Improvement of Atrophic Acne Scar and Skin Complexity by Combination of Aqueous Human Placenta Extract and Mesenchymal Stem Cell Mesotherapy

Atrophic scars, a permanent complication of severe acne, have negative effect on psychology in adolescent. The treatment of atrophic scar is depended on types of scar and it is difficult to improve by a single treatment. Mesenchymal stem cell is a scientific approval for surgery scar treatment and wound healing. We present a case report of female presented with atrophic acne scar distributed on both cheeks. The case aims to prove that the combination of MSCs and aqueous human placenta extract (RGF&#174) contained bioactive therapeutic molecules obviously promoted the improvement of skin scar to reach the optimal outcomes. We first found that MSCs-contained human placenta extract solution combination subcision improves the atrophic acne scar and skin complexity by enhancement of skin cell regeneration.

Case Report: Improvement of Long Lasting Hyperpigmentation by Aqueous Human Placenta Extract (Reju Growth Factor, RGF&#174) Treatment

Hyperpigmentation is a common skin problem in a woman. Prolonging topical use of skin whitening may cause hyperpigmentation such as ochronosis whose condition is a challenge for treatment. An aqueous human placenta extract (RGF&#174) contains bioactive therapeutic molecules. There is evidence of human placenta extract showing that melanin synthesis is inhibited by placenta extract in melanocytes. We first reported the case of the hyperpigmentation improvement following face skin mesotherapy human placenta extract treatment.

紫河车提取物治疗儿童白癜风的临床对照研究

目的:观察紫河车提取物、人胎盘组织液及人胎盘脂多糖治疗儿童白癜风的临床疗效。方法:采用紫河车提取物、人胎盘组织液以及人胎盘脂多糖外用联合红外线照射治疗儿童白癜风,早晚各1次,每次红外线照射20min,每隔5min搽药水1次进行治疗,观察其疗效。结果:紫河车提取物有效率为78.50%,显效率38.32%;人胎盘组织液有效率47.06%,显效率23.53%;人胎盘脂多糖有效率57.14%,显效率38.10%,3种药物的总有效率之间有统计学差异(P<0.05),紫河车提取物组疗效明显优于其它两种药物。此外,紫河车提取物治疗头皮部白斑的有效率高达89.66%,明显优于其它各部位(P<0.05)。结论:3种药物联合红外线照射对儿童白癜风有较好疗效,且紫河车提取物的临床疗效明显优于人胎盘组织液和人胎盘脂多糖。

人胎盘中胶原蛋白的提取和表征

采用碱-酶结合法以人胎盘为原料提取胶原蛋白,并使用原子力显微镜(AFM)、差示扫描量热仪(DSC)、圆二色光谱(CD)和傅立叶变换红外光谱(FTIR)对所得胶原蛋白产品进行表征。结果表明:此工艺路线的胶原蛋白得率高,达到0.102%;提取时间由48 h以上减少到24 h以内,而且所得胶原蛋白分子完整地保留了其螺旋纤维结构。此法是从人胎盘中提取胶原蛋白的一种行之有效的方法。

人胎盘提取物抑制结肠癌细胞的增殖及迁移

目的:探讨人胎盘提取物(human placenta extracts,HPE)对人结肠癌细胞株Caco-2及SW480增殖和迁移能力的影响。方法:用不同质量浓度HPE处理Caco-2和SW480细胞,CCK-8、Ki-67、CFSE法检测细胞增殖活性的变化,Annexin-V/PI及DAPI细胞核染色检测HPE对细胞周期及凋亡的影响,实时荧光定量PCR法检测HPE对细胞中BAX、CDK2及Cyclin A2基因表达的影响,划痕实验检测对细胞迁移能力的影响。建立裸鼠结肠癌移植瘤模型,随机分组分别单独或联合给予HPE和5-氟尿嘧啶(5-Fu),观察裸鼠移植瘤的生长状况。结果:HPE处理组Caco-2及SW480细胞增殖能力低于对照组[(0.82±0.01)vs(0.96±0.02),P<0.01;(0.90±0.03)vs(0.96±0.02),P<0.05],细胞凋亡率高于对照组[(20.47±1.32)%vs(11.01±3.82)%,P<0.01;(20.70±5.19)%vs(8.00±2.69)%,P<0.05];HPE处理组细胞胞质减少、核固缩、BAX基因表达增加[(3.23±1.90)vs(1.00±0.00),(2.25±0.55)vs(1.00±0.00),均P<0.05];细胞停留在细胞DNA复制S期,出现凋亡峰;Caco-2细胞CDK2及Cyclin A2基因表达降低(P<0.05);并且细胞的迁移能力低于对照组[(0.17±0.29)vs(1.50±0.50)mm,P<0.05]。HPE处理组裸鼠移植瘤体积小于对照组、生存率高于单用5-Fu组(P<0.05)。结论:HPE在体内外通过干预结肠癌细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,可能对抑制肿瘤细胞增殖有一定作用。

