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Humanin对鱼藤酮诱导的多巴胺神经元毒性的保护作用研究
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作者 单耀辉 张启夫 +8 位作者 程晋 叶枫 张玺 余文珮 王晓刚 赵远鹏 但国蓉 陈明亮 赛燕 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期670-677,共8页
目的探讨Humanin(HN)对鱼藤酮(rotenone,Rot)诱导的多巴胺神经元毒性损伤的保护作用和机制。方法构建Rot染毒PC12细胞模型,实验设对照组、Rot染毒组、HN预处理Rot染毒组、单独HN处理组。采用ELISA检测Rot染毒细胞内外HN的含量,CCK-8法... 目的探讨Humanin(HN)对鱼藤酮(rotenone,Rot)诱导的多巴胺神经元毒性损伤的保护作用和机制。方法构建Rot染毒PC12细胞模型,实验设对照组、Rot染毒组、HN预处理Rot染毒组、单独HN处理组。采用ELISA检测Rot染毒细胞内外HN的含量,CCK-8法检测细胞活性,ATP检测试剂盒检测细胞内ATP含量,DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,Western blot分别检测线粒体自噬调控蛋白Pink1、Parkin、p-Parkin、p62、LC3,线粒体生物发生调控蛋白PGC1α和分裂/融合调控蛋白OPA1、MFN2、DRP1、p-DRP1以及抗氧化应激调控蛋白Keap1、Nrf2的表达。采用HBAD-mcherry-EGFP-LC3腺病毒转染细胞观察自噬体和自噬溶酶体的数量。结果Rot染毒组PC12细胞内HN浓度显著高于对照组(P<0.05);与对照组比较,Rot染毒组PC12细胞活性下降,ATP含量下降,ROS的生成增加,Rot染毒后PC12细胞内Pink1、p-Parkin表达升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62表达下降,细胞线粒体生物发生蛋白PGC1α和线粒体融合蛋白MFN2、OPA1表达下降,而线粒体分裂蛋白p-DRP1表达升高,抗氧化应激蛋白Keap1和Nrf2表达下降(P均<0.05);与对照组比较,Rot染毒组PC12细胞中自噬体和自噬溶酶体数量增多(P<0.05),而20μmol/L HN预处理可以改善Rot染毒引起的上述变化(P<0.05)。结论HN通过抑制线粒体自噬和线粒体分裂、促进线粒体生物发生和融合以及抗氧化应激,改善Rot诱导的多巴胺神经元毒性损伤。 展开更多
关键词 humanin 鱼藤酮 多巴胺神经元 线粒体
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Age-related Changes in Humanin Expression in the Ovarian Tissue of Rat
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作者 Yi XIA Han-yong ZHANG +1 位作者 Sha MA Fang ZHOU 《Current Medical Science》 SCIE CAS 2023年第3期579-584,共6页
Objective This study examined humanin expression in rat ovarian tissue,its cellular localization,and its correlation with rat age under physiological conditions.Methods A total of 40 Sprague-Dawley rats of various age... Objective This study examined humanin expression in rat ovarian tissue,its cellular localization,and its correlation with rat age under physiological conditions.Methods A total of 40 Sprague-Dawley rats of various ages(2,12,30,and 60 days old and 1 year old)were grouped by age.Immunofluorescence and immunohistochemical techniques were used to observe humanin expression and cellular location in the ovarian tissues of rats from each age group.In addition,Western blotting and Real-time quantitative reverse transcription PCR(qRT-PCR)techniques were used to measure humanin expression level in the ovarian tissues of rats from each age group.Results The immunofluorescence and immunohistochemical results confirmed that humanin was expressed in rat ovarian tissues.In addition,cellular localization analysis showed that humanin was expressed in the cytoplasm of oocytes,interstitial cells,granulosa cells and theca cells in all