胎盘芯片及其在生殖医学领域的研究进展

胎盘是连接母体与胎儿的重要器官,在孕期发挥着物质交换、激素分泌、免疫调控和屏障防御等多种功能,对维持胎儿正常发育起着关键作用。胎盘功能障碍可能会导致多种妊娠并发症,如先兆子痫、胎儿生长受限和早产等,增加母胎发病率和死亡率。尽管传统的二维细胞培养和动物模型已被用于研究胎盘生理或病理,但仍存在一定局限。器官芯片是一种新型体外模型系统,它将工程学技术与生物学策略相结合,能够在体外模拟人体组织器官的关键结构和功能特点,在组织器官发育、疾病建模和药物评价等方面具有广泛的应用潜力。本文概述了目前胎盘芯片模型的构建及其在妊娠相关疾病、发育毒性评估和母胎界面药物转运等应用中的研究进展。依据人体胎盘发育过程和组织微环境特点,重点介绍了胎盘芯片模型的构筑原理和关键要素,如多细胞组分、胎盘屏障、氧张力、流体剪切力和细胞外基质微环境等,以及其他工程策略包括类器官、生物打印和水凝胶材料等,为实现仿生胎盘模型的体外构建提供了新的思路。此外,本文还讨论了现有胎盘模型在复杂性和功能成熟度等方面面临的局限和挑战,最后展望了未来发展先进的体外胎盘模型并推动其在生殖医学领域的应用前景。

紫河车的活性成分、药理作用及临床应用研究进展

紫河车是一种名贵的中药药材,中医学很早就有其作用的记载,并将其应用于临床实践中。紫河车的生物活性成分丰富,含有激素、细胞因子、氨基酸、酶及酶抑制因子、微量元素、维生素等,现代药理学研究证明,其有调节免疫、补血、抗肿瘤、抗溃疡、强心、提高抗耐氧能力、减轻疲劳、改善睡眠、延缓衰老、促进子宫、阴道、乳腺、睾丸发育等药理作用,且无明显毒副作用,在临床应用较为广泛,常被应用于不孕不育、先兆流产、更年期综合征、慢性阻塞性肺病、肝炎、肝硬化、难治性溃疡、白癜风、肿瘤等疾病的治疗中,均收到了较为满意的治疗效果。综述有关紫河车生物活性成分、药理作用及临床应用的研究进展,为紫河车在医药及保健等方面的应用提供理论依据,为进一步研究紫河车的药理作用及临床应用提供参考依据。

血清β-hCG、AFP对前置胎盘合并胎盘植入的诊断价值

目的探讨血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、甲胎蛋白(AFP)对前置胎盘合并胎盘植入的诊断价值。方法选取84例2020年5月至2022年5月于该院就诊的前置胎盘患者作为研究对象,根据临床及产后病理检查结果分为植入组(38例)、无植入组(46例),比较两组及不同胎盘植入类型患者产前血清β-hCG、AFP水平及产前超声征象评分,分析血清β-hCG、AFP水平与胎盘植入类型及产前超声征象评分的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析产前血清β-hCG、AFP水平对前置胎盘合并胎盘植入的诊断价值。结果与无植入组比较,植入组产前血清β-hCG、AFP水平及超声征象评分较高(P<0.05);不同胎盘植入类型患者产前血清β-hCG、AFP水平比较:粘连性胎盘<植入性胎盘<穿透性胎盘,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05);产前血清β-hCG、AFP水平与超声征象评分、胎盘植入类型具有相关性(P<0.05);产前血清β-hCG、AFP诊断前置胎盘合并胎盘植入的曲线下面积(AUC)分别为0.741、0.838,2项指标联合诊断的AUC为0.938,大于各指标单独诊断的AUC。结论血清β-hCG、AFP对于前置胎盘合并胎盘植入及胎盘植入类型均具有较高评估价值。

