μg/L,萤光素酶相对活性为对照组的2.16倍,最佳剌激时间为12 h,萤光素酶相对活性为对照组的2.52倍;THD对报告基因的基础活性无明显影响(P>0.05),但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1上调报告基因活性的效应(P<0.05)。结论:TGF-β1能以剂量依赖方式和时间依赖方式上调HELF细胞中CTGF基因启动子的活性,而THD能以剂量依赖方式抑制此过程。 展开更多
关键词 沙利度胺 人胚肺成纤维细胞 结缔组织生长因子
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麻杏石甘汤对3型腺病毒感染HELF部分细胞因子mRNA基因表达的影响 被引量:4
4
作者 王文革 徐华 张俊红 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2014年第6期36-38,共3页
目的:探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA基因表达的影响。方法:以3型腺病毒分别攻击体外培养的HELF,制备麻... 目的:探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA基因表达的影响。方法:以3型腺病毒分别攻击体外培养的HELF,制备麻杏石甘汤含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的mRNA基因表达,进行各组间比较。结果:病毒对照组较正常细胞组之TGF-β1、PDGF-BB、TNF-αmRNA的表达均明显升高(P<0.01),含药血清组对腺病毒攻击后的TGF-β1、PDGF-BB、TNF-αmRNA表达均有显著降低作用(P<0.01)。结论:麻杏石甘汤可下调TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的mRNA表达,这可能是其治疗病毒性肺炎的作用机制之一。 展开更多
关键词 麻杏石甘汤 人胚肺成纤维细胞 腺病毒 TGF-β1 PDGF-BB、TNF-αmRNA 原位杂交
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麻杏石甘汤对腺病毒感染的HELF细胞因子蛋白表达影响的实验研究 被引量:4
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作者 王文革 徐华 +1 位作者 邓英贤 王喆 《世界中西医结合杂志》 2013年第1期22-24,共3页
目的探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法以3型腺病毒攻击体外培养的HELF,制备麻杏石甘汤含... 目的探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法以3型腺病毒攻击体外培养的HELF,制备麻杏石甘汤含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组,病毒对照组,利巴韦林组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测不同组细胞TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的蛋白表达,并进行比较。结果病毒对照组较正常细胞组之TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α蛋白表达均明显增强(P<0.01),含药血清组可显著降低3型腺病毒攻击后HELF的TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的蛋白表达(P<0.01)。结论麻杏石甘汤可下调3型腺病毒感染后TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的蛋白表达,这可能是其治疗病毒性肺炎的作用机制之一。 展开更多
关键词 麻杏石甘汤 人胚肺成纤维细胞(helf)腺病毒 TGF-β1 PDGF-BB TNF-α 酶联免疫吸附试验(ELISA法)
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HELF中IL-33/ST2L-TRAF-6信号通路的激活对其增殖、活化及胶原合成的影响 被引量:5
6
作者 吴立艳 郑金旭 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期742-747,共6页
目的观察rhIL-33对人胚肺成纤维细胞增殖及其间充质细胞标记物的影响,探讨IL-33/ST2L-TRAF信号通路在肺纤维化形成过程中的作用。方法培养HELF细胞,PCR检测IL-33受体ST2L m RNA;不同浓度梯度的rh IL-33刺激细胞,MTT法检测不同时间点(24... 目的观察rhIL-33对人胚肺成纤维细胞增殖及其间充质细胞标记物的影响,探讨IL-33/ST2L-TRAF信号通路在肺纤维化形成过程中的作用。方法培养HELF细胞,PCR检测IL-33受体ST2L m RNA;不同浓度梯度的rh IL-33刺激细胞,MTT法检测不同时间点(24、48、72 h)IL-33对HF细胞增殖的影响;Real-time PCR方法检测IL-33刺激HELF后不同时间点(0、6、12、24、48、72 h)细胞标志性基因α-SMA m RNA、Vimentin m RNA、collagn I m RNA及TRAF-6 m RNA的变化;Western blot法检测细胞标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、I型胶原(collagen I)及关键性信号分子TRAF-6与下游信号分子ERK1/2、JNK、NF-kappa B等的改变。结果 IL-33能促进HELF的增殖,10 ng/ml的IL-33促增殖作用最强,且72 h最为明显;随着IL-33刺激细胞时间的逐渐延长,在0~72 h内α-SMA、Vimentin、collagen I在基因与蛋白水平均先上调后下调,信号分子TRAF-6、ERK1/2、JNK、NF-kappa B(P65)等亦呈现先上调后下调的趋势。结论 IL-33能促进HELF细胞增殖、活化及合成胶原,IL-33/ST2L-TRAF-6通路在此过程中起了关键作用,尤其是在病变早期炎症过程中作用最为明显。 展开更多
