Effect of Qi-protecting powder (Huqi San) on expression of c-jun, c-fos and c-myc in diethylnitrosamine-mediated hepatocarcinogenesis

To study the inhibitory effect of Huqi San （Qi- protecting powder） on rat prehepatocarcinoma induced by diethylinitrosamine （DEN） by analyzing the mutational activation of c-fos proto-oncogene and over-expression of c-jun and c-myc oncogenes. METHODS： A Solt-Farber two-step test model of prehepatocarcinoma was induced in rats by DEN and 2-acetylaminofluorene （AAF） to investigate the modifying effects of Huqi San on the expression of c-jun, c-fos and c-myc in DEN-mediated hepatocarcinogenesis. Huqi San was made of eight medicinal herbs containing glycoprival granules, in which each milliliter contains 0.38 g crude drugs. T-glutamy-transpeptidase-isoenzyme （T-GTase） was determined with histochemical methods. Level of 8-hydroxydeoxyguanosine （OHdG） formed in liver and c-jun, c-fos and c-myc proto-oncogenes were detected by immunohistochemical methods. RESULTS： The level of 8-OHdG, a mark of oxidative DNA damage, was significantly decreased in the liver of rats with prehepatocarcinoma induced by DEN who received 8 g/kg body weight or 4 g/kg body weight Huqi San before （1 wk） and after DEN exposure （4 wk）. Huqi San- treated rats showed a significant decrease in number of T-GT positive foci （P 〈 0.001, prevention group： 4.96-0.72 vs 29.46-2.17; large dose therapeutic group： 7.53-0.88 vs 29.46-2.17）. On the other hand, significant changes in expression of c-jun, c-fos and c-myc were found in Huqi San-treated rats. CONCLUSION： Activation of c-jun, c-fos and c-myc plays a crucial role in the pathogenesis of liver cancer.Huqi San can inhibit the over-expression of c-jun, c-fos and c-myc oncogenes and liver preneolastic lesions induced by DEN.

基于网络药理学和分子对接探讨槲芪散治疗原发性肝癌作用机制

目的:基于网络药理学和分子对接技术探讨槲芪散治疗原发性肝癌的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库获取槲芪散的活性成分,利用GeneCards、OMIM及PharmGkb数据库筛选原发性肝癌相关基因,并采用R软件获取药物-疾病交叉靶点。采用Cytoscape3.7.2软件对药物-疾病交叉靶点与活性成分进行槲芪散活性成分-靶点-原发性肝癌网络构建,筛选出核心成分。采用STRING平台对于药物-疾病交叉靶点进行蛋白质–蛋白质相互作用(PPI)网络分析,通过MCODE插件进行聚类分析以获得与原发性肝癌患者预后相关的关键靶点,并通过TCGA数据库的原发性肝癌队列对关键靶点进行预后分析。采用R语言软件包对作用靶点进行基因本体论(GO)生物功能分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并利用AutoDock Vina1.1.2软件对主要活性成分与关键靶点进行分子对接验证。结果:共筛选出槲芪散活性成分113个,作用靶点226个,1765个疾病靶点,预测得到116个抗原发性肝癌靶点。槲芪散治疗原发性肝癌的关键成分有槲皮素、山柰酚、木犀草素、柚皮素、丹参酮ⅡA等。PPI网络显示,雌激素受体1(ESR1)、半胱氨酶蛋白酶3(CASP3)、肿瘤蛋白53(TP53)、B细胞淋巴瘤2(BCL2)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、Fos原癌基因(FOS)、蛋白激酶B1(AKT1)和热休克蛋白90α家族A成员1(HSP90AA1)为槲芪散治疗原发性肝癌的关键靶点。预后分析显示,ESR1、CASP3、MAPK3、AKT1以及HSP90AA1的表达与原发性肝癌患者的生存时间密切相关。富集分析揭示,槲芪散主要富集在化学应激的细胞反应、活性氧化物的反应、脂多糖的反应以及对异物刺激的反应等细胞过程中发挥作用,能够调控磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路及肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等多条信号通路发挥治疗作用。分子对接显示,关键靶点TP53、AKT1、STAT3、ESR1、MAPK1与柚皮素、山柰酚、槲皮素以及木犀草素能够稳定结合。结论:槲芪散中的柚皮素、山柰酚、槲皮素及木犀草素等成分能够作用于AKT1、ESR1、CASP3、MAPK3等多靶点,通过调控PI3K-AKT信号通路、IL-17信号通路等发挥治疗原发性肝癌的作用。

槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶、血管内皮生长因子、乏氧及免疫功能的影响

目的:研究槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、乏氧及免疫功能的影响。方法:50只大鼠中随机抽取12只作为健康组进行对照,37只大鼠建立肝癌模型。建模过程中意外死亡1只大鼠,剩余36只大鼠建模成功,随机分为模型组、肝动脉化疗栓塞术组以及联合组,每组12只。肝动脉化疗栓塞术组给予肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗;联合组在肝动脉化疗栓塞术组基础上给予模型大鼠27 ml/kg槲芪方灌胃,2次/d,共24周。运用全自动生化分析仪检测各组大鼠肝功能指标水平,流式细胞仪检测各组大鼠免疫功能指标水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理变化,原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠肝癌细胞凋亡,免疫印迹检测各组大鼠VEGF、iNOS、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达。结果:与健康组比较,模型组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均高于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05),模型组与联合组比较差异无统计学意义(P>0.05),与模型组及联合组比较,肝动脉化疗栓塞术组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05)。与健康组比较,模型组细胞凋亡率升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率低于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与肝动脉化疗栓塞术组比较,联合组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均降低(P<0.05)。结论:槲芪方加减可提高肝癌TACE术后大鼠的免疫功能,通过抑制肝癌大鼠乏氧微环境中HIF-1α、iNOS及VEGF水平,改善乏氧微环境,促进肿瘤细胞凋亡。

槲芪散可通过激活Hedgehog信号通路抑制大鼠肝癌前病变的形成

目的:探讨槲芪散是否通过调控Hedgehog信号通路抑制大鼠肝癌前病变的机制。方法:采用改良的Solt-Farber二步法复制大鼠肝癌前病变模型,于肝大部切除术后3 d开始给予槲芪散(8 g/kg)灌胃治疗,4周后收集血清和肝脏标本。分别采用HE染色、免疫组织化学、免疫荧光染色、Western blot、实时荧光定量PCR等方法,观察肝脏病理变化,检测肝组织谷胱甘肽S-转移酶π(glutathione S-transferase-π,GST-π)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、OV6、白蛋白(albumin,ALB)、Hedgehog信号分子Shh、Smo、Gli2及下游靶分子cyclin D、cyclin E的表达水平;利用比色法检测血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyltransferase,GGT)水平;给予Hedgehog信号通路抑制剂环杷明观察槲芪散在体外对肝卵圆细胞的影响。结果:与模型组比较,槲芪散可降低肝癌前病变大鼠血清ALT、AST和GGT水平,减轻肝癌前病变大鼠肝脏的病理变化,降低肝癌前病变标志物GST-π和AFP的表达;槲芪散可促使肝卵圆细胞标志物OV6和肝细胞标志物ALB的表达;槲芪散可激活肝脏Hedgehog信号通路,增加Shh、Smo、Gli2及其下游靶分子cyclin D、cyclin E的表达。结论:中药复方槲芪散可通过激活Hedgehog信号通路促进肝前体细胞增殖和诱导肝前体细胞向肝细胞分化,抑制肝癌前病变的形成,促进肝脏修复。