人胎盘提取物对成骨细胞增殖、分化、矿化及骨愈合的实验研究

目的研究人胎盘提取物(human placenta extract,HPE)对体外成骨细胞的增殖、分化、矿化的影响,进一步了解HPE促进骨折愈合的机理。方法用成骨细胞系(h Fob1.19细胞),通过CCK-8、流式细胞术、Real-Time PCR法分别检测不同剂量的HPE(0、18μl、100μl、180μl、360μl)在不同时间对成骨细胞增殖的影响;通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)观察不同剂量的HPE和Rhbmp-2(0、18μl HPE、100μl HPE、100μl Rhbmp-2、100μl HPE+100μl Rhbmp-2)在不同时间对成骨细胞分化的影响;通过茜素红染色检测不同剂量的HPE(0、50μl、100μl、200μl)在不同时间对成骨细胞矿化的影响,系统研究体外HPE对成骨细胞增殖、分化、矿化的影响及其促进骨愈合的可能机制。结果空白对照组和加入不同剂量的HPE各组对成骨细胞的增殖、分化未观察到明显的影响(P>0.05),而加入不同剂量的HPE(50μl、100μl、200μl)各组对成骨细胞的矿化比空白对照组有明显促进作用(P<0.01)。结论体外HPE对成骨细胞的增殖、分化无明显影响,对成骨细胞的矿化有明显促进作用;HPE促进成骨细胞矿化可能是促进骨折愈合机制。

人胎盘提取组织凝血活酶及其质量评价

利用人胎盘抽提得组织凝血活酶，并对其质量进行了评价，同时初步应用于临床。结果显示：用含表面活性剂的抽提剂粉碎抽提的效果较好，所得组织凝血活酶重复性、灵敏度、稳定性均令人满意；与上海荣盛生物制品厂生产的ＰＴ试剂盒比较相关性好：Ｙ＝２．７５＋０．９０５ｘ，ｒ＝０．９２５３，经相关系数ｔ检验，ｔ＝２６．５４６９，Ｐ＜０．００１，呈直线正相关。临床初步应用显示：肝病及抗凝治疗等病人ＰＴ时间明显延长，９３例正常人ｘ＝１１．３秒，ｓ＝０．９６秒，正常范围９．４２－１３．１８秒。

酶解法和超滤法获得羊胎盘提取物对人脐静脉内皮细胞增殖影响差异

目的探讨超滤法和酶解法获得的羊胎盘提取物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。方法采用Tricine-SDS-PAGE电泳对其分子量进行测定;通过MTT法检测其对HUVEC增殖的影响;应用流式细胞技术检测其对HUVEC细胞周期的影响。结果 Tricine-SDS-PAGE电泳显示,超滤法获得的胎盘提取物由4条主要条带组成,分别为7kDa、15kDa及大于42kDa的两条带,酶解法获得的胎盘提取物主要条带为1.6kDa-42kDa的弥散条带及大于42kDa的5条带;酶解法提取物比超滤法增加了200-230nm的吸收峰。MTT法显示两种方法获得的羊胎盘提取物作用在HUVEC细胞72h后,对细胞增殖具有促进作用,并显现出浓度依赖性。流式细胞仪检测结果表明,酶解法产物作用下,HUVEC细胞周期中S期增加比例高于超滤法组。结论超滤法和酶解法获得的羊胎盘提取物对HUVEC细胞均有增殖促进作用,其中酶解法制备的胎盘提取物对HUVEC增殖促进作用强于超滤法。

测定负载人胎盘提取物的新型纳米凝胶支架系统

目的 介绍一种新型复合纳米凝胶负载入胎盘素提取物过程.方法 取10 mg异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸（IKVAV）、自组装多肽分子（RAD16）、FGL多肽两亲性分子（FGL-PA）、精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸合成多肽（RGD）联合制作理想纳米凝胶载体,纳米纤维凝胶稀释O、50、100倍后检测实验过程.结果 纳米纤维凝胶的最佳配比：IKVAV∶ RGD∶ FGL-PA=1∶1∶1.人胎盘提取液纳米纤维凝胶的平均粒径为212.8 nm,缓释时间达4d以上.包裹人胎盘提取液纳米纤维中人胎盘提取液和原料药结构保持基本完整.结论这种新型纳米复合材料极可能为人胎盘素提取物提供理想的药物运载系统.