levels of follicles after the primary follicles,and in the corpus luteum.The qRT-PCR results revealed that the level of humanin expression in the ovarian tissues of 12-day-old rats was non-significantly higher than that in the ovarian tissues of 2-day-old rats(P>0.05),whereas the levels of humanin expression in the ovarian tissues of 30-day-old,60-day-old,and 1-year-old rats were significantly lower than that in the ovarian tissues of 2-day-old rats(P<0.05).The Western blotting results demonstrated that the levels of humanin protein expression in the ovarian tissues of 60-day-old and 1-year-old rats were significantly lower than those of 2-day-old rats(P<0.01),whereas there was no significant difference in the level of humanin protein expression between the ovarian tissues of 12-day-old and 30-day-old rats.Conclusion This study confirmed that humanin is expressed in the cytoplasm of various cells in rat ovarian tissues.Moreover,the level of humanin expression was highest in the ovarian tissues of 12-day-old rats,and it subsequently decreased with age.The changes in the expression of humanin in the ovary of rats at different ages will lay the foundation for the role of humanin in ovarian aging.The effect of humanin on ovarian function is worthy of further study in the future. 展开更多
关键词 humanin ovarian aging RAT female fertility
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[Gly^(14)]-humanin多肽对β淀粉样蛋白引起的神经干细胞毒性的拮抗作用研究 被引量:7
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作者 胥显民 王廷杰 +5 位作者 陈显久 张悦红 程牛亮 蔡大勇 解军 牛勃 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1623-1627,共5页
目的:研究[G ly14]-hum an in对β淀粉样蛋白1-42引起的神经干细胞毒性的作用。方法:用[G ly14]-hum an in和β淀粉样蛋白1-42处理神经干细胞,观察其对神经干细胞增殖、分化的影响。结果:较低浓度的[G ly14]-hum an in加入有β淀粉样蛋... 目的:研究[G ly14]-hum an in对β淀粉样蛋白1-42引起的神经干细胞毒性的作用。方法:用[G ly14]-hum an in和β淀粉样蛋白1-42处理神经干细胞,观察其对神经干细胞增殖、分化的影响。结果:较低浓度的[G ly14]-hum an in加入有β淀粉样蛋白1-42处理的神经干细胞培养基,经过琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞测定DNA含量,神经干细胞显示出对β淀粉样蛋白1-42的耐受,而对照组则显示神经干细胞出现凋亡现象。高浓度的[G ly14]-hum an in加入培养基,经台盼蓝拒染法计数细胞,神经干细胞死亡率明显低于对照组,对照组神经干细胞出现大量死亡。结论:[G ly14]-hum an in不但具有抑制β淀粉样蛋白1-42对神经干细胞的毒性作用,而且在低浓度的情况下,可以促进神经干细胞的增殖和分化为神经元。 展开更多
关键词 干细胞 淀粉样Β蛋白 humanin 多肽
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Humanin通过抑制一氧化氮发挥神经保护作用 被引量:4
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作者 宋海岩 邓晓慧 苗莹莹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期742-745,共4页
