RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号促进人胃癌MGC803细胞上皮间质转化

目的 探讨RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号对促进人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化(epithelial–mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 MTT检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭。Western blot与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号相关分子,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合。结果 MTT检测显示,T0901317处理组较MGC803细胞增殖能力呈时间依赖性增加(P<0.05)。细胞划痕和Transwell实验显示,T0901317处理组细胞迁移与侵袭能力较MGC803细胞明显增强(P<0.05)。Western blot检测显示,T0901317处理后较未处理组RORα蛋白明显下调(P<0.05),并且可上调MGC803细胞β-catenin总蛋白与核内β-catenin(P<0.05)。T0901317处理后较对照组RORα蛋白与β-catenin蛋白结合分别明显减少(P<0.05)。T0901317处理的细胞较未处理MGC803细胞的长梭形细胞增加,异型性更为明显。T0901317可明显上调MGC803细胞Rac1、TGF-β1、Vimentin的表达(P<0.05),并抑制E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 T0901317可通过RORα/β-catenin信号促进人胃癌MGC803细胞增殖、迁移侵袭与EMT。

DADS通过RORα/β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞侵袭与EMT

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)通过RORα/β-catenin信号对人胃癌MGC803细胞迁移侵袭与上皮-间质转化(EMT)的影响。方法MGC803细胞实验分为MGC803组、DADS组、SR1078组、SR1078+DADS组。MTT检测细胞增殖能力;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭能力。Western blotting与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号与EMT相关分子表达情况,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合能力,相差显微镜观察细胞形态改变。结果与MGC803组比较,DADS组、SR1078组细胞增殖能力分别呈时间依赖性降低(P<0.05);细胞迁移与侵袭能力降低(P<0.05);RORα蛋白与E-cadherin明显上调(P<0.05),而核内β-catenin、转化生长因子-β1、Rac1与Vimentin表达下调(P<0.05);RORα与β-catenin结合明显减少(P<0.05);长梭形细胞减少,异型性降低(P<0.05)。SR1078+DADS组的上述指标结果更明显(P<0.05)。结论DADS通过RORα/β-catenin信号抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移侵袭与EMT,提示DADS与SR1078的作用相似。

RORα高表达对二烯丙基二硫抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化的影响

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抗肿瘤的作用。该研究在DADS上调人胃癌MGC803细胞RORα的基础上,观察DADS与RORα高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)的影响。方法:相差显微镜观察MGC803细胞形态的影响。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT相关分子表达。裸鼠实验检测对移植瘤生长的影响。结果:相差显微镜显示,DADS组与RORα高表达组细胞大小较MGC803细胞一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞少见,异型性降低。RORα高表达加DADS后,上述改变更为明显。Western blot检测结果显示,DADS组与RORα高表达组Snail蛋白表达明显下调,DADS+RORα高表达组更明显(P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测显示,DADS与RORα高表达可明显下调Vimentin和上调E-cadherin m RNA与蛋白表达,DADS+RORα高表达组更为显著(P<0.05)。免疫荧光显示,DADS组与RORα高表达组细胞Snail与Vimentin表达较对照组明显减弱和E-cadherin表达显著增强,DADS+RORα高表达组更为显著,与Western blot结果一致。裸鼠实验显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组移植瘤较对照组生长减慢(P<0.05),并且,移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率分别为15.07%、26.55%与49.27%(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组较对照组的Ki-67、CD34与Vimentin表达均明显降低,E-cadherin表达明显增强。结论:RORα高表达可增强DADS体内外抑制人胃癌细胞EMT的作用。

RORα高表达抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化

目的在构建RORα高表达人胃癌MGC803细胞的基础上,观察RORα高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)的影响。方法采用相差显微镜观察RORα高表达对MGC803细胞形态的影响。RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化法检测EMT相关分子表达。裸鼠实验检测RORα高表达对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,RORα高表达细胞较MGC803细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,异型性降低。Western blot检测结果显示,RORα高表达可明显下调MGC803细胞Snail蛋白表达(P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测结果显示,RORα高表达可下调vimentin和上调E-cadherin m RNA与蛋白表达。免疫荧光检测结果显示,RORα高表达组细胞Snail与vimentin阳性信号表达较对照组明显减弱,而E-cadherin阳性信号显著增强。RORα高表达组移植瘤较对照组生长减慢(P<0.05),移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率为26.55%(P<0.05)。RORα高表达组较对照组癌细胞异型性降低。RORα高表达组较对照组的Ki-67、CD34与vimentin阳性表达均明显降低,而E-cadherin阳性表达明显增强。结论 RORα高表达可体内外抑制人胃癌细胞EMT。

