三氧化二砷对人胶质瘤细胞株U251影响的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抗人胶质瘤细胞株U251的作用及机制.方法采用0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L As2O3诱导人胶质瘤细胞株U251,于培养第1、2、3、4、5、6 d应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪观察人胶质瘤细胞株U251的存活,形态学改变及细胞DNA含量的变化.结果0.5～4μmol/L的As2O3明显抑制U251的增殖.流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,诱导细胞凋亡.结论体外三氧化二砷能抑制人胶质瘤细胞U251增殖,提示有希望用于神经胶质瘤患者的治疗.

神经节苷脂类抑制BT325细胞系的生长

应用自提的神经节苷脂GM 3,牛脑神经节苷脂 (bovinebraingangliosides,BBG)加入低血清培养的人多形成胶质细胞瘤BT32 5细胞中观察其对该细胞系的影响 ;以及GM3、BBG对表皮生长因子(EGF)刺激该细胞系生长的拮抗作用 .结果表明GM3、BBG均能抑制BT32 5细胞生长 ,GM 3的抑制作用远高于BBG ,其抑制率为 60 2 8% (P <0 0 1 ) ,BBG为 1 9 33% ,在含不同浓度的EGF培养液中分别加入GM3、BBG均可拮抗EGF对BT32 5生长的刺激作用 ,GM3的拮抗作用远高于BBG .

神经节苷脂类抑制BT325细胞系生长机理的初步探讨

用１２５ＩＥＧＦ与人多形成胶质细胞瘤ＢＴ３２５细胞系膜上ＥＧＦ受体的饱和结合实验，竞争抑制实验研究ＧＭ３，ＢＢＧ（ｂｏｖｉｎｅｂｒａｉｎｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）对ＥＧＦ受体最大结合量，亲和常数及受体数目的影响；放射受体法观察ＥＧＦＥＧＦＲ复合物内吞过程，测定胞质和培养基中ＥＧＦ含量．结果表明：ＢＴ３２５细胞质膜上存在高亲和力ＥＧＦ结合位点，ＧＭ３对ＥＧＦ与其受体的亲和力无明显抑制作用（Ｐ＞００５），但能明显减少其受体的数目（Ｐ＜００５）；ＧＭ３能明显延长ＥＧＦＥＧＦＲ复合物内吞过程；ＧＭ３处理的胞质中ＥＧＦ浓度比对照组显著升高（Ｐ＜００５），培养液中无明显差异。

三氧化二砷对体外人胶质瘤细胞株U251的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对体外培养的人类成神经胶质瘤细胞株U251MG的作用及其机制。方法应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组U251细胞的存活、形态学改变、细胞DNA含量的分布进行观察和测定。结果0.5～4μmol/L的As2O3可明显抑制U251的增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,诱导细胞凋亡。结论As2O3能抑制体外人胶质瘤细胞株U251的增殖,有望用于神经胶质瘤的治疗。

不同p53功能状态的胶质瘤细胞株放射敏感性研究

目的探讨不同p53功能状态胶质瘤细胞的放射敏感性。方法采用射线照射野生型p53基因的U87和突变型P53的U251细胞株。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,成克隆实验测定细胞存活分数,采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数Do、Dq、N和α、β、SF2值。结果射线处理后U87细胞亚二倍体峰明显高于U251(P<0.05﹚,而U251细胞明显阻滞于G0/G1期;突变型p53基因的U251和野生型p53基因的U87细胞的Do值分别为1.0450、0.9652Gy;Dq值分别为1.8544、1.2524Gy;a值分别为0.13、0.525Gy-1;SF2值分别为0.722、0.241。野生型p53基因U87细胞Do、Dq和SF2值均减小,α值增大。结论野生型p53基因U87可以提高胶质瘤细胞的放射敏感性。

用碳-铂复型与免疫电镜技术对人脑胶质瘤细胞系BT_(325)整装细胞骨架的研究

人脑胶质瘤细胞系BT_(325)细胞用含Triton X-100的缓冲液处理后,用针对波形纤维蛋白(vimentin)的单克隆抗体,与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗血清进行间接免疫荧光染色。在荧光显微镜下观察后,将细胞用酒精逐级脱水,然后进行临界点干燥。将干燥后的细胞进行碳-铂喷镀,所得到的碳-铂复型用透射电镜观察。用本法可清晰地观察到完整的细胞骨架,以及微管、微丝与中间丝的形态与分布。在经vimentin单克隆抗体免疫染色的细胞内,中间丝直径较粗;在用GFAP抗血清染色后,只有部分细胞内中间丝直径较粗。如将Triten处理的细胞先用甲醛固定后,再进行免疫染色,中间丝直径增加较少;但如果先进行免疫染色后再用甲醛固定,中间丝直径显著增加。这与免疫荧光观察结果相一致,说明甲醛固定对中间丝分子上的抗原位点起破坏或遮蔽作用。