目的:探讨humanin(HN)拮抗N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的兴奋性神经毒的作用及其可能的作用机制。方法:原代培养SD新生大鼠皮层神经元,免疫荧光检测神经元特异性烯醇化酶(NSE),细胞随机分为正常组、NMDA组、内皮型一氧化氮合酶抑制剂(L... 目的:探讨humanin(HN)拮抗N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的兴奋性神经毒的作用及其可能的作用机制。方法:原代培养SD新生大鼠皮层神经元,免疫荧光检测神经元特异性烯醇化酶(NSE),细胞随机分为正常组、NMDA组、内皮型一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)组及HN组,分别采用MTT法、一氧化氮(NO)浓度测定、Hoechst染色及Western blotting检测各组细胞中细胞活性、NO浓度、细胞凋亡状况及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)的表达。结果:免疫荧光显示90%细胞为NSE阳性细胞,L-NAME组与HN组细胞活性均低于正常组而高于NMDA组,NO浓度、细胞凋亡数目及p-p38 MAPK的表达均高于正常组而低于NMDA组;L-NAME组与HN组相比,细胞活性降低,细胞凋亡数目及p-p38 MAPK的表达升高。结论:HN可部分通过抑制NO产生和p38 MAPK的激活而减少神经元的凋亡,从而发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 一氧化氮 humanin N-甲基-D-天冬氨酸 兴奋性神经毒性 细胞凋亡 神经元
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Humanin抑制NR1亚基表达和NR2B亚基磷酸化的神经保护作用 被引量:2
5
作者 翁启芳 龙儒桃 +2 位作者 许闽广 王丹妹 张策 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期907-911,I0001,共6页
目的:探讨Humanin(HN)通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将... 目的:探讨Humanin(HN)通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将神经元分为对照组、NMDA组、NMDA+MK-801(MK-801)组和NMDA+HN(HN)组。流式细胞术荧光定量检测各组神经元膜NMDA受体NR1亚基蛋白的表达,Western blotting法检测各组神经元膜NMDA受体NR2B亚基Tyr1472位点的磷酸化水平。结果:倒置相差显微镜观察,NMDA组中的神经元胞体肿胀,个别细胞变成圆形,胞体周围光晕模糊,神经元突起大部分消失,表现出明显的神经毒性作用。流式细胞术免疫荧光定量检测,与对照组比较,NMDA组NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显增加(P<0.05);与NMDA组比较,MK-801组和HN组的NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,各组神经元的NR2B亚基总蛋白的表达水平无改变;与对照组比较,NMDA组NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平明显升高(P<0.05);与NMDA组比较,MK-801组和HN组均能降低NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平(P<0.05)。结论:NMDA受体NR1亚基蛋白表达水平的增加和NR2亚基磷酸化可能参与NMDA诱导的兴奋性神经毒作用;HN可能通过抑制NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化而发挥对神经元的保护作用。 展开更多
关键词 humanin N-甲基-D-天门冬氨酸受体 NR1亚基 NR2B亚基 兴奋性神经毒
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[Gyl14]-Humanin对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响 被引量:3
6
作者 靳辉 胡海涛 +3 位作者 王唯析 冯改丰 李月英 杨维娜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期427-430,共4页
目的:探讨神经保护肽[Gly14]-Humanin过表达对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将重组真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNG-FLAG转入PC12细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,免疫细胞化学法分析[Gly14]-Humanin基因的表达... 目的:探讨神经保护肽[Gly14]-Humanin过表达对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将重组真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNG-FLAG转入PC12细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,免疫细胞化学法分析[Gly14]-Humanin基因的表达。用25μmol/LAβ25-35作用细胞24h,MTT法分析细胞存活率,流式细胞术(FCM)监测细胞凋亡,Hoechst33258染色观察凋亡细胞核形态改变。结果:建立了稳定过表达[Gly14]-Humanin的PC12细胞系。经25μmol/LAβ25-35作用后,稳定表达[Gly14]-Humanin的PC12细胞存活率较空质粒转染组明显提高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。Hoechst33258染色结果表明,空质粒转染组细胞核出现浓缩及断裂等凋亡形态,而过表达[Gly14]-Humanin组细胞核形态正常。结论:过表达[Gly14]-Humanin能够抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 [Gly14]-humanin 凋亡
