鞘氨醇激酶1调控p38和c—Jun氨基末端激酶通路影响结肠癌HT-29细胞的凋亡迁移与侵袭

目的探讨鞘氨醇激酶1（SphK1）对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（PMA）和N，N-二甲基鞘氨醇（DMS）诱导和抑制人结肠癌HT-29细胞SphK1的活化和表达，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖，流式细胞术分析细胞凋亡，γ-^32P—ATP掺入法检测SphK1的活性，Western blot检测蛋白的表达，Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PMA和DMS能分别诱导和抑制SphK1活性和表达，在24h内呈一定的时间依赖性。PMA能抑制细胞的凋亡，100nmol／LPMA作用0、6、12、24h后，细胞凋亡率分别为（9．35±0．84）％、（7．61±0．48）％、（5．53±0．76）％和（0．56±0．33）％。DMS能显著抑制细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，50μmol／LDMS作用0、6、12、24h后，细胞凋亡率分别为（9．18±0．94）％、（12．06±1．41）％、（19．80±2．36）％和（31．85±3．60）％。对照组、PMA组和DMS组的迁移细胞数分别为68．75±6．15、109．33±11．63和10．83±2．48，侵袭细胞数分别为55．42±4．50、90．58±7．06和9．58±2．39，与对照组比较，PMA组迁移和侵袭细胞数明显增多，而DMS组则显著减少。对照组、PMA组和DMS组的p38表达强度分别为0．20±0．03、0．08±0．02和0．31±0．03，磷酸化p38（p-p38）表达强度分别为0．19±0．02、0．09±0．02和0．38±0．05，应激活化蛋白激酶／c-Jun氨基末端激酶（SAPK／JNK）的表达强度分别为0．26±0．03、0．12±0．03和0．43±0．06，PMA显著抑制p38、p-p38和SAPK／JNK蛋白的表达，而DMS则促进p38、p-p38和SAPK／JNK蛋白的表达。结论SphK1可促进结肠癌HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并抑制细胞的凋亡，其机制可能是通过抑制p38和SAPK／JNK通路而发挥作用。