关键词 IL-33/ST2L-TRAF-6信号通路 人胚肺成纤维细胞 肺纤维化
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稳定转染Dicer基因对HELF细胞功能的影响
7
作者 何琳 王禄增 郑志红 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第4期50-55,90,共7页
目的观察正常人胚肺成纤维细胞(HELF)在稳定转染Dicer基因后增殖能力及迁移能力的变化。方法应用脂质体介导方法转染Dicer基因表达载体于HELF细胞,G418筛选,PCR检测整合情况,RT-PCR检测表达情况,Western-blot检测蛋白表达水平,确定稳定... 目的观察正常人胚肺成纤维细胞(HELF)在稳定转染Dicer基因后增殖能力及迁移能力的变化。方法应用脂质体介导方法转染Dicer基因表达载体于HELF细胞,G418筛选,PCR检测整合情况,RT-PCR检测表达情况,Western-blot检测蛋白表达水平,确定稳定转染细胞株,MTT方法检测细胞增值能力,Transwell方法检测细胞迁移能力。结果Dicer基因稳定转染HELF细胞系建立,用RT-PCR和Western-blot方法检测到Dicer基因mRNA和蛋白表达水平都明显增强。与转染空载体的HELF细胞相比,转染Dicer基因的HELF细胞48、72、96h的MTT光吸收值明显升高(P<0.05),并且穿过人工重构基底膜的细胞数明显增多。结论Dicer基因稳定转染HELF细胞后,HELF细胞增殖能力和迁移能力都明显增强。 展开更多
关键词 DICER helf 稳定转染
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沙利度胺对TGF-β1诱导HELF细胞CTGF基因启动子结合蛋白变化的干预作用 被引量:1
8
作者 李肖肖 王达安 +3 位作者 陆大祥 王华东 魏伟 王彦平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1672-1677,共6页
目的:探讨沙利度胺(thalidomide,THD)和转化生长因子β_1(transformation growth factor-β_1,TGF-β_1)对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HELF)中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因启... 目的:探讨沙利度胺(thalidomide,THD)和转化生长因子β_1(transformation growth factor-β_1,TGF-β_1)对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HELF)中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因启动子的作用及其分子机制。方法:利用CTGF基因启动子驱动的萤光素酶报告基因系统观察TGF-β_1和THD对HELF细胞CTGF基因启动子活性的影响;同时以带有生物素标记的CTGF基因启动子序列作为探针,采用DNA pull-down技术分析TGF-β_1和THD对CTGF基因启动子结合蛋白的影响。结果:TGF-β_1能显著增强HELF细胞中报告基因的活性(P<0.01),而THD以剂量依赖方式显著抑制TGF-β_1上调报告基因活性的效应(P<0.01)。同时,TGF-β_1引起的CTGF基因启动子结合蛋白变化也能被THD所抑制(P<0.05)。结论:CTGF基因启动子结合蛋白调节可能参与TGF-β_1对HELF细胞中CTGF基因启动子的激活过程,而THD能有效拮抗此过程。 展开更多
关键词 沙利度胺 人胚肺成纤维细胞 结缔组织生长因子 DNA结合蛋白 转化生长因子β1
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甘草酸对感染人巨细胞病毒的人胚肺成纤维细胞凋亡和炎性反应的影响 被引量:2
9
作者 沈利霞 苏贤凤 《实用临床医药杂志》 CAS 2023年第1期38-43,共6页
