EFFECTS OF APATITE CERAMICS ON CELL GROWTHS AND DNA SYNTHESES IN HUMAN OSTEOBLAST LIKE CELL

Sintered strontium hydroxyapatite (Sr-HAP) and hydroxapatite (HAP) werekinds or apatite ceramics as substitutes of bone tissues.They should be safety to human body.Sr-HAP and HAP were co-cultured with human osteoblast like cells for 2, 4,and 6 days invitro. Effect of Sr-HAP and HAP on cell growth numbers with thymidine incorporationtest. In order to estimated cytotoxicities of materials,relative cell growth rate (RGR) werecalculated from data and score of cytotoxicties were assaied. Results showed cell growth numbers and rate of 3H-thymidine incorporation in Sr-HAP and HAP groups were the same asthat of blank control group. Values were increased with the increase of co-cultured time.There were no inhibition of cell growth and DNA syntheses in human osteoblast like cells. Accoding to RGR and score of cytotoxicity degree,all values were qurlified with sdandard ofbiomaterials. Results suggested these qurlified with sdandard or biomaterials. Results suggested these apatite ceramics had no obvious cytotoxicities.

人诱导多能干细胞成骨分化的研究进展

骨骼疾病如骨质疏松、骨关节炎等已成为亟待解决的人类健康问题,细胞治疗及组织工程技术被认为是理想的治疗方法之一。人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)具备体外长期自我更新和分化所有三胚层来源体细胞的独特功能,已成为目前最有前景的成骨细胞来源。因此,需要构建成分明确的hiPSCs体外成骨向诱导分化体系,获得符合临床应用要求的成骨样细胞。许多团队在促进hiPSCs向成骨分化成熟的直接路径和经间充质干细胞的间接路径方面取得了实质性的进展,本文针对这两类成骨分化路径及其应用现状进行综述,以期为骨再生技术提供参考。现有研究借助拟胚体法和单层诱导法,基于生物材料,构建可支持hiPSCs体外培养和成骨向诱导分化体系。然而,目前的研究主要存在成分不明确,分化效率低等局限,基于特定化合物严格调控的分阶段式和三维定向诱导体系是未来的主要研究方向。

成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体促进炎症微环境下人牙周膜干细胞成骨分化

背景:成骨诱导间充质干细胞来源外泌体具有较强的成骨分化能力,但是在炎症微环境下对人牙周膜干细胞成骨分化的影响尚不明确。目的:探究成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体在炎症微环境下对人牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法:收集离体牙并分离培养人牙周膜干细胞,成骨诱导3 d后提取外泌体。将人牙周膜干细胞分为4组:对照组加入成骨诱导培养基,外泌体组加入含5μg/mL外泌体的成骨诱导培养基,炎症模型和炎症模型+外泌体组以1μg/mL脂多糖处理24 h构建细胞炎症微环境,炎症模型组在脂多糖处理后加入成骨诱导培养基,炎症模型+外泌体组在脂多糖处理后加入含5μg/mL外泌体的成骨诱导培养基。通过茜素红以及碱性磷酸酶染色法检测各组人牙周膜干细胞的成骨分化能力;实时荧光定量PCR与免疫印迹法检测各组人牙周膜干细胞中Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)和wnt通路相关蛋白β-catenin的表达。结果与结论:(1)与对照组相比,炎症模型组碱性磷酸酶染色相对面积、矿化结节染色相对面积以及Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、OSX的表达量显著降低(P <0.05);(2)与炎症模型组相比,炎症模型+外泌体组碱性磷酸酶染色相对面积、矿化结节染色相对面积以及Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、OSX的表达显著升高(P <0.05);(3)与对照组相比,炎症模型组wnt通路相关蛋白β-catenin表达量显著增加(P <0.05);与炎症模型组相比,炎症模型+外泌体组β-catenin表达量显著降低(P <0.05)。结果表明,成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体可促进炎症微环境下人牙周膜干细胞的成骨分化,其作用机制可能与wnt/β-catenin信号通路有关。