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冠心病患者血清抗凋亡多肽Humanin水平变化的临床意义 被引量:8
7
作者 胡艳清 马建群 +3 位作者 冯真真 徐惠圃 卢琳 陈伟 《广东医学》 CAS 2018年第11期1686-1689,共4页
目的探讨抗凋亡多肽Humanin(HN)与不同类型冠心病(CHD)的关系及临床意义。方法选取首次发作胸痛并经冠状动脉造影(CAG)确诊的CHD患者86例(CHD组),其中稳定型心绞痛(SAP)28例(SAP组)、不稳定型心绞痛(UAP)25例(UAP组)、急性心肌梗死(AMI... 目的探讨抗凋亡多肽Humanin(HN)与不同类型冠心病(CHD)的关系及临床意义。方法选取首次发作胸痛并经冠状动脉造影(CAG)确诊的CHD患者86例(CHD组),其中稳定型心绞痛(SAP)28例(SAP组)、不稳定型心绞痛(UAP)25例(UAP组)、急性心肌梗死(AMI)33例(AMI组),单支病变26例、双支病变36例、多支病变24例,另选同期经CAG排除冠脉狭窄的胸痛患者58例作为对照组(NC组)。采用酶联免疫吸附试验测定血清HN水平。结果 (1)与NC组比较,CHD组及其各亚组患者血清HN水平均明显降低,且UAP组和AMI组患者血清HN水平显著低于SAP组,AMI组患者血清HN水平亦显著低于UAP组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)单支病变、双支病变、多支病变组间血清HN水平差异无统计学意义(P>0.05),且CHD组患者血清HN水平与Gensini积分无相关性(P>0.05)。(3)CHD组患者血清HN与HDL-C水平呈正相关(P<0.05),而与TC、LDL-C、Lp(a)、TG、CK-MB、c Tn I无显著相关性(P>0.05)。结论 HN血清学水平的降低,可能参与动脉粥样硬化(AS)的发生、发展及斑块的破裂破溃,是冠心病的潜在保护因素,有望成为延缓AS和早期防治CHD的药物治疗新靶点。 展开更多
关键词 抗凋亡多肽humanin 冠心病 动脉粥样硬化 GENSINI积分
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Humanin拮抗Aβ_(31-35)诱导的神经元凋亡 被引量:1
8
作者 李灵敏 刘青华 +2 位作者 张宇 乔健天 张策 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期626-630,共5页
为了研究Humanin(HN)对Aβ31-35诱导的大鼠皮层神经元凋亡的影响,本研究采用原代培养的大鼠皮层神经元,应用流式细胞术、TUNEL法、HO33342染色法检测不同时间(0、8、16h)加入不同浓度的HN对Aβ31-35致神经元凋亡的影响。结果显示:Aβ31-... 为了研究Humanin(HN)对Aβ31-35诱导的大鼠皮层神经元凋亡的影响,本研究采用原代培养的大鼠皮层神经元,应用流式细胞术、TUNEL法、HO33342染色法检测不同时间(0、8、16h)加入不同浓度的HN对Aβ31-35致神经元凋亡的影响。结果显示:Aβ31-35(25μmol/L)引起培养皮层神经元的凋亡率明显增高,神经元凋亡率由7.43%上升到32.69%;凋亡指数由6.87%上升到28.36%(P<0.05)。与Aβ31-35同时或提前8h给予不同浓度(5,10,20μmol/L)的HN对Aβ31-35(25μmol/L)诱导的神经元凋亡均未产生影响;但20μmol/L的HN提前16h孵育可明显抑制Aβ31-35所致的神经元凋亡,其凋亡率由32.69%下降到20.36%,凋亡指数由28.36%下降到17.57%。本研究结果提示,HN拮抗Aβ31-35致神经元凋亡作用具有剂量和时间依赖性。 展开更多
关键词 humanin Aβ31-35 凋亡流式细胞术TUNEL大鼠
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S14G-Humanin对Aβ_(31-35)所致大鼠行为学及神经元凋亡的影响 被引量:2
9
作者 郭林芝 李灵敏 张策 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期164-168,共5页
目的:研究S14G-Humanin对Aβ31-35所致大鼠行为学及神经元凋亡的影响。方法:SD大鼠60只随机分为5组,经侧脑室分别注入生理盐水(对照组)、Aβ31-35(Aβ31-35组),Aβ31-35+HNG(0.01 mmol/L),Aβ31-35+HNG(0.1 mmol/L)和Aβ31-35+HNG(1 mmo... 目的:研究S14G-Humanin对Aβ31-35所致大鼠行为学及神经元凋亡的影响。方法:SD大鼠60只随机分为5组,经侧脑室分别注入生理盐水(对照组)、Aβ31-35(Aβ31-35组),Aβ31-35+HNG(0.01 mmol/L),Aβ31-35+HNG(0.1 mmol/L)和Aβ31-35+HNG(1 mmol/L)。注射第7 d行Morris水迷宫实验观察各组大鼠的行为学改变;注射12 d后处死大鼠,应用TUNEL法检测各组海马神经元的凋亡情况,应用免疫组化法检测神经元caspase-3的表达。结果:与对照组相比,Aβ31-35组大鼠的学习、记忆能力明显下降(P<0.05),Aβ31-35+HNG(0.1,1 mmol/L)组大鼠的学习、记忆能力有所改善,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(P<0.05)。Aβ31-35组海马神经元的凋亡指数及caspase-3阳性细胞数均高于正常对照组,Aβ31-35能引起大鼠海马神经元的凋亡及学习、记忆能力的下降;Aβ31-35+HNG(1,0.1,0.01 mmol/L)组凋亡指数及caspase-3阳性细胞数均明显下降,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:S14G-Humanin对Aβ31-35诱导的大鼠海马神经元凋亡及行为学改变具有保护作用。 展开更多