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞分化的差异蛋白质分析

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞分化过程中蛋白质的差异表达。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离DADS处理前后人胃癌MGC803细胞总蛋白,凝胶经过银染后用PDQuest软件进行分析,差异蛋白质点经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的数据进行生物信息学处理。结果 DADS处理MGC803细胞前后的总蛋白质的双向电泳银染图谱,经扫描成像及PDQuest软件分析,对照组与处理组蛋白质点与平均匹配率分别为(576±14)个和(583±4)个与76%和70%,421个匹配,200个未被匹配。经相关数据库查询,在初步鉴定的差异蛋白质点中,发现24个与细胞分化、肿瘤转移、细胞凋亡、细胞周期、细胞免疫及代谢等相关的蛋白质,如gastric mucin、nM23、CDC2、uPAR、LIMK、RORα、MHC DR-beta-1 chain、TCR等,这些蛋白质可能在胃癌的发生发展中起着潜在的作用。结论 DADS可能通过多种途径诱导MGC803细胞分化。蛋白质组差异表达的初步分析为进一步研究胃癌分化的相关蛋白质及标记物奠定一定基础。

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞的差异microRNA表达

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达。方法采用miRNAs芯片与qRT-PCR检测DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达。结果 microRNA芯片检测显示,30 mg·L^(-1)DADS处理24 h后,MGC803细胞的差异miRNAs表达中,miR-200b、miR-22、miR-7、miR-143、miR-138、miR-34a、miR-150等7个miRNA表达明显上调,miR-222、miR-21、miR-15b、miR-182、miR-18a等5个miRNA下调。q PCR证实,30 mg·L^(-1)DADS处理MGC803细胞后,miR-200b、miR-22、miR-7、miR-143、miR-138、miR-34a、miR-150等表达较未处理组明显上调(P <0. 05)。且q PCR检测显示,miR-200b与miR-22在MGC-803、BGC-823、MKN-28、SGC-7901、HGC-27等各种人胃癌细胞表达较正常人胃癌GES-1细胞明显下调(P <0. 05)。miR-200b与miR-22在胃癌组织中表达较正常胃组织明显下调(P <0. 05)。结论DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达有7个miRNA明显上调,5个miRNA下调。miR-200b与miR-22在胃癌组织与细胞中表达下调。DADS可上调MGC803细胞miR-200b与miR-22表达。

二烯丙基二硫下调β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞EMT

目的研究二烯丙基二硫(DADS)抑制人胃癌MGC803细胞EMT与形态学变化。方法应用相差显微镜与透射电镜观察30 mg·L-1DADS处理后的MGC803细胞形态学与超微结构的变化。RT-PCR与Western blot检测β-catenin和EMT标记E-cadherin与Vimentin表达。结果 30 mg·L-1DADS处理MGC803细胞24 h后,相差显微镜显示,与未处理比较,细胞圆形、椭圆形,核浆比值降低,巢状分布,均未见伪足。透射电镜显示,细胞表面微绒毛数目减少,细胞核变规整,核浆比值下降,异型性降低,细胞与细胞之间出现连接结构,细胞器增多。RT-PCR与Western blot表明,DADS可呈时间依赖性分别下调MGC803细胞β-catenin和Vimentin mRNA与蛋白和上调E-cadherin mRNA与蛋白。结论 DADS可通过下调β-catenin上调E-cadherin与下调Vimentin抑制EMT和伪足形成。

LIMK1过表达通过LIMK1/cofilin1通路促进人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭

目的:探讨LIMK1过表达对人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法:真核表达载体转染技术构建过表达LIMK1基因MGC803细胞;RT-PCR和Western blot检测LIMK1、Cofilin1、p-Cofilin1表达;MTT、流式细胞术、细胞划痕和侵袭实验分别检测LIMK1过表达对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移与侵袭能力的影响。结果:成功构建稳定过表达LIMK1基因MGC803细胞。MTT显示,LIMK1过表达组细胞的增殖活性呈时间依赖性,高于对照组和空载体组(P<0.001)。流式细胞术检测显示,LIMK1过表达组G2/M期细胞百分率8.36%,较MGC803组11.45%(P=0.0054)和空载体组11.59%降低(P=0.0056)。划痕实验显示,24 h后LIMK1过表达组迁移距离(163.9±1.5)mm分别高于MGC803组(127.1±2.0)mm(P<0.0001)和空载体组(124.1±3.1)mm(P<0.0001)。侵袭实验显示,LIMK1过表达组穿膜细胞(86.3±4.2)个分别明显多于MGC803组(48.3±2.5)个(P=0.0003)和空载体组(49.3±3.1)个(P=0.0003)。RT-PCR和Western blot显示,LIMK1过表达组LIMK1表达分别高于对照组(P<0.0001)和空载体组(P=0.0002),p-LIMK1表达分别高于对照组(P=0.0003)和空载体组(P=0.0004)。LIMK1过表达组Cofilin1 mRNA与蛋白表达较MGC803组和空载体组差异均无统计学意义(P>0.05),而p-Cofilin1表达分别高于对照组(P=0.0009)和空载体组(P=0.0018)。结论:LIMK1过表达可通过激活LIMK1/cofilin1通路促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。

沉默LIMK1抑制人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭

探讨沉默LIM激酶1(LIMK1)对人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭的影响。采用RNA干扰技术沉默MGC803细胞LIMK1基因,RT-PCR和Western blot检测干扰效率,MTT、流式细胞术、细胞划痕和侵袭实验分别检测沉默LIMK1对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移与侵袭能力的影响。结果显示,成功构建稳定沉默LIMK1基因MGC803细胞。MTT显示,LIMK1沉默组细胞在24、48、72、96 h分别较对照组与空载体组的抑制率为61.0%、36.9%、12.1%、1.6%和54.7%、46.2%、13.5%、1.5%(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组G2/M期17.96%明显高于MGC803组11.45%和空载体组11.68%(P<0.05)。划痕实验显示,24 h后,沉默组划痕距离(155.9±7.6)较对照组(65.9±11.0)和空载体组(73.2±5.1)明显增加(P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(25.1±1.3)较对照组(42.4±2.8)和空载体组(45.2±3.0)明显减少(P<0.05)。沉默LIMK1可抑制MGC803细胞增殖、迁移与侵袭和阻滞G2/M期。

毛茛有效部位D1对人胃癌细胞MGC803细胞增殖和凋亡的作用及其机制的初步研究

采用AlamarBlue和瑞-姬氏染色方法检测毛茛有效部位D1对人胃癌细胞MGC803增殖的作用;PI染色法观察D1对MGC803细胞周期的影响;半定量RT-PCR法检测D1对MGC803细胞周期相关基因表达的作用;用DAPI染色方法和细胞色素C免疫荧光法观察D1对胃癌细胞MGC803凋亡的影响。结果显示,毛茛有效部位D1对胃癌细胞MGC803表现出较好的增殖抑制作用,且24、48和72 h的半数抑制浓度分别为126.89、74.81、68.72μg/mL;同时D1对细胞周期和周期相关基因的表达无明显影响,且D1能促使细胞色素C释放到细胞胞浆诱导细胞凋亡。

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞Rac1-Pak1／Rock1通路的影响

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞Rac1-Pak1/Rock1通路分子的影响。方法 30 mg·L-1DADS分别处理MGC803细胞不同时间后,采用RT-PCR、Western blot分别检测Rac1、Pak1、Rock1、cofilin1和destrin的mRNA和蛋白水平。结果 DADS可下调MGC803细胞Rac1、Pak1和Rock1 mRNA和蛋白水平(P<0.05),对cofilin1和destrin的表达无影响,但可抑制cofilin1磷酸化(P<0.01)。结论 DADS可下调Rac1、Pak1和Rock1表达和磷酸化cofilin1;DADS抑制Rac1-Pak1/Rock1通路可能与DADS抗人胃癌MGC803细胞迁移侵袭作用机制有关。