人胎儿成骨细胞系hFOB1.19在骨组织工程中的应用

背景:现阶段广泛使用的动物成骨细胞模型的生物学特性与人细胞差距较大;原代人成骨细胞分离培养难提纯、培养代次有限;骨肉瘤细胞有异常生长的风险,都不能完全满足研究需求。1995年,有研究利用猴空泡病毒40转染了人胎儿四肢细胞,筛选得到一组具有分化为较早期成骨祖细胞——永生化人成骨细胞系hFOB1.19。目的:综述hFOB1.19的基本特性、培养方法及作为骨组织工程材料细胞模型的应用。方法:在中国知网、万方数据、SinoMed、PubMed、Web of Science、Medicine及Cochrane Library数据库中查找从1995年至2022年5月的相关文献,中文检索词为“人胎儿成骨细胞系1.19、人成骨细胞系、永生化细胞、猴空泡病毒40、骨组织工程、骨替代材料、生物材料研究”,英文检索词为“hFOB1.19,Human osteoblast cell line,Immortalized cells,Monkey vacuolating virus 40,Bone tissue engineering,Bone substitute materials,Biomaterials research”,筛选后得到73篇文献进行综述。结果与结论:(1)hFOB1.19在形态、表型、核型、生物学特性及分化潜能方面与体内成骨细胞高度相似,拥有快速且稳定的生长能力。(2)hFOB1.19已广泛应用于细胞黏附、增殖、分化、矿化、基因表达及蛋白合成方面,以检验骨组织工程材料的生物相容性及成骨性能。(3)hFOB1.19能够弥补动物细胞来源不同、骨肉瘤细胞异常增殖可能、原代成骨细胞分离难及传代次数少的缺点,在骨组织工程实验应用中性能稳定,增殖良好,但因培养条件特殊,细胞传代次数有限及生物安全性等方面的问题,目前在骨组织工程材料领域应用尚且不够广泛。(4)当前,骨组织工程材料发现速度快,但开发过程中缺乏系统全面的研究体系及统一的研究标准,文章总结hFOB1.19在不同研究中的应用,旨在为研究者们提供方法选择引导并推动相关标准完善。

人成骨细胞体外培养、鉴定及护骨素表达的研究

目的 用酶消化法从正常人松质骨中分离成骨细胞 ,进行体外培养和功能鉴定 ,观察用 1 7β 雌二醇 (1 7β E2 )和雌激素受体拮抗剂ICI1 82 780处理后 ,成骨细胞中护骨素 (OPG)的表达变化。方法 用胰酶 -胶原酶消化法从正常人松质骨中分离培养成骨细胞 ,I型胶原染色用VanGie son法 ,钙化结节用茜素红染色 ,用钙钴法显示成骨细胞中碱性磷酸酶的表达 ,骨钙素和OPG基因的表达用RT -PCR检测 ,OPG蛋白用WesternBlot检测。结果 用酶消化法分离的人成骨细胞 ,在体外培养时可维持合成I型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素 ,并形成钙化结节等功能 ;体外培养的人成骨细胞表达OPG ,1 7β E2 上调其表达 ,并能被雌激素受体拮抗剂ICI1 82 780阻断。结论 用酶消化法进行人成骨细胞培养 ,方便易行 ,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用 ;1 7β E2 上调OPG表达 ,而绝经后雌激素缺乏时 ,OPG的表达相应减少 ,可能是骨质疏松的发病因素之一。

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅴ.不同生长因子交互应用对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

目的：考察将转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）及血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ）４种生长因子两两交互应用对人胚成骨样细胞增殖与分化的影响。方法：在不同的实验间期检测成骨样细胞３Ｈ－胸腺嘧啶脱氧核苷、３Ｈ－脯氨酸的掺入量和碱性磷酸酶的含量。结果：ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦ、ＩＧＦ－Ⅱ和ＴＧＦ－β４种生长因子交互联合应用，均对促进体外培养的人胚成骨样细胞的增殖和分化功能具有协同作用。结论：具有协同作用的生长因子联合应用，可提高其促进骨形成的生物效应。