方剂槲芪散及君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨方剂槲芪散(HQS)及其君药槲寄生提取物多糖和总碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度的影响.方法：采用MTT法测定药物槲芪散(0.3125,0.625,1.25g/L),槲寄生多糖(0.625,1.25,2.5,5g/L)及槲寄生总碱(3,6,12g/L)作用48,72及96h对细胞(密度1×10\+8/L)增殖的体外抑制作用；利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡；利用激光共聚焦显微镜测定细胞内活性氧浓度.结果：MTT结果显示HOS及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增殖的作用,呈现出时间.剂量依赖性,高剂量组除了HOS和槲寄生总碱48h时间点外,A值均较对照组明显降低(HOS72h：1.022±0.13 vs 1.207±0.04,P＜0.01：96h：1.235±0.20 vs 1.602±0.05,P＜0.01；槲寄生多糖48h：0.570±0.03 vs 0.744±0.01,P＜0.01；72h：0.803±0.04 vs 1.207±0.04,P＜0.01：96h：0.860±0.13 vs 1.602±0.05,P＜0.01；槲寄生总碱72h：0.919±0.14 vs 1.233±0.04,P＜0.01；96h：0.701±0.07 vs 1.819±0.04,P＜0.01).流式细胞仪检测发现,与对照组相比,经药物作用72h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加(81.0%,86.9% vs 70.0%,P＜0.01),S期(5.9%,7.4% vs 13,5%,P＜0.01)和G2期(13.1%,5.7% vs 16.4%,P＜0.01)比例降低,HOS组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低(1.5% vs 13.5%,P＜0.01),G2期比例增加(28.2% vs 16.4%,P＜0.01)；三者均使细胞凋亡增加(HQS：14.8% vs 6.0%,P＜0.01；槲寄生多糖：11.7% vs 6.0%,P<0.01；总碱：6.7% vs 6.0%,P＜0.05).激光共聚焦显微镜检测发现,当细胞内荧光强度呈现不断升高趋势时,加入3种药物后,荧光强度瞬间下降,然后稳定在一低水平,未见明显波动.当荧光开始稳定在一基线时,加入槲寄生总碱,荧光强度陡然增强后又迅速下降到低水平,并维持一段时间,而加入HQS及槲寄生多糖未见此变化.结论：HQS、槲寄生多糖和总碱均能抑制肝癌细胞增殖并促进凋亡.

槲芪散及槲寄生提取物对肝癌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨方剂槲芪散及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法采用MTT法测定槲芪散对细胞增生的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度。结果槲芪散及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增生的作用,高剂量组除了槲芪散和槲寄生总碱48 h时间点外,OA值均较对照组明显降低(P<0.001),呈现出时间-剂量依赖性;经药物作用48 h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期细胞和G2期细胞比例降低,槲芪散组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,3者均使细胞凋亡增加;加入不同浓度的槲芪散、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余2组未见明显下降趋势。结论槲芪散、槲寄生多糖及总碱均能抑制肿瘤细胞增生,促进细胞凋亡,且这3种药物引起胞内钙超载可能是诱导HepG2凋亡的机制之一。

槲芪散及其君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响

目的:研究槲芪散及其君药槲寄生对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的槲芪散及其君药槲寄生提取物作用于人肝癌细胞(SMMC-7721)后,用四甲基偶氮唑比色法(MTT)检测SMMC-7721细胞增殖。用实时荧光定量PCR法检测SMMC-7721的端粒酶活性。结果:(1)MTT结果显示槲芪散、槲寄生多糖和总碱能抑制SMMC-7721细胞,随药物作用时间的延长作用增强。(2)槲芪散、槲寄生多糖和槲寄生总碱能明显降低SMMC-7721端粒酶的活性。结论:槲芪散及槲寄生多糖和总碱均能抑制SMMC-7721增殖,降低SMMC-7721端粒酶的活性。

槲芪散及其君药槲寄生对大鼠肝癌前病变组织中促凋亡因子Omi/HtrA2表达的影响

目的:探讨槲芪散及其君药槲寄生干预肝癌前病变组织中癌细胞凋亡机制。方法:用电镜观察模型组、正常组以及槲芪散大小剂量组、槲寄生单体组肝细胞线粒体形态学的变化,用免疫组化SP法、Western Blotting法检测各实验组大鼠肝组织丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的表达。结果:槲芪散治疗组肝细胞线粒体形态较模型组有明显改善;除正常组外,模型组,槲芪散大、小剂量治疗组,槲寄生单体组均有Omi/HtrA2的表达,模型组、正常组、大剂量治疗组、单体组之间丝氨酸蛋白酶的表达量有统计学意义(P<0.05)。结论:槲芪散及其君药槲寄生能够改善肝细胞线粒体的形态和功能,降低Omi/HtrA2总量的表达,并且促使Omi/HtrA2从线粒体释放,诱导肝癌细胞的凋亡。

茄子新品种沪茄二号和沪茄三号选育

沪茄二号和沪茄三号是适宜国内外茄子设施栽培地区和露地种植的优良茄子杂交一代。沪茄二号单果重153.0 g,每株座果数18.7个。沪茄三号单果重166.5 g,每株座果数16.1个。以上两个杂交一代均表现早熟,果实长棒形,果皮深紫黑色,光泽强,果形直,商品性优良,果实干物质含量和可溶性总糖高,持续结果能力强,前期产量和总产量高等优良综合性状。