UtA-PI、UtA-RI联合血清TNF-α、hCG在凶险性前置胎盘合并胎盘植入中的诊断价值

目的:探究子宫动脉搏动指数(ultrasound uterine artery pulsation index,UtA-PI)、子宫动脉阻力指数(uterine artery resistance index,UtA-RI)联合血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)在凶险性前置胎盘合并胎盘植入中的诊断价值。方法:选取2020年1月—2022年2月于阳春市人民医院进行检查并确诊为凶险性前置胎盘合并胎盘植入的52例孕妇为观察组,另选取52例同期来本院进行健康产检的正常孕妇作为对照组。所有孕妇均进行子宫动脉超声检查,记录并比较两组孕妇的UtA-PI、UtA-RI;采用酶联免疫法对两组孕妇的血清TNF-α、hCG水平进行测定,并采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析UtA-PI、UtA-RI、TNF-α、hCG单独及联合检测对孕妇凶险性前置胎盘合并胎盘植入的诊断价值。结果:观察组UtA-PI、UtA-RI水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组TNF-α、hCG水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,UtA-PI、UtA-RI、TNF-α、hCG单独及联合检测诊断凶险性前置胎盘合并胎盘植入的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.812、0.816、0.957、0.833、0.992,诊断价值均较高,其中联合诊断价值最高。结论:采用UtA-PI、UtA-RI联合血清TNF-α、hCG检测可以提高对凶险性前置胎盘合并胎盘植入的诊断效能。

人胎盘滋养层细胞雌激素α,β受体免疫细胞化学研究

目的:探讨雌激素-α,β型受体（estrogen recoptor α,β）在人胎盘滋养层细胞的表达和定位。方法:采用细胞培养结合免疫细胞化学ABC法。结果:人胎盘及培养的人胎盘绒毛合体、细胞滋养层细胞均呈雌激素α,β受体免疫反应性,雌激素受体免疫反应阳性物质定位于胞核内,细胞质为阴性。结论:人胎盘滋养层细胞存在雌激素α,β受体,这为研究雌激素对人胎盘滋养层细胞的功能调控提供了形态学依据。

紫河车提取物治疗儿童白癜风的临床对照研究

目的:观察紫河车提取物、人胎盘组织液及人胎盘脂多糖治疗儿童白癜风的临床疗效。方法:采用紫河车提取物、人胎盘组织液以及人胎盘脂多糖外用联合红外线照射治疗儿童白癜风,早晚各1次,每次红外线照射20min,每隔5min搽药水1次进行治疗,观察其疗效。结果:紫河车提取物有效率为78.50%,显效率38.32%;人胎盘组织液有效率47.06%,显效率23.53%;人胎盘脂多糖有效率57.14%,显效率38.10%,3种药物的总有效率之间有统计学差异(P<0.05),紫河车提取物组疗效明显优于其它两种药物。此外,紫河车提取物治疗头皮部白斑的有效率高达89.66%,明显优于其它各部位(P<0.05)。结论:3种药物联合红外线照射对儿童白癜风有较好疗效,且紫河车提取物的临床疗效明显优于人胎盘组织液和人胎盘脂多糖。

γ干扰素上调人胎盘间充质干细胞PD-L1表达并增强其诱导脐血和外周血T细胞向IL-10^+T细胞的分化

目的比较人胎盘间充质干细胞(h PMSC)对脐血和外周血IL-10^+T细胞分化的调节作用,并探讨γ干扰素(IFN-γ)在其中的作用机制。方法应用酶消化法分离、培养h PMSC;反转录PCR和流式细胞术分别检测程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)在h PMSC的表达;Ficoll密度梯度离心法分离脐血和健康成人外周血单个核细胞,并用红细胞花环法纯化T细胞;用植物血凝素(PHA)活化T细胞并与h PMSC进行共培养,流式细胞术分别检测在阻断型PD-L1 m Ab和IFN-γ预刺激的条件下h PMSC对脐血和外周血T细胞向CD4^+IL-10^+T细胞、CD8^+IL-10^+T细胞分化的诱导作用。结果 h PMSC可诱导脐血和外周血T细胞向CD4^+IL-10^+T细胞、CD8^+IL-10^+T细胞分化,且对外周血T细胞向IL-10^+T细胞分化的诱导能力明显高于对脐血T细胞向该细胞分化的诱导能力;IFN-γ预处理h PMSC后,h PMSC促进脐血和外周血T细胞向IL-10^+T细胞分化能力明显增强;h PMSC高表达PD-L1,IFN-γ可明显上调其在h PMSC上的表达;阻断PD-L1在h PMSC上表达后,脐血、外周血中CD4^+IL-10^+T细胞、CD8^+IL-10^+T细胞比例均明显降低。结论 h PMSC诱导外周血T细胞向IL-10^+T细胞分化的能力明显高于其诱导脐血T细胞向该细胞分化的能力。IFN-γ可通过上调PD-L1在h PMSC上的表达,增强h PMSC对脐血和外周血T细胞向IL-10^+T细胞分化的诱导能力。