阿仑膦酸钠对人成骨样细胞增殖和分化的影响

目的 :研究阿仑膦酸钠对人成骨样细胞增殖和分化的影响。方法 :进行OS 732人成骨样细胞生长曲线的绘制、MTT测定、形态学观察、碱性磷酸酶 (ALP)测定、ALP染色等。结果 :①d3时 ,与对照组相比 ,10 - 6 mol·L- 1 浓度组的细胞数目增加 2 2 .6 % ;而 10 - 5mol·L- 1 浓度组的细胞数目明显低于对照组。d 6时 10 - 6 ,10 - 7,10 - 8mol·L- 1 三种浓度组细胞数目比对照组分别增加 2 4 .7% ,2 4 .7%和 31.0 %。 10 - 5mol·L- 1 浓度组的细胞数目仍明显低于对照组。MTT测定得到了类似的结果。②加药后d4 ,10 - 6 ,10 - 7,10 - 8mol·L- 1 三种浓度组的细胞与空白对照组相比细胞数目多、形态大而规则 ,染色质深而致密 ,核质比小。③ALP染色结果显示 ,10 - 6 ,10 - 7mol·L- 1 浓度组细胞ALP颗粒染色明显深于对照组 ,并且ALP颗粒在胞质中分布均匀。ALP的定量测定结果表明 ,10 - 6 ,10 - 8mol·L- 1 浓度组细胞ALP水平明显高于对照组。结论 :阿仑膦酸钠对体外培养的OS 732人成骨样细胞具有促增殖和分化作用 ,并且这种作用具有最适合的浓度。

MT01对牙龈卟啉单胞菌感染成骨细胞MG63中Ⅰ型胶原mRNA表达的促进作用及其意义

目的:检测单链寡脱氧核苷酸MT01作用下牙龈卟啉单胞菌(Pg)感染成骨细胞MG63中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨向分化的影响。方法:体外培养的MG63细胞分为空白对照组、MT01组、Pg组和MT01+Pg组。按分组情况进行相应处理,加入MT01(质量浓度1mg·L-1),以1mg·L-1PBS作对照共孵育3h后,以100∶1的感染复数(MOI)加入Pg悬液共培养。4组细胞分别孵育2、4、6、8、12和24h后采用RT-PCR法检测MG63细胞中ColⅠmRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,MT01和MT01+Pg组MG63细胞中ColⅠmRNA表达水平在2和4h时无明显变化(P>0.05),8、12和24h时MT01组细胞中ColⅠmRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与Pg组比较,2和4h时MT01+Pg组细胞中ColⅠmRNA呈低表达,6、8、12和24h时ColⅠmRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:MT01上调感染状态下MG63细胞中ColⅠmRNA的表达水平,MT01可促进感染状态下成骨细胞成骨向分化。