关键词 Aβ31-35 S14G-humanin 凋亡 行为学 大鼠
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Humanin对谷氨酸诱导大鼠脊髓神经元兴奋性损伤的影响 被引量:1
10
作者 叶蓓 陈建珍 +1 位作者 张立光 贺芳 《山东医药》 CAS 2014年第22期26-28,共3页
目的 探讨Humanin(HN)对体外培养的大鼠脊髓神经元兴奋性损伤的保护作用。方法 选取Wistar 14~17 d胎鼠的脊髓神经元进行原代培养,将其分为三组,分别为对照组、损伤组、HN干预组。对照组不加入任何药物作用;损伤组加入谷氨酸建立... 目的 探讨Humanin(HN)对体外培养的大鼠脊髓神经元兴奋性损伤的保护作用。方法 选取Wistar 14~17 d胎鼠的脊髓神经元进行原代培养,将其分为三组,分别为对照组、损伤组、HN干预组。对照组不加入任何药物作用;损伤组加入谷氨酸建立脊髓神经元兴奋性损伤模型;HN干预组则加入HN及谷氨酸。光镜下观察三组大鼠脊髓神经元的形态学差异,显微测量神经元胞体直径、突起数和最长突起长度。应用MTT法测定D570值评价神经元存活率,测定D340值评价LDH释放量。结果 损伤组细胞结构改变严重,胞体皱缩,突起较多已经断裂,不能形成网络,出现破裂死亡细胞。 HN干预组神经元出现轻微形态变化,大多数神经元突起完好。损伤组D570值低于对照组,HN干预组D570值高于损伤组(P均<0.05)。损伤组 D340值高于对照组,HN干预组D340值高于损伤组(P均<0.05)。损伤组神经元胞体直径、突起数目及最长突起长度均低于对照组(P均<0.05)。结论 HN对脊髓神经元兴奋损伤有较强的保护作用。 展开更多
关键词 脊髓 神经元 谷氨酸 humanin 神经保护
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血清FGF-21和抗凋亡多肽Humanin与冠心病病理进程的相关性 被引量:2
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作者 林立中 吴建华 夏先考 《中国卫生标准管理》 2020年第11期114-117,共4页
目的研究血清成纤维细胞生长因子21(FGF-21)和抗凋亡多肽Humanin(anti-apoptotic polypeptide Humanin,HN)与冠心病(coronary heart disease,CHD)病理进程的关系。方法回顾性分析2017年2月-2019年2月间于本院94例CHD患者(观察组)和47例... 目的研究血清成纤维细胞生长因子21(FGF-21)和抗凋亡多肽Humanin(anti-apoptotic polypeptide Humanin,HN)与冠心病(coronary heart disease,CHD)病理进程的关系。方法回顾性分析2017年2月-2019年2月间于本院94例CHD患者(观察组)和47例无冠脉狭窄患者(对照组)临床资料,比较两组患者血清FGF-21与HN水平。记录稳定性心绞痛(stable angina pectoris,SAP)、不稳定性心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)及急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)三组例数。分析血清GFG-21、HN与冠心病发生发展病理进程的关系。结果观察组患者血清FGF-21显著高于对照组,HN显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。94例CHD患者中SAP 40例,UAP 28例,AMI 26例。不同病理分型CHD患者HN水平差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示血清FGF-21与Gensini具有良好的相关性(r=0.353,P=0.000)。ROC分析结果显示血清FGF-21判断CHD的AUC为0.899(S.E.=0.029,95%CI=0.841~0.956,P=0.000),灵敏度为0.809,特异度为0.851,最佳截断值为308.5 pg/mL。ROC分析结果显示HN判断UAP或AMI的AUC为0.787(S.E.=0.051,95%CI=0.687~0.887,P=0.000),灵敏度0.815,特异度为0.75,最佳截断值为1.995 ng/mL。结论检测血清FGF-21有助于CHD早期筛查和冠脉狭窄程度的判断,而HN监测有助于预测心血管事件的发生,为临床提供参考。 展开更多
关键词 血清FGF-21 抗凋亡多肽humanin 冠心病 病理进程 关联性 鉴定引导
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S14G-humanin restored cellular homeostasis disturbed by amyloid-beta protein 被引量:1
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作者 Xue Li Wencong Zhao +2 位作者 Hongqi Yang Junhong Zhang Jianjun Ma 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第27期2573-2580,共8页