胎盘因素对妊娠肝内胆汁淤积症胎儿缺氧的影响

目的 探讨胎盘因素对妊娠肝内胆汁淤积症 (ICP)胎儿缺氧的影响。方法 选择 ICP择期剖宫产胎盘 7例 (ICP组 )及正常妊娠孕妇择期剖宫产胎盘 8例 (对照组 ) ,进行离体胎盘小叶双面灌流实验 ,比较两组胎盘膜对氧气的扩散功能。结果 两组胎盘小叶在氧耗和胎儿面循环液体丢失量相似的情况下 ,灌流过程各时间点ICP胎盘小叶对氧的转运速度与正常胎盘小叶相似 (P>0 .0 5 ) ,说明 ICP胎盘膜对氧的扩散功能正常。结论 ICP胎盘因其绒毛间腔狭窄仅引起胎盘血氧储备能力下降 。

人胎盘组织和滋养层细胞膜联素V的检测

目的 检测膜联素V(AnnexinV)在人胎盘组织的表达及其分布 ,探讨乙肝病毒 (HepatitisBVirus ,HBV)感染胎盘细胞的可能方式。方法 收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织 39例、血清学HBsAg阴性孕妇足月胎盘组织 4例 ,将培养的滋养层细胞制成细胞爬片 ,用免疫组化方法检测胎盘组织和滋养层细胞中的AnnexinV。随机选取 7例胎盘组织采用免疫荧光标记方法结合激光共聚焦技术对AnnexinV进行重测。结果 AnnexinV存在于人类胎盘组织中 ,位于滋养层细胞、间质细胞及绒毛毛细血管内皮细胞的胞浆中。结论 胎盘中含有丰富的AnnexinV ,推测其可能是乙肝病毒进入滋养层细胞并感染胎儿的潜在受体。

水通道蛋白-1在人羊水过少胎盘和胎膜组织中的表达

目的检测水通道蛋白-1 mRNA在人羊水过少临床病例的胎盘和胎膜组织中表达。方法收集选择性剖宫产羊水过少临床病例以及正常足月分娩的胎盘和胎膜组织样本各5例,运用RT-PCR方法检测羊水过少临床病例及正常晚期妊娠胎盘和胎膜组织中水通道蛋白(AQP-1)-1 mRNA的表达。结果羊水过少临床病例胎盘组织AQP1 mRNA表达显著低于正常晚期妊娠胎盘组织(P<0.05);AQP1 mRNA在羊水过少临床病例胎膜组织表达显著低于正常晚期妊娠胎膜组织(P<0.05)。结论AQP1 mRNA在人羊水过少临床病例胎盘和胎膜组织表达显著减少;提示AQP1在母胎液体交换及羊水膜内吸收途径可能发挥重要作用。