利用RNAi技术稳定抑制ERβ表达的人成骨细胞株hFOB1.19细胞模型的建立

目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术稳定抑制雌激素受体β(Estrogen receptorβ,ERβ)表达建立人成骨细胞株hFOB 1.19细胞模型的可行性。方法:设计3种特异性ERβ-shRNA,体外合成后将其克隆人pRNAT-H1.4/Retro逆转录病毒质粒中,并包装成逆转录病毒;ERβ-shRNA逆转录病毒瞬时感染hFOB l.19细胞后,通过流式细胞仪检测感染效率,并使用半定量RT-PCR和Western blot检测对ERβmRNA和蛋白表达的抑制效率;然后取ERβ抑制效率最高的hFOB l.19细胞,通过抗性筛选,将得到稳定感染的细胞扩大培养,再通过半定量RT-PCR和Western blot检测ERβ稳定抑制的效率;并应用MTT法检测ERβ稳定抑制后对细胞增殖的影响。结果:成功构建了3种ERβ-shRNA逆转录病毒载体;流式细胞仪检测结果显示,瞬时感染效率均高达70%以上;ERβ-shRNA-1、ERβ-shRNA-2、ERβ-shRNA-3逆转录病毒载体对hFOB l.19细胞中ERβmRNA的抑制率分别为(54.56±0.95)%、(69.60±1.12)%、(76.49±1.15)%,蛋白的抑制率分别为(59.21±4.44)%、(78.35±2.00)%、(85.60±2.66)%(均P<0.05);成功筛选出稳定感染ERβ-shRNA-3逆转录病毒载体的hFOB l.19细胞,ERβmRNA和蛋白的抑制率分别为(83.23±2.45)%和(93.11±0.57)%(均P<0.05),MTT法检测显示ERβ稳定抑制后对细胞的增殖没有明显影响(P>0.05)。结论:利用RNAi技术可成功建立ERβ稳定抑制的hFOB l.19细胞模型。

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅰ.TGF-β对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

在对人胚成骨样细胞分离培养的基础上，进一步探讨不同剂量转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对人胚成骨样细胞ＤＮＡ、胶原蛋白和碱性磷酸酶合成的影响。结果表明：ＴＧＦ－β对体外培养的人胚成骨样细胞ＤＮＡ合成有抑制作用，对胶原蛋白和碱性磷酸酶合成有促进作用。这两方面的作用在ＴＧＦ－β０．０１～１ｎｇ／ｍｌ间呈剂量依赖性，１ｎｇ／ｍｌ时的作用达到最强。本研究提示ＴＧＦ－β在骨形成中的主要作用可能在于介导机体系统因素对骨细胞的作用。

生长因子网络调节对骨形成作用的研究——Ⅵ.多种生长因子联合应用对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

研究转化生长因子（（ Ｔ Ｇ Ｆβ）、胰岛素样生长因子Ⅱ（ Ｉ Ｇ ＦⅡ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）及血小板衍生性生长因子（ Ｐ Ｄ Ｇ Ｆ）等四种生长因子中，三种生长因子交互应用和四种生长因子联合应用对人胚成骨样细胞增殖与分化的影响。在不同的实验期间检测成骨样细胞３ Ｈ胸腺嘧啶脱氧核苷（３ Ｈ Ｔｄ Ｒ）、３ Ｈ脯氨酸（３ Ｈ Ｐｒｏｌｉｎｅ）的掺入量和碱性磷酸酶的含量。结果显示：三种和四种生长因子交互联合应用，对人胚成骨样细胞增殖与分化有明显的促进作用。预示具有协同作用的生长因子联合应用，可提高其促进骨形成的生物学效应，可能成为临床治疗骨疾病和修复骨缺损的一种新途径。

MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响

目的:通过检测MT01对牙周致病菌Pg感染的成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子基因表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨分化作用的影响。方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1mg/L的特定序列寡核苷酸MT01和等体积PBS,共孵育3h后,加入感染复数MOI=100∶1的Pg菌悬液(对照组加等体积PBS)。即实验分为:MT01+Pg、MT01、Pg和空白对照4组,Realtime PCR检测2、4、6、8、12、24h特异性成骨相关因子Runx2,SP7mRNA的表达。结果:在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内成骨相关因子Runx2,SP7mRNA的表达,但在不同时间点,MT01调控Runx2,SP7mRNA表达上调的能力存在差异。结论:MT01可以促进牙周致病菌感染下的成骨细胞的成骨向分化。

