冻干人纤维蛋白黏合剂在围绝经期雌兔干眼的应用研究

目的探究冻干人纤维蛋白黏合剂通过泪道栓塞的方式对围绝经期雌兔干眼症的预防和治疗效果。方法选取72只经抗感染处理后剪除第三眼睑的雌兔,制作围绝经期雌兔干眼症模型,手术完成后将其随机分为6组(每组12只):术后无处理组(A组)、PBS预防组(B组)、冻干人纤维蛋白预防组(C组)、造模后无处理组(造模时间:术后2个月,D组)、PBS治疗组(E组)、冻干人纤维蛋白治疗组(F组),并于注射前及注射后2周、4周及6周行Schirmer实验(SIT)检查、角膜荧光素(fluorescein,FL)染色及角膜共聚焦显微镜检查。结果D、E、F三组不同时间点间的FL评分和SIT值有一定差别(F=27.346、10.608,P=0.000、0.001);三组间FL评分和SIT值有一定差别(F=7.579、6.786,P=0.002、0.007);三组的FL评分和SIT值的变化趋势有明显差别(F=44.897、3.424,P=0.000、0.045)。D组、E组、F组在处理2周、4周、6周后,F组FL评分和SIT值较D组明显好转,差异有统计学意义(t=2.906、3.654、4.504,P=0.022、0.017、0.013;t=4.573、5.759、7.231,P=0.032、0.019、0.008);E组、F组FL评分和SIT值在处理后相比,差异有统计学意义(t=2.776、4.124、5.324,P=0.032、0.026、0.017;t=1.969、3.122、4.324,P=0.038、0.023、0.009)。A、B、C三组注射6周后上皮基底细胞(F=17.306,P=0.002)和炎症细胞密度(F=34.024,P=0.000)比较,D、E、F三组上皮基底细胞(F=3.749,P=0.042)和炎症细胞密度(F=8.806,P=0.005)比较,均有统计学差异。结论通过冻干人纤维蛋白黏合剂进行泪道栓塞对于干眼症的预防和治疗均有显著疗效。

纤维蛋白胶在眼科手术中的应用

缝线缝合是目前眼部切口修复的标准治疗方法,缝线缝合的缺陷促使人们去探索发展无缝线手术技术。组织黏合剂具有组织黏附力,有止血、封闭和黏合切口的作用。其中纤维蛋白胶具有很好的生物相容性和可以完全生物降解等独特优点,是一种安全、有效的缝线替代物,也是一种很有潜力的生物组织黏合剂。目前,在很多眼科手术中得到应用。但其也具有黏合强度不高,费用较高的不足。

MTT法检测纤维蛋白胶对人脂肪源干细胞增殖的影响

目的:检测纤维蛋白胶对人脂肪源干细胞增殖的影响。方法:体外培养人脂肪源干细胞,取第三代细胞接种到96孔板,以不同浓度(纤维蛋白与凝血酶比例:4∶1、2∶1、8∶3、5∶2)的纤维蛋白胶浸润提取液培养,用MTT法检测脂肪源干细胞在不同浓度纤维蛋白胶上的增殖情况。结果:不同浓度纤维蛋白胶制备的浸泡提取液所培养的人脂肪源干细胞的生长曲线无明显差异。结论:不同浓度纤维蛋白胶对人脂肪源干细胞的增殖无明显影响,纤维蛋白胶有望成为人脂肪源干细胞生长的支架材料。

人纤维蛋白胶对翼状胬肉眼病患者术后结膜瓣植片变化的影响

目的:研究人纤维蛋白胶对翼状胬肉眼病患者术后结膜瓣植片变化的影响。方法:选取眼科诊治的翼状胬肉眼病患者40例,将其分为A组(n=20)和B组(n=20);采用翼状胬肉切除术和结膜瓣移植术治疗,A组患者术中予人纤维蛋白胶黏合移植结膜瓣治疗,B组患者直接给予缝合结膜瓣治疗;术后第7天拆线后采用眼前段光学相干断层扫描(AS-OCT),直接观察与测量结膜瓣植片的厚度。结果:A组患者结膜瓣的平均厚度和结膜瓣下出血率分别为(437.80±38.70)μm和5%,优于B组患者分别为(631.95±44.97)μm和55%(P<0.05)。结论:翼状胬肉切除术中采用人纤维蛋白胶替代缝线,固定自体移植的球结膜瓣,缩短了手术时间,减轻术后结膜瓣出血、水肿的程度,采用AS-OCT可直接测量术后结膜瓣的厚度,从而减轻了结膜瓣水肿的程度。