丹紫康膝冲剂对兔膝骨性关节炎软骨含水率及羟脯氨酸影响的研究

目的探讨丹紫康膝冲剂兔膝关节骨性关节炎软骨含水率及羟脯氨酸的影响。方法将兔随机分成6组,除正常组外,丹紫康膝冲剂高剂量组、中剂量组、低剂量组(简称丹紫高、中、低剂量组)、壮骨关节丸组(简称壮骨组)、模型组共5组分别在兔左膝关节1、4、7 d注射0.5 mL 4%木瓜蛋白酶造模及药物干预后,光镜下观察关节软骨并检测关节软骨含水率和羟脯氨酸含量。结果模型组发生明显膝关节软骨退行性改变。丹紫高、中、低剂量组与模型组比软骨含水率差异有统计学意义(P<0.05),丹紫高、中、低剂量组与模型组软骨羟脯氨酸含量比较差异有统计学意义(P<0.05);丹紫高、中剂量组软骨含水率比较两组间差异无统计学意义(P>0.05),高、中剂量组软骨含水率与丹紫低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05);丹紫高、中剂量组软骨羟脯氨酸含量比较两组间差异无统计学意义(P>0.05),高、中剂量组软骨羟脯氨酸含量与丹紫低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹紫康膝冲剂能改善兔膝关节骨性关节炎软骨中含水率和羟脯氨酸含量,且高、中剂量效果为佳。

IFN-γ诱导的自噬抑制人胎盘胎儿侧来源间充质干细胞增殖

目的探讨IFN-γ诱导无血清培养人胎盘胎儿侧来源MSCs自噬的发生,并分析自噬对细胞增殖的影响。方法用酶消化法和无血清培养体系分离培养人胎盘胎儿侧来源MSCs,利用流式细胞仪和分化培养体系鉴定细胞属性;用质量浓度50μg/L的IFN-γ处理人胎盘胎儿侧来源MSCs,以未处理细胞作为对照组,3-Ma处理为自噬抑制组;分别提取总蛋白,Western blot检测自噬标志基因LC3Ⅰ/Ⅱ的表达;mRFP-GFP-LC3腺病毒感染细胞,观察细胞内点状聚集的情况;MTT法检测IFN-γ对细胞增殖的影响。结果所分离细胞呈CD73、CD90和CD105阳性细胞,不表达CD14、CD34和CD45,具有向脂肪和成骨细胞分化的能力;IFN-γ可提高LC3Ⅱ的表达量(P<0.05),荧光共聚焦显微境观察到IFN-γ处理细胞中的点状聚集显著增加;3-Ma可解除IFN-γ对MSCs增殖能力的抑制(P<0.05)。结论 IFN-γ诱导的自噬负调控人胎盘胎儿侧来源MSCs的增殖能力。

人胎盘绒毛调节肽的免疫组织化学研究

本文用免疫金银法对人胎盘绒毛进行促性腺激素释放激素(GnRH)、生长抑素(SS)和β-内啡肽(β-EP)的免疫组织化学定位及定量研究。GnRH和SS的免疫反应阳性物质,主要分布于人胎盘绒毛细胞滋养层细胞和个别绒毛的合体滋养层细胞。β-EP的免疫反应阳性物质,则主要分布于绒毛的合体滋养层细胞和个别绒毛的细胞滋养层细胞,提示胎盘绒毛的细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞都能产生以上3种调节肽。但是GnRH和SS主要产生于细胞滋养层细胞,β-EP则主要产生于合体滋养层细胞。GnRH和β-EP的相对含量都随胎盘的周龄而改变,而且两者的含量呈负相关性,提示它们可能有相互抑制作用。

人胎盘来源的两种间充质干细胞IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的比较研究

目的比较人胎盘母体和胎儿来源间充质干细胞(hmPMSCs/hfPMSCs)IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的差异。方法采用酶消化法分离人胎盘母体和胎儿侧间充质干细胞(MSCs),并利用流式细胞仪和D2S1399、D10S2325、D18S535和GATA198B05四个STR基因座对细胞属性进行鉴定分析;通过q-PCR和ELISA分别测定hmPMSCs和hfPMSCs细胞培养上清液中IL6、IL8、IL10和HGF在基因及蛋白水平上的表达。结果所分离两种来源细胞表达MSCs表面标志分子CD73、CD90和CD105,不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR,母体来源细胞中上述四个STR位点的等位基因与母体亲本保持一致性,而胎儿侧来源细胞分别具有来自亲本双方的等位基因。hfPMSCs IL8、IL10和HGF mRNA的表达水平显著高于hmPMSC(sP<0.01),而IL6的表达水平差异无显著性。ELISA结果表明,hfPMSCs IL6、IL8和HGF蛋白表达水平显著高于hmPMSCs(P<0.01),IL10的分泌量两者无差异。结论 hmPMSCs和hfPMSCs中IL6、IL8和HGF三种细胞因子的分泌量差异存在显著性,其中hfPMSCs HGF的分泌量远高于hmPMSCs,提示hfPMSCs在免疫抑制和组织修复中可能更具临床应用潜力。