目的 探讨甘草酸对感染人巨细胞病毒(HCMV)的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外培养MRC-5细胞,并将其分为对照组、病毒组、更昔洛韦组(50μg/mL)、甘草酸低剂量组(0.25 mg/mL)、甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)... 目的 探讨甘草酸对感染人巨细胞病毒(HCMV)的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外培养MRC-5细胞,并将其分为对照组、病毒组、更昔洛韦组(50μg/mL)、甘草酸低剂量组(0.25 mg/mL)、甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)、甘草酸高剂量组(1.00 mg/mL)。接种HCMV不同时间后,分别使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)等蛋白表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 CCK8实验结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组增殖活性均低于对照组,更昔洛韦组、甘草酸中剂量组、甘草酸高剂量组增殖活性均高于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05);甘草酸中剂量组与甘草酸高剂量组增殖活性比较,差异无统计学意义(P>0.05),故选择甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)进行后续实验,并简称甘草酸组。流式细胞仪检测结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组细胞凋亡率均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,经HCMV感染48 h后,病毒组细胞中Cleaved-caspase3、TNF-α、IL-6蛋白相对表达量均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,经HCMV感染24、48、72 h时,病毒组MRC-5细胞TNF-α、IL-6水平均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 甘草酸具有体外抗HCMV效应,可促进感染HCMV的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖,并抑制HCMV感染诱导的细胞凋亡和细胞炎性反应。 展开更多
关键词 甘草酸 人巨细胞病毒 人胚肺成纤维细胞 增殖 凋亡 炎性反应
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大麻素受体2激动剂对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖和分化的影响及机制
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作者 张育泉 程义局 +6 位作者 杜娟 李瑞雪 潘琳 李向魁 卢琴 杨文婷 吴潇 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第12期1446-1453,共8页
目的探讨大麻素受体2(CB2)激动剂JWH133对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖、分化的影响及机制。方法取对数生长期HLF1细胞株,采用细胞计数试剂-8(CCK8)法检测不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00及20.00μmol/L)JWH133及CB2(0.0、0.5、5.0及5... 目的探讨大麻素受体2(CB2)激动剂JWH133对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖、分化的影响及机制。方法取对数生长期HLF1细胞株,采用细胞计数试剂-8(CCK8)法检测不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00及20.00μmol/L)JWH133及CB2(0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L)拮抗剂AM630对HLF1的增殖能力影响;取对数生长期HLF1细胞分为正常(N)组、5μg/L转化生长因子β1(TGF-β1)组(即0μmol/L JWH133)、10.00μmol/L JWH133(J10)组及J10+5.0μmol/L AM630(AM630)组,培养48 h,采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中胶原蛋白1α1(Col1α1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白及Col1α1、α-SMA mRNA,采用细胞免疫荧光检测各组细胞中α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞百分比。结果随着JWH133浓度的增大,HLF1细胞的吸光度(OD)值逐渐降低,0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L AM630组HLF1存活率均在1附近(P>0.05);J10组HLF1细胞中Col1α1、α-SMA蛋白及p-AKT表达均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞Col1α1、α-SMA mRNA均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞占总细胞比值均较TGF-β1组减少(P<0.05),J10+AM630组则较J10组增多(P<0.05)。结论CB2受体激动剂JWH133可抑制HLF1细胞的增殖及分化,其机制可能与下调PI3K-AKT通路有关。 展开更多