虎七散通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制自噬的机制研究

目的探讨虎七散对食管鳞癌Eca109的抑制作用及机制。方法采用STITCH进行蛋白互作进行蛋白靶点预测,用不同剂量虎七散(30、40 mg/mL)处理人食管鳞癌Eca109细胞24 h,CCK8检测其OD值;采用Western blotting检PI3K、m TOR、Caspase-3蛋白的表达。结果虎七散(30、40 mg/mL)可以抑制食管癌细胞的迁移,通过蛋白互做网络分析与PI3K/Akt/mTOR关系密切,Western blotting结果显示,虎七散(30、40 mg/mL)可以抑制PI3K、mTOR蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达。结论虎七散可以通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,诱导食管鳞癌细胞发生自噬,这可能是虎七散抑制食管鳞癌细胞的原因之一。

虎七散联合化疗治疗中晚期痰瘀互结型食管癌的临床研究

目的观察虎七散联合化疗治疗中晚期痰瘀互结型食管癌的近期和远期疗效,初步研究虎七散联合化疗对比单纯化疗的疗效差异性。方法采用前瞻性、多中心、随机对照研究,将符合标准的86例患者按照随机数字表法随机分为对照组和治疗组各43例。主要观察指标为无进展生存期(Progression Free Survival,PFS)、疾病控制率(Disease Control Rate,DCR)和临床症状积分,次要观察指标为体力状况评分(KPS评分)及毒副反应。研究终点为疾病进展或各种原因导致的死亡。结果1.治疗组中位PFS为6.8(4.464~9.136)月,对照组中位PFS为4.8(2.469~7.131)月,差异无统计学意义(P>0.05)。2.治疗组DCR为81.4%,对照组DCR为60.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。3.在临床症状积分方面,治疗后两组总积分有显著差异,治疗组优于对照组;治疗组在改善吞咽困难、呕吐带血、呕吐痰涎以及舌苔方面更有优势(P<0.05)。4.在KPS评分方面,治疗组的治疗后评分显著高于治疗前(P<0.05)。治疗后治疗组评分显著高于对照组(P<0.05)。5.在毒副反应方面,出现的主要毒副反应为白细胞减少、胃肠道反应以及脱发等,未出现其它明显不良反应。治疗后两组出现的各毒副反应无明显差异(P>0.05)。治疗组出现Ⅲ~Ⅳ度毒副反应的例数少于对照组,提示虎七散联合化疗可能有降低毒副反应发生的趋势。结论虎七散联合TP方案治疗中晚期痰瘀互结型食管癌较单纯化疗更有优势,主要体现在疾病控制率、中医症状和KPS评分的改善方面,可在临床中推广应用。

《聊斋》丛脞录——说《夜叉国》、《狐妾》、《公孙九娘》

《聊斋志异》内容丰富,"用传奇法而以志怪",但作者蒲松龄撰写小说并非天马行空,全凭虚构,许多篇章关乎地理、人物、历史事件乃至涉及明清某些法律因素,皆非杜撰。尽量熟谙有关传统文化知识或历史掌故,是今人正确解读《聊斋志异》的前提之一。今天我们为《聊斋志异》作注释,虽仍然难以面面俱到,但对于一些不大明确的问题小心求证直至细致入微,还是非常必要的,否则注家就有可能误解或曲解作者原意,从而又误导广大读者。

杂交茄子新品种“呼茄2号”的选育

呼茄2号是以9103-1-4-2为母本,79B01-2-2-2为父本配制的一代杂种。该品种中早熟,始花节位6节~7节。果实卵圆形,果皮鲜红紫色,果肉较紧,口感好。平均单果重量400g左右,露地每667m2产量4 600kg左右.适宜露地栽培。

斛芪提取物对小鼠免疫功能影响的研究

为研究斛芪提取物对小鼠免疫功能的影响,通过对小鼠腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺(cyclophosphamid,CTX)建造免疫低下模型,分别以2 000、1 000、500 mg/kg剂量的斛芪提取物灌胃小鼠四周,比较各组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数、计算胸腺指数和脾脏指数、观察免疫器官组织切片以及检测与免疫相关CCL2基因表达量。结果表明斛芪提取物可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,斛芪提取物高、中剂量组与模型组比较有极显著性差异(p<0.01)。灌胃斛芪提取物后小鼠胸腺指数、脾脏指数均增加,且斛芪提取物高、中剂量组胸腺指数均显著高于模型组(p<0.05)。高剂量组、中剂量组脾脏指数显著高于模型组(p<0.05)。观察脾脏和胸腺组织切片,发现斛芪提取物对小鼠免疫器官损伤有修复作用。进一步通过反转录实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantification PCR,QRT-PCR)技术检测小鼠脾脏趋化因子CCL2基因表达量,证明斛芪提取物可以上调CCL2基因的表达量。以上实验证明斛芪提取物可以修复小鼠因化疗损伤造成的免疫力低下,显著增强小鼠免疫功能,提高小鼠的免疫力。

