老年心肌梗死患者术中冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂对微循环的影响

目的探讨血栓抽吸联合冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂对老年ST段抬高型心肌梗死患者急诊经皮冠状动脉介入治疗术中冠状动脉微循环及心功能的影响。方法回顾性选取2021年1月至2023年10月于天津市第三中心医院就诊的并行急诊经皮冠状动脉介入治疗的老年ST段抬高型心肌梗死患者90例,根据经皮冠状动脉介入治疗术中介入策略不同分为单纯血栓抽吸组(抽吸组)46例和血栓抽吸联合冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂组(联合组)44例。比较2组一般临床资料,术后90 min ST段回落指数≥70%比例,术后即刻心肌梗死溶栓试验(thrombolysis in myocardial infarction,TIMI)血流分级,术后TIMI心肌灌注分级,校正的TIMI血流帧数,心脏超声指标以及住院期间主要不良心血管事件及出血事件。结果联合组术后ST段回落≥70%、术后即刻TIMI血流分级3级、术后TIMI心肌灌注分级3级比例显著高于抽吸组,校正的TIMI血流帧数显著低于抽吸组(P<0.05);抽吸组术后1周的左心室射血分数显著低于联合组[(52.5±6.2)%vs(58.3±6.4)%,P<0.05],联合组术后1周左心室舒张末期内径显著低于抽吸组[(44.1±3.9)mm vs(51.9±2.5)mm,P<0.05];联合组住院期间主要不良心血管事件发生率显著低于抽吸组(20.5%vs 37.0%,P<0.05)。结论在应用抽吸导管的基础上配合冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂可有效降低老年ST段抬高型心肌梗死患者冠状动脉内血栓负荷,改善心肌微循环灌注,降低住院期间主要不良心血管事件发生率且不增加出血风险。

冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂及腺苷注射液对急性ST段抬高型心肌梗死的疗效分析

目的评价急诊直接经皮冠脉介入(PPCI)治疗中经指引导管冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂及腺苷注射液对急性ST段抬高型心肌梗死(ASTEMI)的疗效。方法选择行急诊PPCI的ASTEMI患者,按照随机数字表法分为对照组和治疗组。对照组给予PPCI术常规治疗,若PPCI后梗死相关动脉(IRA)达到TIMI血流3级,则终止手术;若TIMI血流≤2级,则应用指引导管于冠脉内注射硝普钠、硝酸甘油、替罗非班改善冠状动脉微循环功能障碍(CMD),直到IRA达到TIMI血流3级。治疗组是在PPCI术常规治疗基础上,术中开通IRA后应用指引导管于冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂8 mg及腺苷注射液200μg,若IRA达到TIMI血流3级,则终止手术;若TIMI血流≤2级,则再次注射腺苷注射液改善CMD,直到IRA达到TIMI血流3级。观察指标,①心肌损伤指标:术前及术后12、24、36、48 h的血浆肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N端B型脑钠肽(NT-pro BNP)水平;②心肌灌注指标:术后校正的TIMI帧数(CTFC)、术后90 min IRA导联ST段回落值(STR);③心肌缺血的程度:术后3 d行静息D-SPECT+腺苷负荷D-SPECT检查,观察心肌17节段分布下心肌灌注总积分、心肌缺血总节段数情况;④术后30 d的药物不良反应:皮下瘀斑、牙龈出血、消化道出血、泌尿系出血、血红蛋白下降、脑出血;⑤术后30 d的主要不良心血管事件(MACE):心脏死亡、心肌梗死、心力衰竭、靶血管再次血运重建情况。结果①心肌损伤指标:术前的cTnI、CK-MB、NT-pro BNP水平两组患者差异均无统计学意义(均P>0.05),心肌损伤指标治疗组均在术后12 h显著低于对照组(均P<0.05),之后均趋势下降,术后48 h两组差异均无统计学意义(均P>0.05)。②心肌灌注指标:治疗组术后CTFC均显著优于对照组(P<0.05)。应用秩和检验,治疗组术后90 min STR显著优于对照组(Z=2.437,P=0.014)。③心肌缺血的程度:两组患者在术后3 d行静息D-SPECT+腺苷负荷D-SPECT检查,在心肌17节段分布下心肌灌注总积分、心肌缺血总节段数情况,治疗组在负荷缺血节段数、静息灌注总评分、负荷灌注总评分均显著优于对照组(均P<0.05)。④术后30 d的药物不良反应:两组患者在皮下瘀斑、牙龈出血、消化道出血、泌尿系出血、血红蛋白下降、脑出血发生率均无统计学差异(P>0.05)。⑤术后30 d的MACE情况:两组患者在心脏死亡、心肌梗死、心力衰竭、靶血管再次血运重建情况以及总MACE发生率均无统计学差异(P>0.05)。结论急诊PPCI中经指引导管冠状动脉内注射重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂及腺苷注射液对ASTEMI患者安全、有效,可改善心肌损伤、心肌灌注和心肌缺血。

