hTRT反义基因转染对肝癌细胞端粒酶亚单位及细胞周期的影响

目的 探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位 (Humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)反义基因转染对HepG2 肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响。方法 采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2 细胞(HepG2 S)以及hTRT反义基因转染的HepG2 细胞 (HepG2 AS)的细胞周期 ,采用RT PCR法检测上述细胞hTRT、端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白 1(TP1)以及c myc和bcl 2基因的变化 ,同时采用Westernblot检测hTRT蛋白质的变化。结果 HepG2 AS出现G0 G1 期阻滞 ,增殖指数增加 ,凋亡率亦明显增加 ,进一步研究发现 ,HepG2 AS端粒酶亚单位hTRT在蛋白质和mRNA水平均表达减少 ,而TP1、hTR无明显变化 ,bcl 2和c mycmRNA的表达亦明显下调。结论 hTRT反义基因不仅可以下调HepG2 细胞hTRTmRNA和蛋白质的表达 ,而且可以下调c myc、bcl 2mRNA的表达 ,从而一方面降低端粒酶活性 ,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率 。

非小细胞肺癌中端粒酶催化基团mRNA表达的临床意义及其与P53的相关性

目的:研究非小细胞肺癌与正常肺组织穿刺标本中端粒酶催化基团mRNA表达与肿瘤分期与分级关系,探讨其在非小细胞肺癌早期诊断中的临床意义。观察肿瘤抑制基因P53与hTRT mRNA表达的关系。方法:采用原位杂交技术检测非小细胞肺癌与正常肺组织中端粒酶催化基团mRNA表达;用免疫组化方法检测非小细胞肺癌的P53蛋白表达。结果:30例非小细胞肺癌中25例端粒酶催化基团mRNA表达阳性,阳性率83.3%;对照组20例中无端粒酶催化基团mRNA阳性表达,阳性率0%。非小细胞肺癌中,hTRT mRNA表达与P53蛋白表达呈正相关(r=0.577,P<0.01)。结论:端粒酶催化基团mRNA在非小细胞肺癌中有异常阳性表达,表达与肿瘤分期与分级有关。与肿瘤病理分型无关。P53突变可能与非小细胞肺癌hTRT基因转录激活有关。

小肝癌与癌旁组织中端粒酶检测的意义

目的 :研究小肝癌与癌旁组织中端粒酶蛋白hTRT基因。方法 :用原位杂交、免疫组化方法检测小肝癌中hTRT基因与PCNA的表达。结果 :hTRT阳性信号在癌中检出率为 80 % (16 /2 0 ) ,呈异质性分布 ,并在细胞中有两种阳性形式 :膜型和浆型。hTRT阳性信号强度、分布与癌细胞PCNA阳性强度呈密切相关 (P <0 .0 1)。癌旁肝硬变和肝炎肝硬变中出现弱阳性信号 ,其检出率分别为 14.7% (1/7)和 2 5 % (1/4 ) ,癌中hTRT阳性信号显著高于癌旁非癌组织 (P <0 .0 1)。癌旁不典型腺瘤样增生病灶中 ,hTRT阳性信号的检出率为6 6 .6 7% (2 /3) ,接近于癌中 ;在癌中坏死组织和癌旁相对正常的肝组织中未检出hTRT阳性信号。癌中hTRT阳性信号强度与癌分化、与是否同时伴有肝病情况无关。结论 :小肝癌中hTRT阳性信号特异性增强 ,与肝细胞增殖有关 ,端粒酶活化是肝癌发生的早期事件 。