增量数据上的闭合定量高效用项集挖掘算法

高效用项集(HUI)挖掘能够提供数据集中高利润的项的组合信息,有利于在现实应用中制定有效的营销策略。然而,HUI仅提供项集及其总效用,不提供单个项的购买数量,而现实场景中项的数量能提供更精准的信息。因此,研究者提出定量高效用项集(HUQI)挖掘算法。针对当前的HUQI挖掘算法仅能处理静态数据且存在结果集冗余的问题,提出增量更新的定量效用列表结构来存储并更新数据集中项的效用信息,并基于该结构提出一种挖掘闭合定量高效用项集(CHUQI)的算法。将所提出的算法与FHUQI-Miner(Faster High Utility Quantitative Itemset Miner)算法在结果集数量、最小效用阈值、批次数目以及可扩展性上对比时间与内存消耗。实验结果表明,所提算法能够有效处理增量数据,挖掘出更有趣的项集。

扬生远红外护脐带无菌检查法方法的研究

目的:建立扬生远红外护脐带的无菌检查方法。方法:本试验取扬生远红外护脐带,按《中国药典》2010年版二部"无菌检查法"项下进行。结果:样品瓶无菌生长,六株试验菌生长良好。结论:采用方法验证II进行扬生远红外护脐带的无菌检查,可行。

槲芪癥消方对TACE治疗后Ⅲ期乙型肝炎相关性原发性肝癌正气不足、毒瘀内结证患者生存率及生活质量的影响

目的观察槲芪癥消方内服对经导管动脉化疗栓塞(TACE)治疗后Ⅲ期乙型肝炎相关性原发性肝癌正气不足、毒瘀内结证患者的生存率及生活质量的影响。方法选取TACE治疗后辨证为正气不足、毒瘀内结证的Ⅲ期乙型肝炎相关性原发性肝癌患者126例,采用随机数字表法按1∶1比例分配至试验组和对照组各63例,对照组给予西医内科对症支持治疗,试验组在对照组基础上加服槲芪癥消方。所有患者均接受为期48周的治疗,在治疗过程的第4、8、12、24、36、48周进行随访。主要疗效指标为一年生存率,次要疗效指标为卡氏评分和中医证候评分。采用Kaplan-meier法进行生存分析,用Log-rank检验比较各组生存曲线间的差异。结果试验组脱落6例,对照组脱落7例,最终试验组57例、对照组56例患者纳入统计分析。试验组患者一年生存率为56.1%(32/57),高于对照组的33.9%(19/56)(P=0.033)。试验组平均生存时间为(275.30±15.50)天,高于对照组的(227.16±17.11)天(P=0.039)。试验组32例、对照组19例患者完成各时间点卡氏评分和中医证候评分。两组患者在第4、8、12、36周时,卡氏评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);在第24、48周时,试验组的卡氏评分高于同时间点对照组(P<0.05);重复测量的方差分析发现,试验组卡氏评分下降趋势缓于对照组(F=4.47,P=0.037)。两组患者在各随访观察时点的中医证候评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者中医证候评分都有升高趋势,但重复测量的方差分析发现两组差异亦无统计学意义(F=0.31,P=0.58)。结论槲芪癥消方内服可提高TACE治疗后Ⅲ期乙型肝炎相关性原发性肝癌正气不足、毒瘀内结证患者的生存率,延长患者生存时间,提高生活质量。