利伐沙班对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的探讨利伐沙班(RIV)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能损伤的影响。方法根据干预措施,将实验分为空白对照组(A组,常规培养液),Ox-LDL组(B组,100μg/mL Ox-LDL的培养液),Ox-LDL+RIV125组(C1组,100μg/mL Ox-LDL和125 ng/mL RIV的培养液),Ox-LDL+RIV250组(C2组,100μg/mL Ox-LDL和250 ng/mL RIV的培养液)和Ox-LDL+RIV500组(C3组,100μg/mL Ox-LDL和500 ng/mLRIV的培养液),各组细胞均处理48 h。采用CCK-8法检测各组细胞存活率的变化,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用免疫印迹(Western blot)法检测细胞核因子-κB(NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)蛋白表达水平。结果与B组比较,C1组、C2组、C3组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和uPAR表达水平均显著降低(P<0.05);C3组IL-1β,TNF-α,IL-6水平和p-NF-κB p65表达水平显著降低(P<0.05)。结论RIV能显著恢复细胞活力、减少细胞凋亡和由Ox-LDL引起的炎性反应,可能通过NF-κB和uPAR的调节而发挥作用。

分析急性脑梗死采用rt-PA结合亚低温治疗对血清学指标水平的改善效果

目的:分析急性脑梗死(ACI)采用重组人组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)结合亚低温治疗的有效性。方法:以郧西县人民医院神经内科2022年1月至2024年2月内收治的102例ACI患者为本次研究对象,并以随机法分为静脉溶栓组(51例,rt-PA静脉溶栓治疗)和亚低温组(51例,rt-PA结合亚低温治疗),对比分析两组患者的治疗效果与预后改善效果。结果:亚低温组的治疗有效率显著高于静脉溶栓组(P<0.05),且治疗后亚低温组患者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、中枢神经系统的特异性蛋白(S100-β蛋白)、血小板溶酶体膜蛋白(CD63)、a颗粒膜糖蛋白(CD62p)、血小板活化因子(PAF)均显著低于静脉溶栓组(P<0.05),基底动脉的血流速度最大值(V_(max))、血流速度最小值(V_(min))、血流量(Q_(mean))均显著高于静脉溶栓组(P<0.05),外周阻力(RV)显著低于静脉溶栓组(P<0.05)。结论:ACI患者以rt-PA结合亚低温治疗,可有效促进病情转归,改善患者神经功能。

rhTNK-tPA溶栓治疗对STEMI患者PCI术后并发症及心血管血流状态的影响研究

目的 探讨注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂(recombinant human TNK tissue type plasminogen activator, rhTNK-tPA)溶栓治疗对ST段抬高型心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction, STEMI)患者经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention, PCI)后的影响。方法 方便选取2021年1月—2024年2月安溪县医院收治的84例STEMI患者为研究对象,根据是否溶栓治疗分组,对照组40例未接受溶栓治疗,直接行PCI;观察组44例经rhTNK-tPA溶栓治疗后行PCI,比较两组术后并发症发生情况、心血管血流状态及凝血功能。结果 两组术后并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术前,两组心肌梗死溶栓试验血流分级比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后,观察组2级2.27%(1/44)、3级97.73%(43/44),均优于对照组的2级27.50%(11/40)、3级72.50%(29/40),差异有统计学意义(Z=10.889,P<0.05)。术前,两组凝血功能比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后,观察组凝血酶原时间、凝血酶时间、部分活化凝血酶时间均长于对照组,纤维蛋白原低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 rhTNK-tPA溶栓治疗不会增加STEMI患者PCI术后并发症,且能改善心血管血流状态与凝血功能。