人纤维蛋白胶对翼状胬肉手术结膜瓣植片影响

目的研究人纤维蛋白胶对翼状胬肉术后结膜瓣的影响。方法临床病例对照研究。对2011年11月至2012年12月在深圳市眼科医院就诊的40例翼状胬肉患者实施翼状胬肉切除术＋结膜瓣移植术，A组患者（20例）术中应用人纤维蛋白胶粘合移植结膜瓣，B组患者（20例）直接缝合结膜瓣，术后7d拆线后采用眼前段OCT（AS—OCT）直接观察结膜瓣植片并测量结膜瓣厚度，2组数据进行统计学检验。结果A组（应用人纤维蛋白胶组）患者结膜瓣的平均厚度为（437．80±38．70）μm，结膜瓣下出血率为5％；B组（单纯缝合组）患者结膜瓣的平均厚度为（631．95±44．97）μm，结膜瓣下出血率为55％，P〈0．05，差异有统计学意义。结论在翼状胬肉术中采用纤维蛋白胶部分替代缝线，固定自体移植的球结膜瓣，能缩短手术时间，减轻术后结膜瓣出血、水肿的程度。AS—OCT能直接测量术后结膜瓣的厚度，从而间接了解结膜瓣水肿的程度。

促进化脓性腹膜炎肠吻合愈合的临床研究

目的探索在急性化脓性腹膜炎条件下促进肠吻合或缝合口愈合的措施。方法于1998～2004年选择性地对47例外伤性肠损破或手术后吻合破裂伴有急性化脓性腹膜炎且延误处理48h以上的病人,在剖腹探查、引流的同时,行肠切除吻合或缝合术,辅以大量等渗盐水冲洗腹腔,吻合或缝合口涂喷纤维蛋白胶,放置多根腹腔负压引流管。术后24～48h开始给予重组人生长激素与相应的术后处理。结果术后2例发生吻合口破裂,1例经非手术治疗后愈合;另1例系胃癌术后胃肠吻合口破裂,再次手术后未应用生长激素,非手术治疗无效。全组病人术后除均继续表现有脓毒症外,并发肝功能损害23例(48.9%),肺部感染或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)16例(34.0%),肾功能障碍6例(12.8%),除1例死亡外,余均治愈。结论营养支持,感染控制措施的进步,纤维蛋白胶与生长激素的应用,加上术后细致的处理、有效地防治并发症,在急性化脓性腹膜炎条件下肠切除吻合或缝合仍能获得成功。

携带肝细胞生长因子基因慢病毒转染人脂肪来源干细胞复合纤维蛋白胶支架构建可注射型组织工程脂肪的实验研究

目的探讨构建可注射型组织工程脂肪的可行性,为临床软组织缺损修复及美容填充提供简便易行的方法。方法取脂肪抽吸术获取的脂肪组织,采用酶消化法分离培养获得人脂肪来源干细胞(human adipose-derived stem cells,h ADSCs),进行细胞形态观察、流式细胞术及成脂诱导鉴定。用携带肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的慢病毒HGF-GFP-LVs,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)(分别为10、30、50、100)转染h ADSCs,计算转染效率以确定最适MOI。取SPF级6周龄单纯T细胞缺陷BALB/c雌性裸鼠10只,将经过最适MOI HGF-GFP-LVs转染并成脂诱导的h ADSCs与纤维蛋白胶混合注入裸鼠背部右侧皮下(转染组),单纯成脂诱导的h ADSCs与纤维蛋白胶混合注入背部左侧皮下(未转染组),单纯纤维蛋白胶注入颈后正中皮下(空白对照组),每点注射0.4 m L。移植后12周处死裸鼠,取出移植物,行大体观察、湿重测量、HE染色、GFP荧光标记检测及免疫荧光染色观察,评价种子细胞的体内成脂能力以及移植物血管新生情况。结果经鉴定所培养细胞为h ADSCs。MOI为10和30时HGFGFP-LVs转染率较低,MOI为50和100时转染率较高(均>80%),确定最适MOI为50。移植12周,转染组和未转染组均获得外观类似脂肪组织的新生物,湿重分别为(32.30±4.06)mg和(25.27±3.94)mg,差异有统计学意义(t=3.929,P=0.001);空白对照组未见新生物。转染组新生脂肪细胞数为(126.93±5.36)个/视野,显著高于未转染组的(71.36±4.52)个/视野(t=30.700,P=0.000)。荧光显微镜下可见部分单房脂肪细胞发出网状绿色荧光。免疫荧光染色示转染组血管密度为(16.37±2.76)个/视野,显著高于未转染组的(9.13±1.68)个/视野(t=8.678,P=0.000)。结论以h ADSCs为种子细胞,经慢病毒转染HGF基因并成脂诱导后与纤维蛋白胶支架复合可在体内成功构建成熟脂肪,能促进移植后的血管新生,从而提高移植物的存活率。