miR-124通过调控PI3K/Akt信号通路对人胃癌MGC803细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨miR-124对人胃癌MGC803细胞增殖、凋亡的影响及调控PI3K/Akt信号通路的作用机制。方法培养人胃癌细胞株MGC803,将miR-124模拟物(miR-124mimics组)及miR-124阴性对照(miR-124 NC组)转染至MGC803细胞中,并采用CCK-8法及细胞克隆实验考察转染后MGC803细胞增殖情况,流式细胞术检测转染后细胞凋亡,Western blotting检测PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平,RT-qPCR检测PI3K和Akt mRNA表达。结果转染miR-124后,miR-124mimics组中miR-124水平为(4.15±0.18),显著高于miR-124 NC组(P<0.01)。miR-124mimics组转染48h和72h后的OD450值分别为(0.86±0.08)和(1.08±0.13),均显著低于miR-124 NC组(P<0.05),且其细胞克隆形成数显著降低(P<0.01);转染48h和72h后MGC803细胞凋亡率为(51.80±8.14)%及(70.40±7.14)%,显著高于miR-124 NC组(P<0.01)。同时,miR-124mimics组PI3K/Akt信号通路中关键靶点PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平显著低于miR-124 NC组(P<0.05);miR-124mimics组PI3K/Akt信号通路中PI3K和Akt基因表达水平显著低于miR-124 NC组(P<0.01)。结论miR-124可抑制人胃癌MGC803细胞的增殖,促进细胞凋亡,其可能通过下调PI3K/Akt信号通路发挥作用。

二烯丙基二硫通过LIMK1-Cofilin1通路抑制人胃癌细胞侵袭与上皮-间质转化

目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌MGC803细胞侵袭与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响及其机制。方法:体内外实验分为MGC803细胞组与DADS处理组。MTT、划痕实验与侵袭实验检测DADS对增殖、迁移与侵袭的影响。Western Blot检测LIMK1-Cofilin1通路与EMT相关蛋白表达。相差显微镜观察MGC803细胞形态改变。裸鼠实验检测DADS对移植瘤的作用。结果:MTT显示,DADS可呈时间依赖性抑制MGC803细胞增殖(P<0.05)。划痕实验显示,DADS组细胞迁移距离(59.9±1.9)μm较MGC803组(127.1±2.0)μm明显缩短(P<0.01)。侵袭实验显示,DADS组穿膜细胞(30.0±2.6)个较MGC803组(48.3±2.5)个明显减少(P<0.01)。Western Blot显示,DADS作用6 h、12 h、24 h、48 h后,MGC803细胞LIMK1、p-LIMK1与p-Cofilin1(P<0.001),Vimentin(P<0.001)与MMP-9(P<0.001)分别呈时间依赖性下调,而E-cadherin(P=0.001)与TIMP-3明显上调(P<0.001)。相差显微镜显示,DADS处理后,纤维母细胞样细胞减少,异型性显著降低。裸鼠实验显示,DADS组移植瘤较MGC803细胞组生长缓慢(P<0.05),DADS组移植瘤重量较MGC803细胞组降低,抑瘤率为60.19%(P<0.001),Ki-67、Vimentin、Snail和CD34阳性表达均降低,E-cadherin表达增加。结论:DADS可通过LIMK1-Cofilin1通路体内外抑制MGC803细胞侵袭与EMT。

沉默RORα通过活化Wnt/β-catenin通路靶基因促进人胃癌细胞增殖

目的探讨人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体(ROR)α与Wnt/β-连环素(catenin)通路的相互作用。方法噻唑蓝(MTT)实验验证沉默RORα对胃癌细胞系MGC803的增殖作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹与免疫共沉淀检测敲低RORα对Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达;荧光素酶报告检测c-Myc基因启动子活性。结果敲低RORα可显著促进胃癌细胞增殖(P<0.05)。当RORα被敲低时可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);但对β-catenin无明显影响(P>0.05)。免疫共沉淀提示敲低RORα可显著降低RORα与β-catenin的结合效率(P<0.05)。RORα敲低后,核内β-catenin与转录因子(TCF)-4表达水平明显升高(P<0.05)。Wnt通路下游基因Axin、c-Myc、c-Jun和基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05)。荧光素酶报告提示,敲低RORα可显著增强c-Myc启动子活性(P<0.05)。结论敲低RORα可活化Wnt/β-catenin信号通路从而促进胃癌细胞增殖。