重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂溶栓联合阿托伐他汀钙对急性脑梗死患者的疗效研究

目的研究重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂(rhTNK-tPA)溶栓联合阿托伐他汀钙对急性脑梗死(ACI)患者的疗效。方法本研究为随机对照试验。选取2021年5月至2023年12月西安医学院第三附属医院神经内科收治的90例ACI患者作为研究对象,采用随机数字表法,将患者分为对照组(45例)和观察组(45例)。对照组男23例,女22例;年龄(51.47±7.70)岁;体重指数(24.12±2.69)kg/m^(2)。观察组男26例,女19例;年龄(53.18±8.45)岁;体重指数(23.68±2.40)kg/m^(2)。对照组采用rhTNK-tPA溶栓治疗,观察组在对照组基础上联合阿托伐他汀钙治疗。两组均连续治疗2周,随访6个月。比较两组临床疗效,治疗前后血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、髓鞘碱性蛋白(MBP)和脂蛋白相关磷脂酶(Lp-PL)A2水平,治疗前后和治疗后3个月神经功能[美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分]、运动功能[Fugl-Meyer运动功能评定量表(FMA)评分],治疗期间药物不良反应发生情况,随访期间预后情况(病死、血管再通、颅内出血)。采用独立样本t检验、χ^(2)检验和Fisher确切概率法进行统计学分析。结果观察组治疗总有效率高于对照组[93.33%(42/45)比77.78%(35/45)](P<0.05)。治疗后,观察组血清sICAM-1、MBP和Lp-PLA2水平均低于对照组[(291.45±22.81)μg/L比(308.62±23.50)μg/L、(2.24±0.41)μg/L比(2.58±0.46)μg/L、(142.71±20.56)μg/L比(157.31±19.40)μg/L](均P<0.05)。治疗后和治疗后3个月,观察组NIHSS评分均低于对照组,FMA评分均高于对照组[(5.56±1.08)分比(5.90±1.39)分、(3.64±0.75)分比(3.90±0.86)分、(68.73±10.46)分比(62.41±9.22)分、(79.44±10.34)分比(73.51±9.83)分](均P<0.05)。治疗期间,两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随访6个月后,观察组血管再通率高于对照组[95.56%(43/45)比82.22%(37/45)](P<0.05)。结论rhTNK-tPA联合阿托伐他汀钙治疗ACI患者可提高临床疗效,改善血清sICAM-1、MBP和Lp-PLA2水平和运动能力,提高血管再通率,安全可靠。

人纤溶酶原饼环区5蛋白的原核表达体系的建立

目的 构建人纤溶酶原饼环区 5 (hPK 5 )蛋白原核表达载体 ,并进行表达和鉴定 ,为获取大量高纯度、具有生物活性的hPK 5蛋白奠定基础。方法 以纤溶酶原cDNA为模板 ,PCR扩增hPK 5基因 ,经酶切后构建表达载体pBV2 2 0 /hPK 5 ,转入大肠杆菌JM10 9进行温控诱导表达 ,表达产物经纯化、复性后 ,检测其抑制鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管新生的生物学活性。结果 带有pBV2 2 0 /hPK 5的大肠杆菌表达的目的蛋白占菌体总蛋白的34 8% ,其表达蛋白具有His tag抗原活性和野生活性。结论 已成功构建了pBV2 2 0 /hPK 5重组质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。

人纤溶酶原Kringle5区的基因克隆的表达及纯化

目的克隆人纤溶酶原Kringle5 (K5 )区基因 ,并进行重组蛋白的表达纯化及活性鉴定。方法用PCR方法从正常成人肝cDNA库扩增出人纤溶酶原K5区基因 ,构建K5的原核表达载体pET 2 2b(+) K5 6×His,IPTG诱导蛋白表达后经Ni+ -树脂亲和层析进行纯化 ,通过血管内皮细胞增殖抑制试验检测蛋白活性。结果经PCR成功扩增出了 2 4 3bp的K5区基因 ,测序正确后克隆进大肠杆菌分泌型表达载体pET 2 2b(+) ,重组质粒在BL2 1中成功表达出分子量为 14 0 0 0的蛋白质 ,纯化后的蛋白纯度达95 % ,具有抑制血管内皮细胞增殖活性的功能 ,K5蛋白浓度为 4 μg/mL时抑制率达 5 0 %。 结论纤溶酶原K5的成功克隆。