Humanin is a potential therapeutic agent for Alzheimer’s disease, and its derivative, S14G-humanin, is 1 000-fold stronger in its neuroprotective effect against Alzheimer’s disease-relevant insults. Alt-hough effect... Humanin is a potential therapeutic agent for Alzheimer’s disease, and its derivative, S14G-humanin, is 1 000-fold stronger in its neuroprotective effect against Alzheimer’s disease-relevant insults. Alt-hough effective, the detailed molecular mechanism through which S14G-humanin exerts its effects remains unclear. Data from this study showed that fibril ar amyloid-beta 40 disturbed cel ular ho-meostasis through the cel membrane, increasing intracel ular calcium, generating reactive oxygen species, and decreasing the mitochondrial membrane potential. S14G-humanin restored these re-sponses. The results suggested that S14G-humanin blocked the effects of amyloid-beta 40 on the neuronal cel membrane, and restored the disturbed cel ular homeostasis, thereby exerting a neuroprotective effect on hippocampal neurons. 展开更多
关键词 neural regeneration Alzheimer's disease amyloid-beta protein wild type humanin S14G-humanin re-active oxygen species mitochondrial membrane potential grants-supported paper NEURODEGENERATION NEUROREGENERATION
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新型神经保护肽[Gly14]-Humanin的表达,纯化和活性鉴定(英文)
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作者 于保锋 解军 +4 位作者 陈显久 张悦红 王惠珍 程牛亮 牛勃 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期21-26,共6页
Humanin(HN)是近年来在人体内发现的内源性多肽,能够保护神经细胞免于各种阿尔茨海默氏病相关因素诱导的凋亡,HN肽链第14位氨基酸被Gly取代的突变体[Gly14]-Humanin(HNG),神经保护活性比HN高了近1000倍。但由于HNG天然获取的途径有限,... Humanin(HN)是近年来在人体内发现的内源性多肽,能够保护神经细胞免于各种阿尔茨海默氏病相关因素诱导的凋亡,HN肽链第14位氨基酸被Gly取代的突变体[Gly14]-Humanin(HNG),神经保护活性比HN高了近1000倍。但由于HNG天然获取的途径有限,限制了对其功能的进一步研究。构建了HNG的表达质粒pET32a/HNG,并将其转化大肠杆菌BL21trxB(DE3),诱导表达后HNG以可溶性融合蛋白的形式出现并用镍离子亲和层析纯化,纯化的融合蛋白用肠激酶切割后经反相层析得到纯化的HNG多肽(23mg每1L细菌培养液),重组HNG多肽的分子量经电喷雾电离质谱(ESI-MS)检测为2876.5道尔顿,其N末端8个氨基酸残基的序列经Edman降解法测定为A-M-M-A-P-R-G-F,均与理论值一致。神经细胞保护实验表明,重组HNG多肽的神经保护作用与天然的HNG相近。 展开更多
关键词 神经保护 [Gly14]—humanin(HNG) 表达
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Humanin对缺氧诱导的大鼠皮层神经元损伤的保护作用
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作者 赵珅婷 赵丽 +1 位作者 乔健天 张策 《中西医结合心脑血管病杂志》 2010年第2期197-199,共3页
目的观察Humanin(HN)对缺氧诱导皮层神经细胞损伤的保护作用。方法培养10d的原代皮层神经元在缺氧环境下(氧含量<2%)放置4h诱导神经细胞损伤。实验组在缺氧之前24h分别加入终浓度为10μmol/L和20μmol/L的HN。通过测定MTT和Calcein-A... 目的观察Humanin(HN)对缺氧诱导皮层神经细胞损伤的保护作用。方法培养10d的原代皮层神经元在缺氧环境下(氧含量<2%)放置4h诱导神经细胞损伤。实验组在缺氧之前24h分别加入终浓度为10μmol/L和20μmol/L的HN。通过测定MTT和Calcein-AM染色检测细胞活力。通过测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化检测细胞损伤的程度。结果HN可以提高缺氧4h后细胞的存活率,同时可以降低由细胞损伤所引起的MDA、SOD、LDH的升高。20μmol/L的HN具有比10μmol/L更显著的保护作用。结论HN对缺氧诱导的神经元细胞损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 humanin 缺氧 MTT Calcein—AM 丙二醛 超氧化物歧化酶 乳酸脱氢酶
