β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。

银杏外种皮多糖对人癌细胞株的抑制作用及与阿霉素的协同效应

目的 :检测银杏外种皮多糖 (GBEP)的抗癌活性。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)比色法 ,观察GBEP单用及与阿霉素合用在体外对人BEL 740 4肝癌细胞株、SGC 790 1胃腺癌细胞株及SPC A 1肺腺癌细胞株的抑制作用。结果 :GBEP在 10～ 32 0 μg/ml剂量下 ,体外作用 2 4～ 72h ,对 3种人癌细胞株皆具有抑制作用 ,其抑制率随剂量增加和时间延长而增加 ,而IC50 则随作用时间延长而减小。GBEP在 10～ 16 0 μg/ml剂量下 ,与 0 .4和 4.0 μg/ml的阿霉素合用 ,可提高对 3种人癌细胞的抑制率。结论 :GBEP单用对 3种人癌细胞株的抑制作用具有量效关系及时效关系 ;GBEP与阿霉素合用 ,对 3种人癌细胞株的抑制作用具有协同效应。

青蒿琥酯抗肝癌作用的实验研究

目的 :研究青蒿琥酯的抗肝癌作用。方法 :运用小鼠肝癌H2 2 癌模型、MTT法和集落形成法 ,观察青蒿琥酯对荷瘤鼠和人肝癌SMMC 772 1细胞株的作用。结果 :口服青蒿琥酯 30 0mg·kg-1·d-1,肿瘤受到明显抑制 ,抑瘤率在 3次实验中分别为 49.1% ,48.7% ,46 .6 % ;小鼠生存时间明显延长。青蒿琥酯与 5 氟尿嘧啶有协同抗肿瘤作用。青蒿琥酯体外对人肝癌细胞有明显细胞毒作用 ,其IC50 为 2 .0 7μg·ml-1,同时抑制人肝癌SMMC 772 1克隆原细胞形成集落 ,其IC50 为 2 .48μg·ml-1。结论

番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法设AS-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50μg/mL)、顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察。结果AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48hIC50为6.67μg/mL。结论番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB活性及蛋白表达的抑制

目的:探讨环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性和蛋白表达的影响.方法:不同浓度的塞来昔布作用于HepG2细胞后,应用凝胶电泳迁移率改变分析技术检测HepG2细胞中NF-κBDNA结合活性;用Western blotting法检测HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达.结果:25、50μmol/L塞来昔布作用于HepG2细胞后,药物处理组HepG2细胞NF-κBDNA结合活性明显降低,与空白对照组相比有显著性差异(t=12.58,P=0.000;t=17.97,P=0.000);塞来昔布可明显抑制HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达水平,与空白对照组相比,差异均有统计学意义(t=4.24,P=0.013;t=6.38,P=0.003).结论:塞来昔布能有效抑制HepG2细胞NF-κB活性及NF-κBp65蛋白表达.

眼镜蛇毒细胞毒素在体外对人癌细胞的毒性作用(MTT法)

目的测定眼镜蛇毒细胞毒素（ＣＶ－ＣＴＸ）对人癌细胞株的细胞抑制作用，以期能简便准确地反映其抗癌活性。方法应用溴化二苯四偶氮盐（ＭＴＴ）法测定在ＣＶ－ＣＴＸ作用下体外培养的人胃癌细胞株（ＳＧＣ－７９０１）和人肝癌细胞株（ＳＭＣ）的存活情况和其量效关系。结果（１）ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１的活细胞数与其分解ＭＴＴ的量成正线性关系。（２）ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１癌细胞株的细胞抑制作用呈良好的量效关系，ＩＣ５０分别为２．４５和１．２４μｇ／ｍｌ。结论（１）用ＭＴＴ法测定癌细胞的增殖和衰减是可靠的。（２）应用ＭＴＴ法证实ＣＶ－ＣＴＸ对体外培养的人癌细胞的杀伤程度可作为其抗癌活性指标。