Lys-纤溶酶原的制备及其活力稳定性

目的 制备Lys 纤溶酶原并观察其稳定性。方法 人血浆组分Ⅲ经Lys Sepharore 4B和SephadaxG 2 0 0柱层析纯化。结果 得到分子质量为 90 0 0 0的天然纤维蛋白溶酶原 (G/u Hpg) ,经透析得到N 末端为赖氨酸的纤溶酶原 (Lys HPg) ,其活力较Glu HPg更稳定。结论 为合成酰化纤溶酶原—链激酶复合物 (APSAC)奠定基础。

人纤溶酶原饼环区5基因的原核表达及活性测定

人纤溶酶原饼环区 5 (hPgnK5 )是新的血管生成抑制因子 .PCR法改造hPgnK5基因 ,所得hPgnK5基因包括编码人纤溶酶原C4 62 到P54 4共 83个氨基酸残基 ,而且在 5′ ,3′分别引入了EcoRⅠ和BamHⅠ位点 .以pThiohisA构建hPgnK5基因原核表达载体 ,在大肠杆菌TOP10中表达该蛋白 .通过柱层析法获得hPgnK5纯化蛋白 .免疫印迹反应表明该蛋白具有hPgnK5免疫活性 .体外实验表明 ,该蛋白具有抑制血管内皮细胞增殖活性 .

人血纤维蛋白溶酶原K5环的基因合成、表达、纯化与活性鉴定

根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,人工合成人血纤维蛋白溶酶原 K5全基因 ,并在原核系统中以硫氧还蛋白融合蛋白的形式实现了高效表达 .重组蛋白通过 Ni2 +金属螯合层析得到初步纯化 ,通过肠激酶切割去除了融合标签 .应用鸡胚尿囊膜实验检测切割后的 rh K5的生物学活性 ,发现与对照组相比 ,rh K5能明显地降低血管管径、血管总面积以及血管总面积与视野面积的比值 ,表明切割后的产物具有显著抑制新生血管生成的生物学活性 .为进一步研究和开发抗血管生成药物奠定了基础 .

人纤维蛋白溶酶原中色氨酸残基的化学修饰

以N－溴代琥珀酰亚胺为修饰剂，对人纤维蛋白溶酶原（HPg）中色氨酸（Trp）残基的分布及其与酶活力的关系进行了研究，发现每个HPg分子有19个Trp残基，5个位于分子表面；有2个是快反应残基，其中1个是活性必需的氨基酸．酶被修饰后其荧光光谱及圆二色谱发生了变化．

人纤溶酶原饼环区5(hPK5)基因的分泌型表达

构建人纤溶酶原饼环区 5 (hPK 5 )基因的原核可溶性表达载体并进行表达和纯化 ,获取大量高纯度、具有生物活性的hPK 5蛋白。以纤溶酶原cDNA为模板 ,PCR扩增了hPK 5基因 ,经过适当酶切后构建表达载体pET2 2b( + ) hPK 5 ,转入大肠杆菌BL2 1 (DE3)进行表达并经组氨酸亲和层析获得纯化。带有重组质粒pET2 2b( + ) hPK 5的大肠杆菌经IPTG诱导后以可溶性形式表达 1 6kDa的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白的 30 %以上 ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有His tag抗原活性。构建了pET2 2b( + ) hPK 5重组质粒并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 ,为获得大量hPK 5基因工程产品奠定了实验基础。

人纤溶酶原K1-3区基因在大肠杆菌中的表达

将人纤溶酶原kringle 1- 3 (K1- 3)基因插入融合表达载体pET - 17b ,获得重组质粒pET -K13 ,转化E coliBL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下 ,人纤溶酶原K1- 3基因在E coliBL2 1(DE3,pET -K13)中获得高效融合表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4% ,表达产物以包涵体存在 ,Westernblot证明重组蛋白对人纤溶酶原抗血清有特异免疫原性 .