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Humanin对实验性阿尔茨海默病小鼠海马小胶质细胞OX-42表达的影响
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作者 张新宇 尹榕 +2 位作者 付学锋 赵波 万东君 《中华老年多器官疾病杂志》 2012年第4期269-272,共4页
目的探讨Humanin(HN)在体内是否存在对实验性阿尔茨海默病(AD)小鼠的神经保护作用以及可能的机制。方法采用β-淀粉样蛋白(Ap)脑内注射方法建立AD模型。健康雄性小鼠60只,随机分为假手术组(n=15)、AB模型组(n=15)和HN治疗组... 目的探讨Humanin(HN)在体内是否存在对实验性阿尔茨海默病(AD)小鼠的神经保护作用以及可能的机制。方法采用β-淀粉样蛋白(Ap)脑内注射方法建立AD模型。健康雄性小鼠60只,随机分为假手术组(n=15)、AB模型组(n=15)和HN治疗组(n=30)。应用免疫组织化学方法于造模后3,7,14d观察海马小胶质细胞OX-42表达的变化;Nissl染色方法检测3组动物海马区病理改变。结果OX-42免疫组织化学染色显示,与AB模型组比较,HN治疗组造模后3,7,14d海马OX-42阳性细胞的表达均减少(P〈0.05);A13模型组、HN治疗组在手术后各时间点Nissl染色均可见海马区病理改变,HN治疗组在相同时间点炎性的病理变化弱于Aβ模型组。结论在活体内,HN可以减少Aβ25-35毒性引起的OX-42的表达,具有神经保护作用。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 humanin多肽 小胶质细胞
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[Gly14]-Humanin的基因克隆及序列测定
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作者 靳辉 王唯析 +3 位作者 杨广笑 王全颖 胡海涛 韩太真 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期120-122,共3页
目的利用基因工程方法对[Gly14]-Humanin进行基因克隆并测定其序列,为进一步对阿尔茨海默病进行基因治疗奠定基础。方法采用非对称互补引物/模板法,制备两端含有酶切位点的[Gly14]-Humanin的cDNA,将其克隆入pVAXI载体中并测序。结果经... 目的利用基因工程方法对[Gly14]-Humanin进行基因克隆并测定其序列,为进一步对阿尔茨海默病进行基因治疗奠定基础。方法采用非对称互补引物/模板法,制备两端含有酶切位点的[Gly14]-Humanin的cDNA,将其克隆入pVAXI载体中并测序。结果经酶切鉴定、测序分析,表明所插入的基因片断为[Gly14]-Humanin基因,与设计完全相同。结论成功地克隆了[Gly14]-Humanin基因。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 [Gly14]-humanin 基因克隆 序列测定
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炎症反应在S14G-Humanin拮抗Aβ31-35所致大鼠行为学改变中的作用
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作者 郭林芝 乔爱秀 +1 位作者 李灵敏 张策 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期375-379,共5页
目的:以小胶质细胞形态和功能的改变为观察指标,探究炎症反应在S14G-Humanin(HNG)拮抗Aβ31-35所致大鼠行为学改变中的神经保护作用。方法:SD大鼠60只随机分为5组,经侧脑室分别注入生理盐水(对照组)、Aβ31-35(Aβ31-35组)、Aβ31-35+HN... 目的:以小胶质细胞形态和功能的改变为观察指标,探究炎症反应在S14G-Humanin(HNG)拮抗Aβ31-35所致大鼠行为学改变中的神经保护作用。方法:SD大鼠60只随机分为5组,经侧脑室分别注入生理盐水(对照组)、Aβ31-35(Aβ31-35组)、Aβ31-35+HNG(0.01 mmol/L)、Aβ31-35+HNG(0.1 mmol/L)、Aβ31-35+HNG(1 mmol/L)。注射第7 d行Morris水迷宫实验观察各组大鼠的行为学改变;注射12 d后处死大鼠,运用免疫组化法检测海马及皮层的激活小胶质细胞的数量,采用ELISA法检测大鼠海马及皮层组织IL-6的含量。结果:与对照组相比,Aβ31-35组大鼠的学习、记忆能力明显下降(P<0.05),Aβ31-35+HNG(0.1,1 mmol/L)组大鼠的学习、记忆能力有所改善,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Aβ31-35组的激活小胶质细胞数及IL-6的含量在皮层及海马组织中均增加(P<0.05);与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG(0.01,0.1,1 mmol/L)组皮层及海马的激活小胶质细胞数及IL-6的含量均减少(P<0.05)。结论:S14G-Humanin对Aβ31-35诱导的大鼠行为学改变具有保护作用,而抑制Aβ31-35诱导的小胶质细胞激活产生的炎症反应可能是HNG拮抗Aβ神经毒的机理之一。 展开更多
关键词 Aβ31-35 S14G-humanin 行为学研究 炎症 小胶质细胞 大鼠
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Humanin通过JNK途径减轻Aβ_(31-35)诱导的皮层神经元的凋亡