塞来昔布诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的研究

目的探讨塞来昔布体外诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的作用。方法设立空白对照组(培养液中不加任何药物)及塞来昔布5、25、50、100、150μmol.L-1 5个剂量组,作用时间分为24、48、72 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察塞来昔布不同浓度和作用时间对QGY-7701细胞生存率的影响,选择合适的作用时间和3个剂量再做其他凋亡方法的检测;采用Hoechst 33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化;采用双荧光染色(AnnexinV-EGFP/PI)流式细胞检测、末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)检测、DNA含量分析(检测细胞周期)等方法多指标检测细胞凋亡率。结果通过Hoechst 33258染色可以从细胞形态上看出塞来昔布诱导QGY-7701细胞凋亡,而Annexin V-EGFP/PI流式细胞检测、TUNEL检测、细胞周期及MTT检测结果显示随着塞来昔布浓度升高和作用时间延长,凋亡率升高(P<0.05,P<0.01)。结论塞来昔布有诱导肝癌细胞QGY-7701凋亡,抑制其生长的作用,具有治疗肝癌的潜在功能。

中华眼镜蛇毒心脏毒素对人肝癌细胞株细胞膜的影响

目的和方法：运用５７０ 型粘附式细胞仪光漂白后荧光再分布法测定单个细胞膜脂流动性的动态变化和流式细胞仪测定细胞群细胞膜电位，以观察中华眼镜蛇毒心脏毒素对人肝癌细胞株细胞膜的影响。结果：心脏毒素使肝癌细胞膜脂流动性下降，并且使肝癌细胞膜电位下降。

单叶蔓荆果实中多甲氧基黄酮类成分的分离、鉴定及细胞毒活性分析

单叶蔓荆（Vitex rotundifolia Linn.f.）为马鞭草科（Verbenaceae）牡荆属（Vitex Linn.）多年生落叶灌木,其干燥成熟果实供药用,具有疏散风热的功效[1]。单叶蔓荆生于沙滩、海边及湖畔,主要产于中国安徽、福建、广东、河北、江苏、江西、辽宁、山东、台湾和浙江等地,日本、东南亚地区和太平洋群岛也有分布[2]。

MTT法测定稀土离子对BEL-7402及K562细胞的毒性及增殖毒性

用MTT法测定稀土离子在不同浓度、不同培养液中,与BEL 7402和K562细胞作用不同时间,对细胞的毒性和增殖毒性。结果表明,在含10%小牛血清培养液中,仅个别稀土离子在较高浓度时对BEL 7402细胞增殖有较弱的抑制作用;对于K562细胞,稀土离子在低浓度时对细胞增殖即表现出较强的抑制作用(P<0.05)。当培养液不含小牛血清时,较低浓度的稀土离子即可抑制BEL 7402细胞的增殖(P<0 05)。

甲壳胺诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:通过体外实验探讨甲壳胺是否对人肝癌细胞HepG2具有生长抑制及诱导凋亡作用。方法:在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的甲壳胺,培养48 h,于倒置相差显微镜下观察甲壳胺处理组及对照组细胞形态学变化;用流式细胞术(FCM)检测HepG2细胞的凋亡率,Western印迹检测甲壳胺处理组及对照组Bcl-2和p53蛋白的表达变化。结果:HepG2细胞对照组的凋亡率为1.66%,经过0.5和2.0 mg/mL甲壳胺处理后的凋亡率分别增加4.4和8.7倍;Western印迹结果显示甲壳胺处理后,p53蛋白表达水平显著增强,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论:甲壳胺对体外培养的HepG2细胞生长有抑制作用和诱导凋亡作用。

青蒿酯钠抗人肝癌(BEL-7402)与诱导凋亡

应用体内外抑瘤实验、细胞形态学观察、流式细胞仪、Westernblot实验进行检测和观察，探讨青蒿酯钠抗肿瘤作用及机制。结果表明，青蒿酯钠对人肝癌有体内、外抗肿瘤作用；诱导人肝癌细胞凋亡，可能是其抗肿瘤作用机制之一；诱导体外人肝癌细胞凋亡通过P53非依赖性途径。