探讨HBsAg/Annexin V检测在HBV宫内传播中的意义

目的 :揭示乙肝病毒 (hepatitisBvirus,HBV)感染胎盘滋养层细胞的可能方式 ,探讨乙肝表面抗原 /膜联蛋白V(HBsAg/AnnexinV)检测在HBV宫内传播机制研究的意义 .方法 :收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织 39例 ,经SABC免疫组化方法在其中 2 3例中检测到HBsAg ,随机选取 7例采用免疫荧光双标记方法结合激光共聚焦技术检测HBsAg/An nexinV .结果 :血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织中HB sAg/AnnexinV共存于滋养层细胞胞质中 .结论 :提示在HBV宫内传播机制方面存在着这样一种可能 ,即AnnexinV结合并携带HBV进入滋养层细胞 ,从而使滋养层细胞受到HBV感染 .

人胎盘胎儿来源间充质干细胞通过下调髓样分化因子88和转化生长因子β信号通路减轻小鼠肺纤维化

目的探讨无血清培养人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hf PMSC)对博来霉素所致小鼠肺纤维化的疗效及分子机制。方法培养并采用流式细胞术鉴定hf PMSC,取无特定病原体级雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为博来霉素组、hf PMSC治疗组和阴性对照组。博来霉素组和hf PMSC治疗组分别经气管内注入50μL博莱霉素(1 g/L)制备肺纤维化模型,阴性对照组经气管内注入50μL PBS。hf PMSC治疗组,在造模3 d后,经尾静脉注射200μL含5×105个hf PMSC。第21天全部处死各实验组小鼠,取肺组织进行HE染色、Masson染色以及胶原蛋白含量测定;提取各组肺组织总蛋白,Western blot法检测髓样分化因子88(My D88)、转化生长因子β(TGF-β)的表达;ELISA检测各组血清中TGF-β的浓度。结果所培养具有典型的间充质干细胞形态特征并表达表面标志分子CD73、CD90和CD105,而不表达CD14、CD34和CD45。与博来霉素组比较,HE和Masson染色显示,hf PMSC治疗组可显著性降低肺组织纤维化程度、降低肺组织胶原蛋白含量以及My D88和TGF-β蛋白水平。结论hf PMSC可通过My D88下调TGF-β的表达减轻小鼠肺纤维化。

人胎盘组织液HPLC指纹图分析

目的 建立人胎盘组织液制品批间一致性的质量控制方法。方法 采用ＨＰＬＣ指纹图方法，观察 同一生产单位不同生产批之间，以及不同生产单位之间人胎盘组织液制品ＨＰＬＣ主要色谱峰的变化。结果 同一 生产单位不同批的人胎盘组织液指纹图谱基本一致；不同生产单位的人胎盘组织液的指纹图谱有差异。结论 ＨＰＬＣ指纹图方法可以作为常规质量拄制指标，用于控制胎盘组织液制品批间一致性。