二烯丙基二硫在RORα抑制人胃癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)是否上调维甲酸相关孤核受体α(RORα)抑制人胃癌细胞株MGC803细胞上皮-间质转化(EMT)。方法相差显微镜观察MGC803细胞形态的改变。逆转录PCR(RTPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT的相关分子表达。裸鼠实验检测DADS与沉默RORα对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,沉默RORα细胞较MGC803细胞大小与形状差异更明显。DADS作用后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞减少,异型性下降。RT-PCR与Western blot显示,DADS处理后较处理前各组RORαm RNA与蛋白表达上调(P<0.05)。DADS作用对照组与空载体组较沉默组效果更为明显(P<0.05)。RORα沉默较对照组和空载体组细胞锌指转录因子(Snail)和波形蛋白(Vimentin)m RNA与蛋白表达上调,而E-钙黏蛋白(E-cadherin)m RNA与蛋白下调(P<0.05)。DADS处理后,各组Snail蛋白下调、Vimentin m RNA与蛋白下调和E-cadherin m RNA与蛋白上调(P<0.05)。免疫荧光显示,沉默组细胞Snail与Vimentin阳性表达较对照组增强,而E-cadherin阳性表达减弱。DADS作用后,结果相反。裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快和体重增加(P<0.05),增殖细胞核抗原(Ki-67)、Snail、CD34及Vimentin阳性表达较对照组增加,而E-cadherin阳性降低。DADS处理各组移植瘤生长与体积减慢与减小,Ki-67、Snail、CD34与Vimentin阳性表达较对照组减弱,而E-cadherin阳性表达增强。结论 DADS通过上调RORα可体内外抑制人胃癌MGC803细胞EMT。

毛茛总苷对人胃癌细胞和胰腺癌细胞增殖作用的初步研究

目的:研究毛茛总苷体外对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌PATU898细胞增殖、细胞周期的影响。方法:采用Alamar Blue和瑞-姬染色方法检测毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细胞PATU8988增殖的作用;PI染色法观察毛茛总苷对MGC803和PATU8988细胞周期的影响;Annexin V/PI双染实验法检测毛茛总苷对MGC803细胞凋亡的影响。结果:用Alamar Blue检测及瑞-姬染色法,其结果显示毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细胞PATU8988表现出具有较好地增殖和抑制作用,其48h的半数抑制浓度分别为222.05μg/mL,341.23μg/mL;用PI单染法,其结果显示毛茛总苷对2株肿瘤细胞的细胞周期无明显影响;用Annexin V/PI双染法,其实验结果显示毛茛总苷可诱导MGC803细胞凋亡。结论:毛茛总苷在体外可以明显抑制MGC803和PATU8988的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关,而与细胞周期阻滞无关。

沉默RORα通过Wnt信号通路促进人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的:在构建沉默RORα人胃癌MGC803细胞的基础上,观察沉默RORα对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法:软琼脂集落形成实验、流式细胞术、细胞迁移和侵袭实验检测RORα沉默对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR与Western blot检测RORα、Wnt1、MMP-9与TIMP3 m RNA与蛋白表达。结果:集落形成实验显示,沉默组的集落形成率128.1%明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组S期细胞百分率39.9%较对照组26.1%和空载体组27.4%明显增加(P<0.05)。迁移实验显示,沉默组迁移距离(1.76±0.19)mm明显高于对照组(1.32±0.14)mm和空载体组(1.29±0.17)mm(P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(172±27)个明显多于对照组(147±17)个和空载体组(149±14)个(P<0.05)。RT-PCR与Western blot表明,沉默RORα可显著上调Wnt1与MMP-9 m RNA与蛋白与下调RORα与TIMP3 m RNA与蛋白。结论:沉默RORα可通过Wnt信号通路上调MMP-9和下调TIMP3促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。