吴茱萸碱调控微管蛋白聚集阻滞HepG-2细胞周期

研究吴茱萸碱对人肝癌细胞HepG-2的细胞周期阻滞作用及其机制.MTT法检测吴茱萸碱(Evodiamine)对人肝癌HepG-2细胞的细胞毒作用;流式细胞仪分析吴茱萸碱对HepG-2细胞周期的影响;免疫荧光染色法,经激光共聚焦显微镜(CLSM)观察检测吴茱萸碱对HepG-2细胞内微管蛋白α-tubulin聚合形态的影响.吴茱萸碱对人肝癌细胞HepG-2的IC50为19.62μmol/L;吴茱萸碱可将HepG-2细胞阻滞于G2/M期;免疫荧光,激光共聚焦显微镜观察可知,吴茱萸碱可显著改变微管蛋白聚合态发生,使细胞内微管呈束状分布,干扰纺锤体形成.实验表明吴茱萸碱通过影响微管蛋白的聚集状态,将HepG-2细胞周期阻滞于G2/M期.

PAI siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建和鉴定针对PAI的发卡样小干扰RNA(siRNA)真核表达载体PAI siRNA。方法人工合成一对互补并编码相应短发夹状PAIsiRNA的寡核苷酸链,将其插入到pSilencerTM2.1-U6neo载体中,经测序鉴定所构建的重组载体是否正确;采用电转染法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测转染细胞PAI mRNA和蛋白的表达。结果经测序证明PAI siRNA序列正确;转染PAI siRNA载体后,HpG2细胞PAI mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降(P<0.01)。结论测序结果表明发卡样PAI siRNA真核表达载体构建成功,转染HpG2细胞后获得稳定表达,并可特异性封闭PAI的表达,为进一步研究PAI siRNA载体提供了实验基础。

DC-CIK细胞对人肝癌HEPG2细胞周期、凋亡的影响

目的探讨细胞因子从肝癌患者外周血贴壁单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导的树突状细胞(dendritic cells,DCs)与杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)对人肝癌HEPG2细胞系周期、凋亡的影响。方法用肝癌患者肝癌组织裂解物(肿瘤抗原)致敏经GM-CSF、TNF-α及IL-4等诱导该患者PBMC产生的DCs。用IFN-γ、IL-2和人CD3单克隆抗体(human CD3 monoclonal antibody,hCD3mAb)等诱导该PBMC的悬浮细胞产生CIK细胞。用Transwell培养小室将DC-CIK细胞与HEPG2细胞在同一培养体系内经该小室膜分隔培养24、48 h。流式细胞仪检测该HEPG2细胞的周期;Annexin V-PI双染法检测其凋亡。RT-PCR、Western blot分别检测凋亡相关基因Bax及其编码蛋白的表达。结果 DC-CIK细胞可明显影响人HEPG2细胞生长周期,两者共培养,可将HEPG2细胞系阻滞于G1期。DC-CIK细胞能显著诱导HEPG2细胞的凋亡,与对照相比,其凋亡诱导率差异显著(P<0.01)。基因与蛋白水平检测表明,DC-CIK细胞可致HEPG2细胞系的凋亡相关基因Bax表达明显上调。结论肝癌患者DC-CIK细胞可明显抑制肝癌HEPG2细胞系的生长,显著诱导该细胞凋亡,且该凋亡诱导具"时间-依赖"与"细胞数量-依赖"特性。

真菌基因分型方法研究进展

近年来真菌感染的发病率明显上升,对真菌快速准确地分型在研究真菌的致病性、药物敏感性和预防监测流行病学调查中具有重要意义。分子生物学分型技术因简便、分辨率高和重复性强被广泛应用。该文就目前用于真菌基因分型的分子生物学方法作一综述。