关键词 细胞增殖 人胚肺成纤维细胞 CB2激动剂JWH133 特发性肺纤维化 PI3K-AKT通路 分化
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青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL-I细胞增殖、凋亡的影响及机制 被引量:8
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作者 王昌明 张孝飞 +3 位作者 谭宁 黄岚珍 林云 徐青 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第3期33-35,共3页
目的进一步探讨青蒿琥酯的抗纤维化作用及机制。方法取对数生长期人胚肺成纤维细胞(HELF)系HFL-I细胞株,随机分为观察1—4组及对照组,观察1-4组分别加入质量浓度为4、8、16、32mg/L的青蒿琥酯,对照组加入等体积培养液后继续培养。... 目的进一步探讨青蒿琥酯的抗纤维化作用及机制。方法取对数生长期人胚肺成纤维细胞(HELF)系HFL-I细胞株,随机分为观察1—4组及对照组,观察1-4组分别加入质量浓度为4、8、16、32mg/L的青蒿琥酯,对照组加入等体积培养液后继续培养。用CCK-8法检测细胞增殖情况(A值),流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR法测定Survivin mRNA表达。结果观察1-4组G0+G1期细胞所占比例及细胞凋亡率均显著高于对照组,细胞A值及Survivin mRNA表达均显著低于对照组,且各观察组间亦有显著差异(P〈0.05)。结论青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Survivin mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖、促进HFL-I细胞凋亡。 展开更多
关键词 青蒿琥酯 人胚肺成纤维细胞 增殖 细胞凋亡
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大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响 被引量:4
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作者 聂兴草 方峰 +4 位作者 李红 董永绥 甄宏 刘志峰 李革 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1015-1018,共4页
目的研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fasmRNA表达的影响。方法用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2.5、0.25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96... 目的研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fasmRNA表达的影响。方法用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2.5、0.25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96h凋亡细胞比率;大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg/mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2.5)后上述各时间点凋亡细胞比率。用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0.25)72h后bcl-2和fasmRNA表达强度变化,并与正常细胞和感染细胞对比分析。结果正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2.68%);低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多,凋亡率峰值分别达8.85%(96h)和25.63%(72h);各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加,呈剂量依赖性,峰值分别为4.88%、6.47%和8.35%;但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降,大剂量药物处理72h时效应最为明显,凋亡细胞比率由25.63%降至16.24%。正常细胞高表达bcl-2,低表达fas基因;感染HCMV后,bcl-2表达显著下调,fas表达明显增强;大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞,fas表达水平明显低于感染细胞,但仍未恢复到正常细胞水平。结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂; 展开更多
关键词 大蒜新素 细胞凋亡 凋亡调控基因 人巨细胞病毒 人胚肺成纤维细胞
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陈皮挥发油对大鼠肺纤维化的干预作用(英文) 被引量:20