人脑胶质母细胞瘤细胞系U87的单克隆细胞构建及异质性研究

目的人胶质母细胞瘤细胞细胞系U87被作为胶质母细胞瘤(GBM)异质性研究的模型,但从基因水平探讨其异质性来源的研究较少。文章旨在构建人胶质母细胞瘤细胞系U87单克隆细胞株,检测不同单克隆细胞株的表型和遗传背景差异,并探讨产生表型差异的分子机制。方法利用小分子荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)作为筛选标记,有限稀释法构建U87单克隆细胞株,并挑选具有典型形态特征的2株单克隆化细胞,经短串联重复序列(STR)鉴定后进行后续研究。采用CCK-8、EdU掺入法增殖实验和和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;肿瘤干细胞成球实验检测细胞成球能力;免疫荧光和CCK-8法黏附实验检测细胞黏附能力;3D侵袭实验检测细胞侵袭能力;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞对化疗药物的敏感性;转录组测序(RNA-seq)对细胞进行测序及生物信息学分析;qRT-PCR验证富集通路中代表性差异基因mRNA表达量。结果构建了形态较为均一U87单克隆细胞株CF5和G11。其中CF5小而短粗,G11大而细长。CCK-8增殖实验结果显示,CF5细胞增殖能力较U87、G11明显增强,U87较G11明显增强(P<0.001)。EdU掺入法增殖实验结果显示,CF5 EdU阳性细胞比例(0.54±0.05)较G11细胞(0.35±0.03)、U87(0.44±0.03)明显增加,U87较G11明显增强(P<0.01)。肿瘤干细胞成球实验显示,CF5干细胞成球能力较U87、G11明显增强,U87较G11明显增强(P<0.01)。免疫荧光法黏附实验显示,黏附1 h后G11黏附面积较U87、CF5明显增强,U87较CF5明显增强(P<0.001)。3D培养侵袭实验结果显示,G11细胞侵袭能力较U87、CF5明显增强,U87较CF5明显增强(P<0.05)。交互分析发现CF5相对G11和U87均下调的基因159个,均上调的基因303个;G11相对CF5和U87均下调的基因有281个,上调的基因则有116个;通路富集分析显示CF5和G11在细胞外基质相关的通路有最高的富集度,细胞外基质相关通路与肿瘤侵袭、耐药等功能表型密切相关。结论成功构建从形态、功能表型到基因背景具有显著差异的U87单克隆细胞株CF5、G11,为研究GBM异质性和基因功能奠定了基础。

脑胶质瘤不同照射方案生物效应的实验研究

目的 通过对人脑多形性胶质母细胞瘤（BT325细胞系）裸小鼠移植瘤不同分割模式照射后生物效应的实验研究,加深对人脑胶质瘤放射反应生物学特性认识,为临床设计照射计划、制定合理分次治疗方案提供实验依据.方法 对BT325细胞系裸小鼠移植瘤进行单次10、20、30、40、60 Gy照射和2 Gy每周5次每天照射、3 Gy每周3次隔天照射、3 Gy每周5次每天照射、4 Gy每周3次隔天照射,总剂量分别为125、114、126、112 Gy.用肿瘤生长曲线评价剂量效应关系并测定肿瘤体积倍增时间.取贴壁生长的指数生长期BT325细胞,用生长曲线测定细胞倍增时间,细胞克隆形成分析法绘制细胞存活曲线（照射剂量为0、1、2、4、6、8、10 Gy）计算曲线参数值,彗星分析法测定DNA单链断裂半修复时间（T1/2）.结果 单次照射各剂量点均不能有效控制肿瘤.2 Gy5次/周和3 Gy3次/周治疗方案对人脑胶质瘤实体瘤也无明显治疗效果.增加分次剂量可使脑胶质瘤实体肿瘤有较明显的消退,其中4 Gy3次/周方案好于其他方案但仍未能达到治愈肿瘤的效果.表明对肿瘤干细胞的控制不理想.各项生物学参数的测定结果：BT325细胞倍增时间为30.16 h,裸小鼠移植瘤肿瘤倍增时间为43 d;细胞存活曲线LQ模型拟合的α=0.360 Gy-1、β=0.057 Gy-2,多靶单击模型拟合的D0=1.394 Gy、Dq=2.127 Gy、SF2=0.714;5 Gy照射DNA单链断裂的T1/2=9.999 min.结论 本实验从实证实验角度印证了临床上脑胶质瘤是一种放射耐受性较高的肿瘤的看法.研究结果提示增高分割剂量有可能提高肿瘤的近期疗效（使肿瘤消退率增加）,但如何提高对肿瘤干细胞的控制还需进一步深入研究.各项生物学参数测定结果提示脑胶质瘤细胞内在放射敏感性较差.