升清胶囊干预脂代谢异常对乳腺癌肝转移的影响

目的探讨中药升清胶囊通过干预CXCL12-CXCR4信号通路对脂代谢异常的调节及其对乳腺癌肝转移的影响。方法(1)选用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,分为对照组(Con)、空白血清组(Black)、表阿霉素组(Epirubicin)以及升清胶囊血清低浓度组(SQ-L)、高浓度组(SQ-H)。采用MTT法检测药物血清对细胞增殖的影响,并用划痕愈合实验和Transwell实验检测其对细胞迁移及侵袭能力的影响。同时采用Western blotting法检测CXC趋化因子配体12(CXCL12)与其特异性受体CXCR4以及蛋白激酶B(AKT),磷酸化蛋白激酶B(p-AKT),B淋巴白血病-淋巴瘤-2基因(Bcl-2),基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平的变化。(2)建立脂代谢异常乳腺癌肝转移动物裸鼠模型,用升清胶囊0.25 g·kg^(-1),或表阿霉素5μg·g^(-1)干预治疗,检测血浆游离脂肪酸(FFA)、三酰甘油(TG)水平变化及对乳腺癌肝转移的影响。结果 (1)MTT结果表明,升清胶囊和表阿霉素药物血清干预后,MDA-MB-231细胞存活率显著降低,且呈浓度依赖性持续降低(P<0.05)。Transwell和划痕愈合实验结果表明,升清胶囊药物血清能够显著抑制细胞的侵袭和迁移能力。Western blotting结果表明,与对照组比较,升清胶囊药物可降低趋化因子CXCL12以及受体CXCR4蛋白表达水平(P<0.05),同时下调MMP-9和Bcl-2蛋白表达,且p-AKT水平降低(P<0.05)。(2)动物实验表明,升清胶囊可以显著降低脂代谢异常裸鼠TG、FFA水平(P<0.05),抑制乳腺癌肝转移。结论升清胶囊能够通过抑制趋化因子CXCL12-CXCR4和相关信号通路活性,下调血脂水平,抑制乳腺癌转移。

索拉菲尼对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的:探讨分子靶向药物索拉菲尼(Sorafenib)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用。方法:采用MTT法检测Sorafenib对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果:Sorafenib能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应;6μmol/L的Sorafenib处理HepG2细胞72小时,HepG2细胞周期中的S期比例明显升高,G0-G1期、G2-M期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:Sorafenib对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制其增殖和促进其凋亡。

胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺对肝癌细胞株生长的影响

目的:研究胃泌素及胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对肝癌细胞株的增殖的影响,并探讨肝癌患者非细胞毒内分泌治疗的可能性.方法:采用MTT比色分析法研究在不同浓度胃泌素和其受体拮抗剂丙谷胺的干预下,4种人肝癌细胞株的增殖情况,选取1种细胞株,用流式细胞仪分析在胃泌素及丙谷胺作用下的周期分布.结果:胃泌素在接近生理浓度下促进QGY-7701和Bel-7402的增殖,丙谷胺对胃泌素的作用有抑制作用.过量的胃泌素对QGY-7701有抑制效果.胃泌素对HepG2和SMMC-7721无明显促增殖作用.丙谷胺在高浓度下对所有细胞株皆有明显的抑制作用.胃泌素可促使Bel-7402G0/G1期细胞向S、G2/M期转化,加用丙谷胺后胃泌素的上述作用消失.结论:胃泌素对肝癌细胞株有促增殖作用及促进DNA合成,丙谷胺对其有抑制作用,可能成为肝癌内分泌辅助治疗的一个新的途径.

稳定表达DLC-1的淋巴瘤细胞株模型的建立

目的建立稳定表达肝癌缺失基因-1(DLC-1)的淋巴瘤细胞株。方法将DLC-1真核表达质粒转染人淋巴瘤细胞株Raji,G418筛选,对获得的Raji细胞株进行Western blot鉴定。结果酶切和测序鉴定DLC-1的cDNA片段正确插入pcDNA3.1质粒,Western blot鉴定转染后Raji细胞株DLC-1高表达。结论成功建立了稳定高表达DLC-1的淋巴瘤细胞株。