纤维蛋白溶解酶原的纯化及性质

人血浆组分Ⅲ经Lys－Sepharose4B和SephadexG－200柱层析分离，得到分子量为90000的纯品纤维蛋白溶解酶原（HPg）．其作用的最适PH、温度、离子强度分别为6.0，25℃和0．05mol／L．Zn2＋对HPg活性有明显抑制作用；Mg2＋，Li＋，Ca2＋等离子显示了不同程度的激活作用．

人纤溶酶原K5基因在毕赤酵母中的表达及其抗肿瘤活性

目的在毕赤酵母中表达人纤溶酶原K5基因,并检测hK5蛋白的抗肿瘤活性。方法根据酵母遗传密码的偏爱性优化设计hK5基因,构建重组表达质粒p819-8α-hK5,经G418加压筛选和甲醇诱导表达,并对摇瓶发酵条件进行优化。表达的hK5蛋白经纯化后,通过荷H22肿瘤昆明小鼠模型检测其抗肿瘤活性。结果筛选到2株高表达hK5蛋白的转化子,摇瓶表达量超过150mg/L,纯化后的蛋白纯度大于95.0%,并能够显著抑制昆明小鼠H22肿瘤的生长。结论hK5基因能够在毕赤酵母中高效分泌表达,且表达的hK5蛋白具有良好的抗肿瘤活性。

人纤溶酶原的亲和色谱分离纯化

以ＣｏｈｎＦⅢ为原料，采用Ｌｙｓ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和色谱分离纯化人纤溶酶原，６－氨基正己酸作为洗脱剂，纯化倍数达３５０倍，收率为９８％，比活为２０ｕ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量约为８５０００。用过量链激酶激活纤溶酶原后，电泳显示特征带消失。

纤溶酶原饼环区5蛋白重组大肠杆菌高效表达体系的建立

目的 建立纤溶酶原饼环区 5 (Humanplasminogenkringle 5 ,hPK 5 )蛋白重组大肠杆菌高效表达体系 ,为高密度发酵创造条件。方法 观察一级、二级种子的生长状态 ,比较表达hPK 5蛋白的 4种重组工程菌株在相同条件下的表达情况 ,选出首选发酵种子 ;对其培养时间、诱导时间、培养基种类、pH等条件进行优化 ;并用凝胶成像分析系统对SDS PAGE结果进行分析。结果 经过筛选 ,JM10 9 pBV2 2 0 hPK 5 (简称JP5 )是获取hPK 5蛋白的首选工程菌株 ,其最佳表达条件是LB培养基 (pH 7.4、溶解氧充足 )、30℃培养 3h、4 2℃诱导 6h。在此条件下 ,JP5表达目的蛋白占菌体总蛋白的 38%左右。结论 为高密度发酵获取hPK

人纤维蛋白溶酶原的化学修饰

分别以乙基咪唑 (NAI)、 1 ,2 -环己二酮 (CHD)、碳二亚胺 (EDC)和氯氨 -T(Ch-T)作修饰剂 ,研究人纤维蛋白溶酶原 (HPg)中的酪氨酸、精氨酸、羧基和蛋氨酸残基对 HPg活性的影响 ,发现 HPg中的酪氨酸和精氨酸残基的修饰对 HPg活性影响不大 ,而羧基和蛋氨酸残基的修饰导致 HPg酶活性丧失 .按 Keech和Farrant动力学方法分析 ,得出有以两个羧基和一个蛋氨酸残基为 HPg活性的必需基团 。

人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析

纤溶酶原K1 3功能区是近年发现的血管生成抑制因子 ,具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生成抑制素cDNA为模板用PCR技术扩增了K1 3功能区的基因 ,DNA序列分析后克隆至质粒pPIC9K上获得重组质粒pPIC9K13,转化毕节酵母GS115 ,用PCR和G418法筛选高拷贝转化子 ,进行摇瓶发酵。SDS PAGE和Westernblot分析结果证实K1 3基因已在GS115分泌表达 ,并具有免疫活性。选用 30L和 80L罐进行高密度发酵 ,甲醇诱导 48h细胞密度达到OD2 5 0～ 30 0 ,比摇瓶提高 5～ 6倍 ,表达量 15 0 2 0 0mg L。发酵上清液经StreamlineSP离子交换及Phe nyl Sephorose疏水层析纯化 ,在SDS PAGE上显示一条带 ,纯度 96 % 。