抗猪囊尾蚴KD26抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立和特性鉴定

目的 :建立针对猪囊尾蚴KD2 6抗原的单克隆杂交瘤细胞株 ,生产相应的单克隆抗体 ,用于囊虫病免疫保护机制的基础研究和囊虫病临床免疫诊断的应用。方法 :用SDS PAGE电泳 ,分离纯化制备猪囊尾蚴KD2 6抗原免疫 6周龄BALB/C小鼠 3次 ,无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2 /O(比率 1 0∶1 ) ,在 5 0 %PEG(4 0 0 0MW )作用下进行细胞融合 ,随后在HAT培养液中进行选择性培养、筛选和克隆 ;常规的中期染色体法分析染色体 ,单克隆抗体鉴定采用免疫双扩散法测定其免疫球蛋白亚类 ,采用ELISA法测定单抗效价并作特异性鉴定。结果 :用常规的有限稀释法对杂交瘤细胞进行了 3次筛选和克隆化后 ,获得了 1株杂交瘤XH ,染色体数为 96 ,能稳定分泌抗猪囊尾蚴KD2 6单抗 ,单抗类型为IgG1 ,抗体滴度为 1∶1 0 0 0 ,其与血吸虫、弓形虫、细粒棘球绦虫抗原均不发生交叉反应。结论 :应用杂交瘤技术获得了 1株能稳定分泌高滴度抗猪囊尾蚴KD2

抗结核杆菌耐热抗原单克隆抗体杂交瘤细胞的建立及其特性的初步鉴定

目的:建立针对结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法:BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在HAT培养液中进行选择性培养,常规有限稀释法筛选克隆和亚克隆化;用间接ELISA法测定单抗效价和特异性鉴定。结果:在细胞融合2次,筛选杂交瘤细胞3次和亚克隆化后,获得了3株杂交瘤细胞株,ⅠC12、ⅡE4、ⅡG8,效价分别为1∶32 000、1∶16 000、1∶16 000。其中ⅠC12杂交瘤株分泌的抗体仅与Mtb-HAg的蛋白峰Ⅰ有阳性反应,但ⅠC12单抗对Mtb-HAg激活人γδT细胞的活性没有明显影响。ⅡE4和ⅡG8杂交瘤株分泌的抗体与Mtb-HAg蛋白峰Ⅰ、峰Ⅱ、峰Ⅲ均无反应。结论:应用杂交瘤技术获得了三株能稳定分泌高滴度抗Mtb-HAg的单克隆抗体细胞株,其中ⅠC12对蛋白峰I有特异性。