虎七散诱导食管癌EC9706细胞线粒体凋亡和铁死亡的研究

目的:本研究旨在探讨虎七散能否通过调控氧化还原和线粒体稳态诱导线粒体凋亡和铁死亡,并进一步分析其对P53蛋白表达的影响。方法:线粒体凋亡试验分为空白对照组、虎七散2、4、8 mg/mL组;铁死亡试验分为空白对照组、铁抑素-110μmol/L组、联合给药组(铁抑素-110μmol/L+虎七散8 mg/mL)、虎七散8 mg/mL组。采用CCK-8法检测细胞存活率;采用试剂盒检测细胞内GSH、MDA含量,SOD活力;ROS荧光探针(DCFH-DA)、脂质过氧化荧光探针(BODIPYTM581/591C11)、线粒体膜电位探针JC-1及铁离子Phen green SK(PGSK)探针,分别测定ROS、脂质ROS、线粒体膜电位及铁离子的荧光强度;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TUNEL一步凋亡法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞线粒体凋亡蛋白(BCL-2、BAX、CytC、Active Caspase-3)、铁死亡蛋白(xCT、ACLS4、GPX4)及P53蛋白的表达。结果:通过线粒体凋亡试验,与空白对照组相比,虎七散8 mg/mL组明显抑制食管癌EC9706细胞增殖,细胞内GSH含量和SOD活力降低,ROS水平增加和线粒体膜电位单体的荧光强度增强,细胞的凋亡率升高,细胞的侵袭和迁移降低,BAX、CytC、Active Caspase-3和P53表达上调,BCL-2表达下调(P<0.05或P<0.01)。铁死亡实验结果显示,与空白对照组相比,虎七散8 mg/mL组的细胞内GSH含量减少,MDA含量增加,ROS水平增加以及线粒体膜电位单体荧光强度增强,铁离子荧光强度降低,ACSL4和P53表达上调,xCT和GPX4表达下调(P<0.05);与虎七散8 mg/mL组相比,铁抑素-110μmol/L+虎七散8 mg/mL组细胞内GSH含量增加,MDA含量降低,ROS水平及线粒体膜电位单体荧光强度均降低,铁离子荧光强度增强,ACSL4和P53蛋白表达下调,xCT和GPX4蛋白表达上调(P<0.05)。结论:虎七散有促氧化作用,能通过促进ROS和脂质ROS过度累积,调控氧化还原和线粒体稳态,诱导线粒体凋亡和铁死亡,上调P53表达;其靶向氧化还原、线粒体稳态及P53,协同线粒体凋亡和铁死亡可能是治疗癌症的潜在药物。

槲芪癥消汤联合仑伐替尼治疗Ⅲ期乙肝相关肝癌93例临床观察

目的评价槲芪癥消汤联合仑伐替尼治疗Ⅲ期乙肝相关肝癌的有效性及安全性。方法采用实用性随机对照方法,纳入Ⅲ期乙肝相关肝癌患者93例,随机分为治疗组48例,对照组45例。对照组采用仑伐替尼治疗(体重<60 kg,8 mg/次,1次/d;体重≥60 kg,12 mg/次,1次/d),治疗组在对照组用药基础上联合槲芪癥消汤中医治疗方案。两组均连续治疗24周,随访24周。主要研究终点为无进展生存期(progression-free survival,PFS),次要研究终点包括总生存期(overall survival,OS)、治疗前后生活质量症状评分、中医证候评分和安全性。结果两组患者的基线特征差异无统计学意义,治疗组延长了Ⅲ期乙肝相关肝癌患者的PFS(8.7个月vs.7.2个月,P=0.007),OS未见显著获益(14.8个月vs.13.8个月,P=0.147)。槲芪癥消汤联合治疗能够改善患者的中医证候评分及腹胀(P=0.010)、黄疸(P=0.007)、营养改变(P=0.004)3个维度的生活质量评分,且能减少手足综合征(P=0.040)、高血压(P=0.004)及疲乏(P=0.013)等不良反应。结论槲芪癥消汤联合仑伐替尼治疗可提高Ⅲ期乙肝相关肝癌患者的PFS,改善生活质量,且安全性良好。

槲芪散对肝癌前病变血清同功酶影响的研究

应用黄曲霉菌毒素B1(AFB1)诱发肝癌癌前病变模型 ,研究槲芪散对肝癌前病变血清同功酶的影响。采用琼脂糖电泳法测定各组动物血清中乳酸脱氢酶 (LDH)总活力及其同功酶、碱性磷酸酶 (ALP)同功酶、血清r 谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ (r GT Ⅱ )。结果 :模型组血清中ALP1、r GT Ⅱ、LDH的活力异常升高 ,且LDH5>LDH4 ;而用槲芪散处理后 ,这些酶的活力明显下降。