siRNA沉默DJ-1通过PTEN/Akt通路对人胃癌细胞影响机制

目的探讨siRNA沉默DJ-1基因体内外对人胃癌MGC803细胞的影响机制。方法构建沉默DJ-1基因MGC803细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆、细胞划痕和侵袭实验检测沉默DJ-1基因对MGC803细胞增殖、克隆形成、迁移与侵袭的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测DJ-1、PTEN、Akt、p-Akt、Snail、Vimentin、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)与基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)的表达;相差显微镜观察DJ-1沉默对MGC803细胞形态学的影响;裸鼠实验检测DJ-1沉默对MGC803细胞移植瘤的影响。结果分别用4组si-DJ-1及si-NC质粒转染MGC803细胞,其中si-DJ-1A组DJ-1 mRNA与蛋白表达下调较为显著(P<0.001),则后续选用si-DJ-1A作为稳定沉默DJ-1基因MGC803细胞。MTT法检测结果显示,24、48和72 h后,si-DJ-1组增殖活性分别较MGC803对照组和si-NC组降低,均P<0.001。克隆形成实验显示,si-DJ-1组克隆形成数较对照组与si-NC组减少,P<0.001。划痕实验结果显示,si-DJ-1组迁移距离[(199.21±14.74)μm]较对照组[(302.62±17.70)μm]和si-NC组[(304.49±13.55)μm]缩短,P<0.001。侵袭实验显示,si-DJ-1组侵袭细胞数[(44.80±5.10)个]较对照组[(83.80±5.80)个]和si-NC组[(82.80±5.80)个]减少,P<0.001。与对照组和si-NC组相比,si-DJ-1组DJ-1 mRNA(F=18.350,P=0.003)、Snail mRNA(F=26.320,P<0.001)、Vimentin mRNA(F=44.379,P<0.001)与MMP-9 mRNA(F=57.450,P<0.001)下调,而E-cadherin mRNA(F=94.529,P<0.001)与TIMP3 mRNA(F=16.480,P=0.004)上调;si-DJ-1组DJ-1(F=6.393,P=0.004)、p-Akt(F=12.980,P=0.007)、Snail(F=381.000,P<0.001)、Vimentin(F=99.750,P<0.001)与MMP-9(F=126.800,P<0.001)蛋白下调,而PTEN(F=36.880,P<0.001)、E-cadherin(F=181.000,P<0.001)与TIMP3(F=217.800,P<0.001)上调。相差显微镜显示,si-DJ-1组纤维母细胞样长梭形细胞肿瘤干细胞减少,圆形与椭圆形细胞增多,异型性下降。体内实验表明,si-DJ-1组移植瘤生长速度较对照组减慢,si-DJ-1组移植瘤质量[(0.51±0.05)g]较对照组[(0.90±0.16)g]减小,t=5.273,P<0.001。si-DJ-1组较对照组DJ-1、Ki-67、Vimentin和CD-34阳性表达降低,而PTEN和E-cadherin表达增强。结论DJ-1沉默可通过PTEN/Akt通路体内外抑制MGC803细胞增殖、迁移、侵袭与上皮细胞-间充质转化。

毛茛总苷对人胃癌MGC803细胞血管生成拟态的影响及其机制

目的探讨毛茛总苷对人胃癌MGC803细胞血管生成拟态的影响及其机制。方法采用细胞黏附实验观察毛茛总苷对MGC803细胞黏附作用的影响;通过细胞划痕实验检测毛茛总苷对MGC803细胞迁移能力的影响;通过Matrigel肿瘤细胞类血管生成模型实验观察毛茛总苷对MGC803细胞体外类血管生成的作用;半定量RT-PCR方法检测毛茛总苷对MGC803细胞血管生成拟态相关基因表达的影响。结果毛茛总苷有效抑制MGC803细胞黏附、细胞迁移以及MGC803细胞介导的体外类血管生成;明显抑制MGC803细胞血管生成拟态相关基因VE-cadherin、sema 4D和integrinβ5的表达。结论毛茛总苷通过抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、sema 4D和integrinβ5的表达来抑制MGC803细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态。

RORα高表达抑制人胃癌MGC803细胞Wnt／β-catenin信号通路靶基因表达

该文探讨了RORα(retinoid acid receptor related orphan receptorα)高表达对人胃癌MGC803细胞Wnt/β-catenin信号通路靶基因的作用。采用MTT检测了MGC803细胞增殖。采用RT-PCR、Western blot与免疫共沉淀检测了Wnt/β-catenin信号通路相关分子与靶基因表达。荧光素酶报告基因方法检测c-Myc基因启动子活性。MTT结果显示,RORα高表达人胃癌MGC803细胞的增殖能力较对照组明显减弱(P<0.05)。RT-PCR与Western blot结果显示,RORα高表达组Wnt1m RNA与蛋白质水平较对照组下调(P<0.05),而β-catenin m RNA与蛋白质水平无差异(P>0.05)。免疫共沉淀结果显示,RORα高表达组RORα与β-catenin结合明显增加(P<0.05)。RORα高表达可显著下调核内β-catenin水平(P<0.05),同时可显著下调TCF-4(T cell factor-4)蛋白质水平(P<0.05)。RORα高表达可显著下调Axin、c-Myc、c-Jun m RNA与蛋白质水平(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,RORα高表达c-Myc启动子活性明显降低(P<0.05)。以上结果表明,RORα高表达可通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关分子基因表达来抑制人胃癌细胞增殖。