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作者 周贤梅 赵阳 +1 位作者 何翠翠 李建新 《中西医结合学报》 CAS 2012年第2期200-209,共10页
目的:研究陈皮挥发油(essential oil extracted fromCitrus reticulata,EOCR)对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)增殖的影响,以及对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用,并探讨其作用机制。方法:将HELF传... 目的:研究陈皮挥发油(essential oil extracted fromCitrus reticulata,EOCR)对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)增殖的影响,以及对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用,并探讨其作用机制。方法:将HELF传代培养,待细胞进入对数生长期后进行实验,采用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同浓度陈皮挥发油对HELF增殖的影响。大鼠随机分为正常组、模型组、强的松组、陈皮挥发油25 mg(EOCR-25)组、陈皮挥发油50 mg(EOCR-50)组、陈皮挥发油100 mg(EOCR-100)组和陈皮挥发油200 mg(EOCR-200)组。除正常组外,其余各组气管内注入博来霉素建立大鼠肺纤维化模型。建模后除正常组、模型组两组大鼠外,其余各组大鼠分别给予相应药物灌胃。各组大鼠于实验第28天处死并留取血清和肺组织。分光光度法测定血清和肺组织超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;双抗夹心酶联免疫吸附法测定肺组织Ⅰ型胶原蛋白(typeⅠcollagen,ColⅠ)含量;根据积分量表对肺组织病理学变化进行半定量分析;免疫组织化学和原位杂交法检测肺组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白及mRNA表达,并进行图像半定量分析。结果:不同浓度EOCR均可抑制HELF的增殖。建模后第7、14、21、28天时,EOCR-50、EOCR-100和EOCR-200组大鼠体质量增幅较模型组显著增加(P<0.05或P<0.01);EOCR-100和EOCR-200组肺泡炎、肺纤维化积分显著低于模型组(P<0.01);EOCR-50、EOCR-100和EOCR-200组血清及肺组织SOD活性显著高于模型组(P<0.01);EOCR-50、EOCR-100和EOCR-200组血清及肺组织MDA含量显著低于模型组(P<0.05);EOCR-100和EOCR-200组肺组织ColⅠ含量显著低于模型组(P<0.01),肺组织CTGF蛋白及mRNA表达量显著低于模型组(P<0.01)。结论:陈皮挥发油对博莱霉素诱导所致大鼠肺纤维化具有干预作用,其作用机制可能是通过调节氧化和抗氧化失衡,降低CTGF蛋白及其mRNA表达,减少胶原沉积以减轻纤维化程度。 展开更多
关键词 陈皮 挥发油 人胚肺成纤维细胞 肺纤维化 博莱霉素 大鼠
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纳米氧化锌对人胚肺成纤维细胞的生物毒性 被引量:9
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作者 袁金华 李光 +2 位作者 陈慧珍 查河霞 宋黎军 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期170-173,178,共5页
【目的】研究化妆品添加剂-氧化锌纳米粒子对正常人胚肺成纤维细胞(HELF)的生物毒性。【方法】采用MTT法检测氧化锌纳米粒子对体细胞存活率的影响;利用光学显微镜评价细胞的形态学变化;电子显微镜观察细胞与纳米氧化锌作用前后表面微结... 【目的】研究化妆品添加剂-氧化锌纳米粒子对正常人胚肺成纤维细胞(HELF)的生物毒性。【方法】采用MTT法检测氧化锌纳米粒子对体细胞存活率的影响;利用光学显微镜评价细胞的形态学变化;电子显微镜观察细胞与纳米氧化锌作用前后表面微结构的变化。【结果】在测试的2.5~150mg·L-1浓度范围内,氧化锌纳米粒子对HELF细胞均有抑制作用,细胞毒性呈明显的剂量依赖效应关系。浓度在20mg·L-1以上时,氧化锌纳米粒子可致使细胞生存率低于10%。荧光显微镜可见典型的细胞凋亡改变。扫描电子显微镜观察到HELF细胞表面与高浓度纳米粒子作用后产生的纳米级孔。【结论】纳米氧化锌粒子由于小尺寸效应和Zn2+自身毒性的协同作用,高浓度时抑制细胞结活性,致使细胞死亡。在化妆品中添加氧化锌纳米粒子作为紫外屏蔽剂时,建议控制浓度为20mg·L-1以下。旨在对化妆品生产企业在功效添加方面起到警示作用,也为卫生监督提供理论依据。 展开更多
关键词 成纤维细胞细胞 氧化锌纳米粒子 生物毒性 化妆品添加剂
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银杏叶提取物对人胚肺成纤维细胞增殖与凋亡的干预研究 被引量:5
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作者 张兴彩 蔡余力 +1 位作者 张伟 陈宪海 《中医药学报》 CAS 2017年第2期29-32,共4页