人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化的研究

目的建立人胚永生化成骨细胞系(hFOB1.19)的恶性转化模型,作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型。方法通过克隆形成率实验确定N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)对hFOB1.19细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate,TPA)作促进剂对hFOB1.19细胞进行转化,90d后通过细胞形态、DNA含量分析、软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度。结果经MNNG和TPA协同处理hFOB1.19细胞90d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制;高倍体细胞数,转化组(81.08%)高于对照组(55.03%);软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤。结论模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了人胚永生化成骨细胞系的恶性转化模型。

RNA干扰抑制雌激素受体α亚基对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

目的探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogenreceptorαsubunitERα)后,对17β雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响。方法利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA,体外合成siRNA基因,并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer41CMV。以脂质体法转染ERαsiRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中,鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERαsiRNA转染的MG63细胞或未经ERαsiRNA转染的MG63细胞,RTPCR法检测OPGmRNA的表达水平。结果双酶切法鉴定重组质粒后,RTPCR法鉴定ERαsiRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达。不同浓度的17βE2上调MG63细胞OPGmRNA的表达,其中以10-7mol/L的作用最强。但经ERαsiRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后,17βE2上调MG63细胞OPGmRNA表达的作用消失。结论17βE2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达。

基于成分群动态变化探索药材质量优劣判断方法初步研究

目的:探索评价药材质量优劣的新方法。方法:以怀牛膝药材为研究对象,采用HPLC法构建18批怀牛膝药材的化学成分群图谱;采用MTT法测定各批怀牛膝药材相应的成骨细胞增殖活性,由此构建活性数据库;利用偏最小二乘法(PLS)对药材指纹图谱与成骨细胞增殖活性的相关性进行分析;对分析得到的YZL值进行正态拟合,并界定判定药材质量优劣的YZL值区间;并以另外10批药材对该判定方法和YZL区间值进行验证。结果:从测定得到的18批怀牛膝药材的指纹图谱中提取得到16个共有峰;以PLS法建立了药材共有峰峰面积与活性间的回归模型,得到相应的标准化回归系数,由此判断出怀牛膝指纹图谱的16个共有峰中1、2、4、5、6、7、11、13、15、16号色谱峰与活性呈正系数相关,其余各峰与活性呈负系数相关;基于回归模型相应标准化回归系数的正负性,经多重综合分析,提炼出YZL值(正、负系数相关峰峰面积和之比值);通过对YZL值进行正态拟合并界定,得到当YZL值≥0.9639时,该怀牛膝药材为优品;当YZL值≤0.6112时,该怀牛膝药材为劣品;该判定方法得到了验证。结论:PLS法适用于怀牛膝指纹图谱与成骨细胞增殖活性的相关性分析;YZL值可用于判定和划分怀牛膝药材质量的优劣;当YZL值≥0.9639时怀牛膝药材为优品,当YZL值≤0.6112时怀牛膝药材为劣品;验证性判断结果支持本文所建立的药材质量优劣评价新方法。