不同干燥与提取方式处理的人源胎盘防治贫血活性差异研究

目的评价经不同干燥与提取方式处理后的人源胎盘样品对斑马鱼贫血模型的影响。方法取健康产妇新鲜胎盘,经−40℃冷却后于真空冷冻干燥机中冷冻干燥,研磨成粉,制成胎盘冻干粉;取健康产妇的新鲜胎盘,于90℃热风循环烘箱中烘干,研磨成粉,制成胎盘烘干粉。胎盘冻干粉或烘干粉分别经胰蛋白酶酶解提取、梯度溶剂(依次为水、50%乙醇水、无水乙醇、二氯甲烷)提取。发育至56 h(56 hpf)的健康野生型AB系斑马鱼分为对照组、模型组、给药组,对照组给予斑马鱼养殖水,模型组给予0.1μg·mL^(−1)苯肼溶液制备贫血模型,给药组给予苯肼与胎盘冻干粉或烘干粉各提取样品,样品质量浓度分别为10、20、50、100μg·mL^(−1),培养至3 dpf,采用O-dianisidine染色法对斑马鱼进行红细胞染色。结果与对照组比较,模型组红细胞染色积分吸光度显著下降(P<0.001)。与模型组比较,胎盘冻干粉酶解样品100μg·mL^(−1)组,水提样品10、20、50、100μg·mL^(−1)组,醇提样品20、100μg·mL^(−1)组,50%醇提样品10、20μg·mL^(−1)组,二氯甲烷提取样品10、20、50、100μg·mL^(−1)组红细胞染色积分吸光度显著增加(P<0.05、0.001);胎盘冻干粉酶解样品20μg·mL^(−1)组,水提样品10、20μg·mL^(−1)组,醇提样品20、50、100μg·mL^(−1)组,二氯甲烷提取样品50、100μg·mL^(−1)组红细胞染色积分吸光度显著增加(P<0.05、0.01、0.001)。经酶解、水提取及二氯甲烷提取的胎盘冻干粉样品和经水提取、醇提取及二氯甲烷提取的胎盘烘干粉样品作用呈浓度相关性,其中冻干粉水提取样品100μg·mL^(−1)效果最佳,染色后的红细胞积分吸光度达到对照组的94.77%。结论人源胎盘样品处理方式可优先选择冻干技术结合水提取方式。

基于斑马鱼模型不同提取方法人源胎盘冻干粉抗抑郁活性及作用机制研究

目的明确人源胎盘冻干粉是否具有抗利血平诱发斑马鱼抑郁症的活性,比较不同提取方法胎盘冻干粉抗抑郁活性并探索其作用机制。方法将6月龄野生型斑马鱼AB随机分为8组:对照组、模型组、丁螺环酮(阳性药,3 mg·L^(-1))组和胎盘冻干粉酶解、水提、50%醇提、醇提、二氯甲烷提(均为5mg·L^(-1))组,每组12条。除对照组外,各组以利血平处理20 min造模,而后更换相应含药养鱼用水,至14 d,每天换水。14 d时用Zebrabox斑马鱼行为分析仪对各组斑马鱼进行新型水槽测试,分析其行为变化。收集鱼脑,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测抑郁、神经调控相关基因(bdnf、pomc、hcrt、mao、nf-κb、pparγ)的mRNA表达;试剂盒法检测氧化应激相关超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与对照组比较,模型组斑马鱼进入新型水槽上部次数显著减少(P<0.001),上部游动距离及时间比例均显著减少(P<0.001);与模型组比较,丁螺环酮、胎盘冻干粉酶解物组斑马鱼进入上部次数显著增加(P<0.05),上部游动距离及时间比例均显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组中的bdnf、pomc、hcrt和mao基因表达显著上调(P<0.01、0.001),nf-κb和pparγ基因表达显著下调(P<0.05、0.01);与模型组比较,经不同提取方法胎盘冻干粉处理后bdnf、pomc和mao基因表达显著下调(P<0.05、0.01、0.001),酶解、水提、醇提组hcrt mRNA水平显著降低(P<0.05、0.001),酶解、水提组nf-κb mRNA水平和酶解组pparγmRNA水平显著上调(P<0.01)。与对照组比较,模型组CAT活性显著升高(P<0.001),SOD活性升高,但没有统计学意义;与模型组比较,经不同提取方法胎盘冻干粉处理后CAT活性显著降低(P<0.001),SOD活性有不同程度的降低。结论人源胎盘冻干粉具有抗利血平诱发斑马鱼抑郁症的活性,且胎盘冻干粉酶解抗抑郁症活性最好,作用机制可能与改善氧化应激状态有关。