目的:观察银杏叶提取物对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响,为临床治疗肺纤维化提供理论依据。方法:HELF细胞培养后,分别分为A对照组;B模型组加入TGF-β1;C1-3TGF-β1+银杏叶提取物低中高剂量组。MTT法测量各孔吸光度OD值并计算各药物... 目的:观察银杏叶提取物对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响,为临床治疗肺纤维化提供理论依据。方法:HELF细胞培养后,分别分为A对照组;B模型组加入TGF-β1;C1-3TGF-β1+银杏叶提取物低中高剂量组。MTT法测量各孔吸光度OD值并计算各药物组细胞生长抑制率,流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,模型组细胞OD值明显升高;与模型组相比,银杏叶提取物各浓度组细胞增殖OD值均明显降低,其中高浓度组明显低于中、低浓度组,经统计学处理,有显著差异性(P<0.05)。与对照组相比,模型组细胞凋亡率明显降低;与模型组相比,银杏叶提取物各浓度组细胞凋亡率均明显升高,其中高浓度组明显高于中、低浓度组,经统计学处理,有显著差异性(P<0.05)。结论:TGF-β1可明显促进成肺纤维细胞的增殖,抑制其凋亡;银杏叶提取物具有抑制肺成纤维细胞增殖,促进其凋亡的作用,且作用成一定量效相关。 展开更多
关键词 TGF-Β 人胚肺成纤维细胞(helf) 银杏叶提取物 肺纤维化
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枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻2BS融合细胞DNA合成的影响 被引量:5
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作者 吴白燕 邹俊华 +1 位作者 孟书聪 郑振 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期926-928,共3页
目的 :研究枸杞子、淫羊藿水提液对衰老 -年轻 2BS融合细胞DNA合成的影响。方法 :以人胚肺二倍体成纤维细胞国内标准株 2BS为衰老模型 ,用细胞脱核和细胞融合技术 ,观察枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻 2BS融合细胞的DNA合成的影响。结果 :2B... 目的 :研究枸杞子、淫羊藿水提液对衰老 -年轻 2BS融合细胞DNA合成的影响。方法 :以人胚肺二倍体成纤维细胞国内标准株 2BS为衰老模型 ,用细胞脱核和细胞融合技术 ,观察枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻 2BS融合细胞的DNA合成的影响。结果 :2BS细胞分别在含 0 0 2 5 (V/V)枸杞子、淫羊藿水提液的DMEM培养液中 ,可连续培养至 6 1 0± 2 9、5 6 0± 2 6代 ,对照组为 4 9 0± 2 6代 (P <0 0 1) ;衰老的 2BS细胞分别用枸杞子、淫羊藿水提液处理 2h后 ,进行细胞脱核并与年轻 2BS细胞融合 ,其〔3H〕TdR掺入百分率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 :枸杞子、淫羊藿均能促进衰老 -年轻 2BS融合细胞的DNA的合成速率 ,延长 2BS细胞寿命。 展开更多
关键词 枸杞子 淫羊藿 融合细胞 DNA合成 细胞衰老 衰老-年轻2BS融合细胞 人胚肺二倍体成纤维细胞 实验
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人LIF基因与增强型绿色荧光蛋白融合表达载体的构建及转染 被引量:3
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作者 林雪梅 李芳菲 +2 位作者 姜蓉 王莎莉 王亚平 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期134-137,共4页
目的:构建携带人LIF基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合表达载体,并转染人胚肺成纤维细胞,为研究LIF在维持人胚胎生殖细胞自我更新中的作用机制奠定基础.方法:以重组质粒pcDNA3.1/lif为模板,PCR扩增LIF基因,将扩增片断双酶切后连接... 目的:构建携带人LIF基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合表达载体,并转染人胚肺成纤维细胞,为研究LIF在维持人胚胎生殖细胞自我更新中的作用机制奠定基础.方法:以重组质粒pcDNA3.1/lif为模板,PCR扩增LIF基因,将扩增片断双酶切后连接到质粒pEGFP-Nl中,形成重组表达载体pEGFP-Nl/lif,并用脂质体法转染人胚肺成纤维细胞,荧光显微镜下观察,RT-PCR及Western杂交检测融合蛋白的表达.结果:成功构建融合表达载体pEGFP-N1/lif,在人胚肺成纤维细胞实现表达,检测到融合蛋白EGFP-LIF.结论重组pEGFP-N1/lif载体构建成功,可用于标记LIF蛋白,为进一步研究LIF在维持人胚胎生殖细胞自我更新中的作用机制奠定基础. 展开更多
关键词 白血病抑制因子(LIF)基因 增强型绿色荧光蛋白 人胚肺成纤维细胞
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槲皮素对矽肺纤维化细胞外基质的保护作用 被引量:4