活性维生素D促组织工程骨血管化

目的探讨以1,25-(OH)2D3为活性因子,与人骨髓间质成骨细胞(human marrow stromal osteoblast,hMSO)、脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,hUVEC)、珊瑚羟基磷灰石人工骨(coral hydroxyapatite,CHA)联合构建组织工程骨的异位成骨能力和体内快速血管化能力。方法体外分离、培养hMSO和hUVEC。hMSO以5×105/ml,hUVEC以2.5×105/ml按2∶1比例接种至经1,25-(OH)2D3处理过的CHA上,为实验组;相同比例hMSO和hUVEC接种于单纯CHA作为对照组。体外培养3d后,18只裸鼠背部皮下其中6只双侧均植入实验组组织工程骨1块,6只双侧均植入对照组组织工程骨1块,余6只植入实验组及对照组组织工程骨每侧1块。术后4、8、12周后取材,行大体观察、常规组织学、扫描电镜观察,并行植入物成骨的定量判断和新生血管定量分析。结果组织学观察可见,4周时,各组原始类骨组织均长入支架材料内部,实验组有大量不成熟骨组织伴随众多微血管出现;8周,骨组织成熟与微血管相伴出现;12周,各组均有成熟骨组织出现,实验组有典型骨单位。对照组在各时间点微血管量均少于实验组。扫描电镜观察:4周,实验组大量细胞外基质将细胞包埋,材料表面可见大量微血管并有部分穿入材料内部;对照组虽然细胞外基质也较丰富,但微血管量少;8周,实验组部分材料表面出现了束状条索样的类骨质结构,细胞外基质丰富,可见大量微血管相伴出现;对照组微血管量少,骨组织成熟度亦差。植入物成骨的定量判断,8周实验组为3.10±0.52,对照组为2.30±0.59;12周实验组为4.63±0.55,对照组为3.53±0.62;两时间点两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。新生血管定量分析,4周实验组为28.74%±7.81%,对照组为19.52%±4.57%;8周实验组为24.66%±7.38%,对照组为17.84%±5.22%;两时间点两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1,25-(OH)2D3作为活性因子通过加强hMSO与hUVEC之间的相互作用,增强了构建的组织工程骨的异位成骨能力和快速血管化能力。

利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG63 OPG及TNFα表达的影响

目的研究利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG63护骨素(OPG)及肿瘤坏死因子α(TNFα)表达的影响,以阐明利塞膦酸钠发挥骨保护作用的机制。方法以不同浓度(10-10molL;10-9molL;10-8molL;10-7molL)的利塞膦酸钠干预MG63细胞72h;ELISA法测定细胞条件培养液中OPG及TNFα的含量。结果利塞膦酸钠可下调MG63细胞TNFα的表达;上调OPG的表达;并提高碱性磷酸酶(ALP)活性。结论利塞膦酸钠可通过调节成骨样细胞MG63OPG、TNFα的表达,从而发挥其抗骨吸收的作用。

雌激素膜快速效应对人成骨样细胞MG63 OPG mRNA快速表达水平的影响

目的探讨17β-雌二醇(E2)膜快速效应对人成骨样细胞MG63的OPG mRNA快速表达水平影响。方法采用RT-PCR法分析经E2快速作用后的MG63细胞中OPG mRNA的表达水平。结果E2膜快速效应能诱导人成骨细胞MG63 OPG mRNA表达水平出现一个快速增高现象,其表达高峰时间为E2作用后的10 min左右,而且这一现象能被G蛋白藕联抑制苏拉明所抑制。结论而E2诱导的人成骨样细胞MG63中OPGmRNA表达水平的快速增高,可能与雌激素启动了雌激素膜受体介导的G蛋白藕联受体调节的磷脂酶C/腺苷酸环化酶通路有关。

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅱ.IGF-Ⅱ对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

利用体外分离培养人胚成骨样细胞，加入不同剂量胰岛素样生长因子－Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ），从时间－效应和剂量－效应两个方面考察ＩＧＦ－Ⅱ对人胚成骨样细胞增殖与分化的影响。研究结果表明，ＩＧＦ－Ⅱ的促骨形成效应显著，它对体外培养的人胚成骨样细胞ＤＮＡ、胶原蛋白和碱性磷酸酶合成均有明显的促进作用，其作用亦呈剂量与效应相依赖的关系，在４个含量组中，１０ｎｇ／ｍｌＩＧＦ－Ⅱ对成骨样细胞的作用最强。ＩＧＦ－Ⅱ是一种对成骨细胞作用较全面的生长因子。

人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的研究

目的建立人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的模型,作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型。方法通过克隆形成率实验确定N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(N-m ethyl-N-′n itro-N-n itrosoguan id ine,MNNG)对HOS TE85细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate,TPA)作促进剂对其进行转化,66 d后通过细胞形态、软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞转化程度。结果经MNNG和TPA协同处理HOS TE85细胞66 d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制;转化细胞凝集性增强;软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤。结论模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了HOSTE85的恶性转化模型。