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作者 李灵敏 乔建天 张策 《山西医科大学学报》 CAS 2009年第10期871-873,F0003,共4页
目的研究JNK信号通路在Aβ31-35诱导神经元凋亡中的作用以及Humanin(HN)的神经保护机制。方法原代培养大鼠皮层神经元随机分为对照组、Aβ31-35组(1h,4h,8h,16h,24h)、抑制剂SP600125组、HN预处理组。应用流式细胞术观察各组神经元凋亡... 目的研究JNK信号通路在Aβ31-35诱导神经元凋亡中的作用以及Humanin(HN)的神经保护机制。方法原代培养大鼠皮层神经元随机分为对照组、Aβ31-35组(1h,4h,8h,16h,24h)、抑制剂SP600125组、HN预处理组。应用流式细胞术观察各组神经元凋亡率,应用免疫细胞化学法观察各组磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和FasL蛋白表达情况。结果对照组仅有少数神经元发生凋亡;Aβ31-35诱导培养皮层神经元异常凋亡;JNK抑制剂SP600125抑制了Aβ31-35诱导的神经元凋亡;HN(20μmol/L)16h预孵育部分抑制了Aβ31-35的致凋亡作用,各组神经元凋亡率分别为7.43%,32.6%(24h),8.8%,20.36%。对照组仅有少量p-c-Jun及FasL蛋白的表达;Aβ31-35时间依赖性诱导了p-c-Jun、FasL蛋白的表达;SP600125抑制了Aβ31-35诱导的p-c-Jun、FasL蛋白的表达;20μmol/LHN16h预孵育部分抑制了p-c-Jun及FasL蛋白的表达。结论JNK通路可能参与了Aβ31-35诱导的神经元凋亡过程;HN可在一定程度上阻抑JNK信号通路,减轻Aβ31-35诱导的神经元凋亡。 展开更多
关键词 humanin Aβ31-35 JNK 神经保护
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Humanin对STZ诱导培养的皮层神经细胞损伤的保护作用
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作者 马国英 杨小荣 +4 位作者 赵欣 赵晋枫 秦华平 史瑞红 张策 《中西医结合心脑血管病杂志》 2010年第12期1482-1483,共2页
目的研究Humanin(HN)对链脲佐菌素(STZ)诱导原代培养皮层神经元损伤是否具有保护作用。方法采用常规原代皮层神经细胞培养的方法,通过检测CCK-8,乳酸脱氢酶(LDH)释放检测和calcein-AM染色情况,观察HN对STZ诱导的神经细胞损伤的保护作用... 目的研究Humanin(HN)对链脲佐菌素(STZ)诱导原代培养皮层神经元损伤是否具有保护作用。方法采用常规原代皮层神经细胞培养的方法,通过检测CCK-8,乳酸脱氢酶(LDH)释放检测和calcein-AM染色情况,观察HN对STZ诱导的神经细胞损伤的保护作用。结果 HN可以拮抗STZ诱导的细胞损伤,包括细胞活力的增加,LDH释放的减少和活细胞数目的增加。结论 HN可以拮抗STZ诱导的培养皮层神经细胞损伤作用。 展开更多
关键词 神经细胞损伤 链脲佐菌素 humanin
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S14G-humanin对β-淀粉样蛋白纤维化及其细胞毒性的影响
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作者 毛妮 刘柳 +3 位作者 刘睿 李柱一 张巍 苗建亭 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2011年第1期10-13,共4页
目的探讨S14G-humanin(HNG)对β-淀粉样蛋白(Aβ)纤维化及其细胞毒性的影响。方法于体外将Aβ1-42和不同浓度HNG共孵育,并设空白对照,应用硫黄素-T(Th-T)荧光法和透射电镜方法,观察HNG对Aβ1-42纤维化的作用;将Aβ1-42和不同浓度HNG共... 目的探讨S14G-humanin(HNG)对β-淀粉样蛋白(Aβ)纤维化及其细胞毒性的影响。方法于体外将Aβ1-42和不同浓度HNG共孵育,并设空白对照,应用硫黄素-T(Th-T)荧光法和透射电镜方法,观察HNG对Aβ1-42纤维化的作用;将Aβ1-42和不同浓度HNG共孵育后加入培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(PC12细胞),应用MTT法测定PC12细胞活性,观察不同浓度HNG对Aβ1-42细胞毒性的拮抗作用。结果 (1)不同浓度HNG(100、200、400μmol/L)+Aβ1-42(100μmol/L)组Th-T荧光强度(241.86±8.41,188.27±4.47,112.36±5.27)均较Aβ1-42组(514.85±14.52)显著降低(P<0.01),且各组Th-T荧光强度随HNG浓度增加而降低,各组间比较有统计学差异(P<0.01)。(2)透射电镜观察表明不同浓度HNG+Aβ1-42组纤维性Aβ均较Aβ1-42组显著减少。(3)不同浓度HNG(10、20、40μmol/L)+Aβ1-42(10μmol/L)组PC12细胞活性〔(67.83±3.57)%、(79.26±3.13)%、(89.67±3.25)%〕均较Aβ1-42组〔(57.52±5.41)%〕显著增加(P<0.01),且各组细胞活性随HNG浓度增加而增加,各组间比较有统计学差异(P<0.01)。结论 HNG在体外能够有效减少纤维性Aβ1-42形成并可抑制其细胞毒性作用,提示HNG有可能成为有效防治阿尔茨海默病的新药物。 展开更多
关键词 Β-淀粉样蛋白 阿尔茨海默病 S14G-humanin 透射电镜 硫黄素-T
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