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作者 彭海兵 吴爱萍 +2 位作者 刘燕 田家莉 王建行 《医药导报》 CAS 北大核心 2013年第6期695-698,共4页
目的观察槲皮素对二氧化硅(SiO2)活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)介导的人胚肺成纤维细胞(HELF)外基质金属蛋白酶(MMP)表达的保护作用。方法收集矽肺患者支气管肺泡灌洗液中AM,进行SiO2体外染尘,取其上清液。将HELF分为空白对照组,对照... 目的观察槲皮素对二氧化硅(SiO2)活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)介导的人胚肺成纤维细胞(HELF)外基质金属蛋白酶(MMP)表达的保护作用。方法收集矽肺患者支气管肺泡灌洗液中AM,进行SiO2体外染尘,取其上清液。将HELF分为空白对照组,对照组,处理组,槲皮素10,20,40μmol·L-1组,各组分别于6,12,18,24,36,48 h取出细胞爬片。应用免疫细胞化学法检测HELF中MMP-1和TIMP-1的表达。结果加入不同浓度的槲皮素后,MMP-1表达增加,与同期处理组相比,均差异有统计学意义(P<0.05),与同期对照组相比,20和40μmol·L-1槲皮素组差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的槲皮素组随着培养时间的增加TIMP-1表达增加,但是与同期处理组相比减少,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素对矽肺纤维化细胞外基质金属蛋白酶有一定的保护作用。 展开更多
关键词 槲皮素 二氧化硅 基质金属蛋白酶 肺纤维化 人胚肺成纤维细胞
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硫酸铍对人胚肺成纤维细胞的细胞毒性和遗传毒性 被引量:4
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作者 王光俊 刘志宏 +5 位作者 安晓丹 张晓宇 张勇 刘贺荣 朱玲勤 马小梅 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2009年第3期222-225,共4页
背景与目的:探讨硫酸铍对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HEL-I)的细胞毒性和遗传毒性。材料与方法:用不同浓度的硫酸铍(0.2、2.0、20.0、100.0、200.0μmol/L)作用HEL_I细胞24 h,采用MTT法测定细胞存活情况,用单细胞凝胶电泳(SCGE)和微核... 背景与目的:探讨硫酸铍对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HEL-I)的细胞毒性和遗传毒性。材料与方法:用不同浓度的硫酸铍(0.2、2.0、20.0、100.0、200.0μmol/L)作用HEL_I细胞24 h,采用MTT法测定细胞存活情况,用单细胞凝胶电泳(SCGE)和微核实验测定硫酸铍对HEL_I细胞遗传损伤的情况。结果:随着硫酸铍浓度的增加,HEL-I细胞的存活率呈下降趋势,硫酸铍浓度为100.0μmol/L和200.0μmol/L时,存活细胞数低于空白对照组(P<0.05);在2.0~100.0μmol/L浓度范围内,硫酸铍均可诱发HEL-I细胞出现DNA损伤和微核率升高(P<0.05)。结论:硫酸铍对HEL-I细胞具有明显细胞毒性和遗传毒性。 展开更多
关键词 硫酸铍 人胚肺成纤维细胞 细胞毒性 遗传毒性 DNA损伤
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甲基丙烯酸环氧丙酯对细胞间隙连接通讯的影响 被引量:2
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作者 尹学钧 许建宁 +6 位作者 王全凯 宋文佳 谢晓霜 李忠生 邹昌淇 方福德 何凤生 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期73-75,共3页
为探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导细胞转化的机理,选用划痕染料示踪技术(SLDT)初步研究了GMA对人胚肺成纤维细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。用0.5、2.5和5.0mg/L的GMA给细胞染毒12h,经划痕导入荧光黄染料并测定各组细胞中该荧光染料... 为探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导细胞转化的机理,选用划痕染料示踪技术(SLDT)初步研究了GMA对人胚肺成纤维细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。用0.5、2.5和5.0mg/L的GMA给细胞染毒12h,经划痕导入荧光黄染料并测定各组细胞中该荧光染料向其相邻细胞扩散的程度。结果表明,在染毒剂量及时间范围内,GMA对人胚肺成纤维细胞GJIC产生较强的抑制作用,呈良好的剂量-效应关系。其中,2.5和5.0mg/L剂量组细胞的GJIC明显降低。结果提示GMA对细胞间隙通讯的抑制作用可能是其导致细胞恶性转化的重要机制之一。 展开更多
关键词 甲基丙烯酸 环氧丙酯 GMA GJIC 肺成纤维细胞
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