携氧代血浆扩容及携氧功能初步动物实验研究

目的建立大鼠重度失血性休克模型和大鼠失血性休克-肠系膜微循环模型,用以探讨携氧代血浆的扩容和携氧功能。方法将20只SD大鼠失血至全身血容量的60%,造成重度失血性休克大鼠模型后,随机均分为6%羟乙基淀粉(HES)组和携氧代血浆组做相应样品的等容量输注复苏。分别在造模前、休克、输液末以及输液后1 h观测大鼠平均动脉压(MAP)、股动脉取血测定血气,检测组织氧分压(PtO_2)。另取20只大鼠建立失血性休克-肠系膜微循环模型,观察、记录大鼠造模前基础值、休克、输液末以及输液后1 h微血管直径的变化和血流状态。结果 HES组与携氧代血浆组比较,输液末微静脉直径(μm)与微动脉直径(μm)分别为:31.23±4.96 vs 31.86±5.43、19.46±1.47 vs19.40±2.10(P>0.05),输液后血流状态均得到恢复;输液后1 h的MAP(mm Hg)为:90.70±3.83 vs 98.90±9.18(P<0.05);组织氧分压(mm Hg)为:输液末7.03±1.47 vs 15.32±2.34(P<0.05),输液后1 h 5.53±2.39 vs 8.90±2.01(P<0.05);2组大鼠血气指标在各时间点相近(P>0.05)。结论携氧代血浆能够改善大鼠失血性休克所致的微循环障碍,具有与HES相似的血管扩容作用,并且在大鼠休克复苏初期恢复组织氧分压的效果优于HES。

人胎盘间充质干细胞及诱导的胰岛样细胞移植治疗妊娠期糖尿病大鼠效果比较

背景:妊娠期糖尿病易对孕产妇和胎儿的健康造成严重损害,探索安全有效的妊娠期糖尿病预防和治疗手段成为妇产科学的重要研究方向之一。目的:对比人胎盘间充质干细胞和胰岛样细胞对妊娠期糖尿病大鼠的治疗效果,为其用于临床研究治疗妊娠期糖尿病提供理论依据。方法:在无菌条件下提取人胎盘组织中的人胎盘间充质干细胞,将其诱导分化为胰岛样细胞,采用流式细胞术检测分化过程中巢蛋白和胰岛素的表达,采用双硫腙染色法检测胰岛样细胞团中锌离子表达。将雌性SD大鼠随机分为5组:正常孕鼠组、妊娠期糖尿病鼠未干预组、妊娠期糖尿病鼠生理盐水干预组、妊娠期糖尿病鼠人胎盘间充质干细胞干预组、妊娠期糖尿病鼠胰岛样细胞干预组,每组10只。采用妊娠前喂食高糖高脂饮食和妊娠后腹腔注射链脲佐菌素的方法建立妊娠期糖尿病模型,建模成功后,尾静脉注射1 mL含6×106个人胎盘间充质干细胞或胰岛样细胞的生理盐水悬液,分别于妊娠第6,12,18天检测各组孕鼠体质量和空腹血糖,妊娠第18天检测孕鼠血清脂联素水平。结果与结论:①在人胎盘间充质干细胞诱导分化为胰岛样细胞过程中,胰岛素水平逐渐增高;巢蛋白表达水平先上升后逐渐下降;在诱导分化的第28天形成胰岛样细胞团;②人胎盘间充质干细胞和胰岛样细胞均能使妊娠期糖尿病鼠血糖降低,体质量升高,脂联素水平升高;妊娠第18天,与人胎盘间充质干细胞干预组相比,胰岛样细胞干预组大鼠体质量上升、血糖降低、脂联素水平升高效果更明显;③结果表明,人胎盘间充质干细胞和胰岛样细胞均能有效治疗妊娠期糖尿病鼠,由人胎盘间充质干细胞诱导分化的胰岛样细胞治疗效果更优。

TNF-相关诱导凋亡因子及其受体在人胎盘组织中的免疫组织化学定位

目的 探讨TNF相关诱导凋亡因子 (TRAIL)及其DR4、DR5受体在人胎盘组织的表达及其意义。 方法 免疫组织化学结合图像分析定量方法观察TRAIL及其DR4、DR5受体在人胎盘组织的表达及其含量的周龄变化。 结果 人胎盘滋养层细胞、绒毛基质细胞及毛细血管的内皮细胞均呈TRAIL及DR4、DR5受体免疫反应阳性 ,阳性反应物分布于胞膜及胞质 ,胞核阴性。在人胎盘绒毛的不同发育阶段中 ,TRAIL的含量相对稳定 ,而其受体DR4、DR5的含量随着周龄的增加而升高。 结论 结果显示胎盘不仅能产生TRAIL ,而且也是TRAIL的靶器官 ,TRAIL及其DR4。