改良中空加压螺钉复合可注射BMP缓释载体治疗犬股骨颈骨折的实验研究

[目的]建立犬股骨颈骨折的动物实验模型,观察改良中空加压螺钉-BMP缓释系统在股骨颈骨折治疗中的应用。[方法]选用健康成年杂种犬18只,均采用手术方法造成双侧股骨颈移位骨折模型,对照侧采用改良中空加压螺钉内固定、实验侧采用改良中空加压螺钉内固定复合可注射BMP缓释载体,实验动物分别在4、8、12周处死取材,通过X线片及大体组织病理学等方法观察股骨颈骨折愈合过程。[结果](1)X线检查4周时骨折线模糊,8周骨折已基本消失,12周时骨折完全愈合,头内骨小梁清晰,密度正常,均无坏死表现,分别请放射科2位医师单盲对比全部犬实验侧及对照侧骨折愈合情况均认为实验侧优于对照侧;(2)组织学观察也发现术后4、8、12周实验侧较对照侧股骨颈修复过程快。[结论]改良中空加压螺钉-BMP定向释放系统的设计思路是可行的,该系统既能完成骨折端加压,达到坚强的内固定,又能向骨折端输注缓释生长因子,有利于促进骨折早期愈合,为此法应用于临床提供了实验依据。

犬纤维蛋白胶粘结式胰肠吻合安全性研究

目的探讨纤维蛋白胶粘结式胰肠吻合的可行性及安全性。方法选取10只家犬,于胰尾切除术后,采用纤维蛋白胶行粘结式胰肠吻合,分别于术前及术后1、3、7、10 d检测血清淀粉酶变化,并于术后10、30 d腹腔探查,取吻合口标本行病理学检查。结果粘结式胰肠吻合平均手术时间为(9.0±2.1)min。术前血清淀粉酶为(598±97)IU/L,术后10 d为(622±79)IU/L,术后无胰瘘发生。肉眼观察可见吻合口周围大网膜包裹,与周围组织广泛粘连,无胰瘘等形成;HE染色显示胰肠吻合口愈合良好,少量炎症细胞浸润。结论纤维蛋白胶用于犬粘结式胰肠吻合方法简单、操作简便、安全可靠,可有效缩短手术时间。

人纤维蛋白黏合剂在显微神经外科手术中的应用

目的探讨人纤维蛋白黏合剂在显微神经外科手术中的实际应用方法,提高手术疗效及减少术后并发症。方法对2004年1～6月间我们在10例显微神经外科手术中应用人纤维蛋白黏合剂(HFG)进行回顾性研究。结果(1)用于脑部手术创面止血效果好。(2)术中静脉窦出血,用明胶海绵或止血纱布压迫后加用 HFG,止血效果佳。(3)开颅手术中用 HFG 覆盖硬脑膜,术后第1天,平均引流量明显减少,降低了术后脑脊液漏的发生。(4)用 HFG 加自体骨碎片作顿骨成形术,效果满意。(5)血管显微吻合术中使用 HFG,可减少缝合针数,预防吻合口渗漏。(6)经蝶手术中使用 HFG,可止血利于手术进行,另可行鞍底重建防治术后脑脊液漏。结论人纤维蛋白黏合剂在显微神经外科手术中应用广泛,其使用简便、安全、可靠,提高了手术疗效并减少了术后并发症。

人羊膜缓释支架联合神经干细胞治疗脊髓损伤

目的探讨去上皮细胞羊膜（DMAM）构建药物缓释组织工程支架联合神经干细胞（NSCs）在大鼠脊髓全横断损伤模型中的治疗效果。方法取出生24h内的SD大鼠8只，剥离双侧海马分离、培养、纯化、鉴定NSCs备用。获取健康产妇羊膜，制备成DHAM。裁取两块DHAM4cm×4cm大小，吸取含5×10^9／LNSCs的细胞悬液分别种植其上。一块用2．5ml纤维蛋白黏合剂与18μg鼠神经生长因子的混合剂喷洒于其无细胞面，另一块单纯用18μg鼠神经生长因子喷洒于其无细胞面，卷成圆柱形支架后，分别制成DHAM药物缓释组织工程支架和无缓释功能的DHAM药物组织工程支架。将36只实验大鼠制作脊髓完全横断损伤模型，随机分为3组。A组为DHAM药物缓释组织工程支架移植组；B组为无缓释功能的DHAM药物组织工程支架移植组；C组为旷置缺损组。术后分别在1、2、4、8周对各组运动功能用脊髓损伤后后肢运动功能（BBB）评分系统进行评价。在第8周处死各组大鼠取材，行苏木素-伊红（HE）染色和镀银染色以及免疫组织化学染色观察形态学结果。结果术后8周，A组BBB评分达（11．63±0．58）分，明显高于其余两组（P〈0．05）。苏木素-伊红（HE）染色见A组大部分DHAM支架呈规则平行排列，DHAM支架内可见较多细胞存活生长。部分细胞发出丝状纤维沿DHAM支架间隙生长。B组DHAM支架不能保持平行排列的状态，呈波浪状或网状，细胞发出的丝状纤维混乱生长，缺乏方向。C组脊髓断端可见空洞形成。新长出的轴突杂乱交织在一起。神经元核抗原（Neun）抗体免疫组织化学染色显示部分存活的神经干细胞分化为神经元。镀银染色和神经丝蛋白-200（NF-200）抗体免疫组织化学染色证实支架内存活的细胞发出的丝状纤维为神经轴突。结论DHAM药物缓释支架联合NSCs组建的组织工程支架对大鼠脊髓缺损有良好的治疗潜力。