大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cyclin D1和p27^(Kip1)表达的影响

背景与目的:在研究大蒜素抑制人胃癌细胞BGC823恶性增殖,将其阻滞于G1期并诱导BGC823细胞凋亡的分子机制及其靶基因过程中,我们发现cyclinD1和p27Kip1蛋白在G1期阻滞中起重要作用。本实验从mRNA和蛋白水平探讨大蒜素对人胃癌细胞BGC823cyclinD1和p27Kip1表达水平的影响。方法:用25μg/ml大蒜素处理BGC823细胞,并分别提取对照组和大蒜素处理组的总RNA和总蛋白,然后采用RT-PCR和Westernblot法检测大蒜素处理前后cyclinD1和p27Kip1mRNA和蛋白的变化。结果:经25μg/ml大蒜素处理BGC823细胞24h,cyclinD1蛋白表达下调,p27Kip1蛋白表达上调,处理48h上述变化更明显。而mRNA水平未见明显改变。结论:大蒜素可影响cyclinD1和p27Kip1蛋白的表达,而不影响mRNA的转录。

干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响

背景与目的:LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道。该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况。结果:LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达。RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的m RNA和蛋白表达水平均明显下降。细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制。结论:LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移。

Chk1和Chk2高表达人胃癌BGC823细胞的建立与鉴定

细胞周期检测点Chkl和Chk2在参与G2/M期起着重要作用,本研究构建Chk1/2的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌BGC823细胞,进一步证明Chk1/2高表达对BGC823细胞G2/M期的影响。根据NCBI Gen Bank Chk1/2基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染BGC823细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果显示,菌落特异性PCR表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,经测序与NCBIBLAST分析证实为Chk1和Chk2基因。稳定转染空载体pcDNA3.1的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的BGC823细胞,经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在BGC823细胞中的表达较对照组与空载体组明显增加(P<0.05)。流式细胞术检测显示,Chk1转染组G2/M细胞较对照组与空载体组明显增加(P<0.05),而Chk2转染组G2/M细胞无明显差异(P>0.05)。上述结果表明,成功构建pcDNA3.1/Chk1与pcDNA3.1/Chk2真核表达载体和Chk1与Chk2高表达的BGC823细胞,Chk1高表达可阻滞BGC823细胞于G2/M。

DADS通过Rac1/LIMK1/cofilin1通路增强沉默LIMK1抑制人胃癌BGC823细胞迁移侵袭

探讨二烯丙基二硫(DADS)通过Rac1/LIMK1/cofilin1通路对沉默LIMK1抑制BGC823细胞迁移侵袭的影响。划痕实验和侵袭实验观察迁移和侵袭能力;RT-PCR、Western blot、免疫组化检测LIMK1、Rac1、Rock1、Pak1与Cofilin1和p-Cofilin1表达。结果显示,DADS处理沉默组疤痕距离较对照组和沉默组增加(P<0.05)。DADS处理沉默组穿膜细胞低于对照组、空载体组与沉默组(P<0.05)。沉默组LIMK1表达低于对照组和空载体组,DADS后,各处理组低于处理前各组(P<0.05)。并且,沉默组、对照组和空载体组的Rac1、Rock1、Pak1与p-cofilin1表达下调(P<0.05)。表明DADS可增强沉默LIMK1抑制BGC823细胞迁移侵袭,机制可能与阻断Rac1/LIMK1/cofilin1通路有关。

沉默LIMK1抑制人胃癌BGC823细胞迁移与侵袭

目的:探讨沉默LIMK1对人胃癌BGC823细胞迁移与侵袭的影响。方法:RNA干扰技术沉默人胃癌BGC823细胞LIMK1基因,RT-PCR和Western blot检测干扰效率;MTT、细胞划痕和侵袭实验分别检测沉默LIMK1对人胃癌BGC823细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。结果:成功构建沉默LIMK1基因稳定人胃癌BGC823细胞。MTT显示,LIMK1沉默组在24、48、72与96 h较对照组与空载体组的抑制率分别为1.67%、1.45%、0.25%与2.2%和1.60%、1.29%、0.25%与2.2%(P<0.05)。划痕实验显示,12 h和24 h后,沉默组疤痕距离分别为(0.66±0.03)cm与(0.30±0.09)cm,较对照组(0.35±0.03)cm与(0.10±0.03)cm呈时间依赖性降低(P<0.05)。沉默组穿膜细胞数(35±2.86)个,少于对照组(66±3.56)个及空载体组(65±4.35)个(P<0.05)。结论:沉默LIMK1可抑制人胃癌BGC823细胞增殖、迁移与侵袭。

白头翁皂苷体外抗肿瘤试验研究

为研究白头翁皂苷体外抗肿瘤活性,从白头翁中提取有效成分皂苷,对大肠癌HT29细胞和人胃癌细胞株BGC823进行体外培养,用MTT法测定白头翁皂苷对2种肿瘤细胞增殖反应的影响。结果表明:白头翁皂苷对两种肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用,并表现一定的剂量关系,白头翁皂苷浓度为6μg.mL-1时,对人胃癌细胞株BGC823细胞生长的抑制率达到了80.71%,效果较好。因此,白头翁皂苷作为抗肿瘤药物有效成分的开发和利用有待于进一步深入研究。

小半夏加茯苓醇提物对HepG2、BGC823线粒体凋亡途径的影响

目的探讨小半夏加茯苓醇提物对人肝癌细胞HepG2和人胃腺癌细胞BGC823增殖抑制作用及线粒体凋亡途径的影响。方法运用CCK-8法检测HepG2、BGC823的增殖抑制情况,计算生长抑制率及半数抑制浓度;运用流式细胞术和实时荧光定量PCR检测HepG2、BGC823的线粒体跨膜电位和bax、cjun基因的表达情况。结果小半夏加茯苓醇提物对HepG2、BGC823均有显著的抑制作用(P<0.01),其半数抑制浓度分别为(781.50±13.00)μg/mL和(560.05±10.06)μg/mL;与空白对照组比,试验组HepG2的荧光强度升高(P<0.05),试验组BGC823的荧光强度显著升高(P<0.01);HepG2、BGC823试验组的bax、cjun基因的相对表达量与空白对照组比较,均显著升高(P<0.01)。结论小半夏加茯苓醇提物诱导HepG2、BGC823凋亡的机制可能与激活线粒体途径有关。

番荔枝内酯体外抑制人胃癌细胞活性研究

目的探究番荔枝内酯对人胃癌细胞体外活性的影响。方法分别采用MTT实验、黏附实验和划痕实验考察番荔枝内酯对4种人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901生长活性、黏附能力和迁移能力的影响。结果番荔枝内酯抑制人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901的生长并呈剂量依赖性,其IC50值分别为5.32、6.25、5.46、4.43μg/mL;抑制人胃癌细胞黏附能力并呈剂量依赖性;抑制人胃癌细胞的迁移能力并呈剂量依赖性。结论番荔枝内酯体外可以有效抑制人胃癌细胞的活性,有望被开发成治疗胃癌的候选药物。